【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及一种半日花烷型二萜生物碱类化合物及其制备方法与应用。
技术介绍
1、免疫抑制药物主要在改善移植医学、治疗自身免疫疾病、免疫相关疾病等方面应用。研究免疫抑制药物，有助于提高患者的生存率和生活质量。
2、半日花烷型二萜生物碱类化合物，主要从植物中提取得到，具有广泛的生物活性和药理作用，主要包括抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒等活性，还具有免疫调节作用，以及抗氧化、抗血栓、降血压、镇痛等多种生物活性。但不同的半日花烷型二萜生物碱类化合物，活性水平差异极大。
3、综上，研究如何获得具有良好免疫抑制活性的半日花烷型二萜生物碱类化合物，具有重大意义。
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提出一种半日花烷型二萜生物碱类化合物及其制备方法与应用。
2、本专利技术提供的半日花烷型二萜生物碱类化合物是首次从红树林植物角果木内生菜豆间座壳属真菌diaporthe phaseolorum h3-2中分离得到的3个具有免疫抑制活性的新骨架化合物diaporlabanoids a-c。
3、本专利技术的技术方案是这样实现的：
4、一种半日花烷型二萜生物碱类化合物，所述半日花烷型二萜生物碱类化合物的结构式如
5、式1或式2或式3所示：
6、
7、进一步的，本专利技术半日花烷型二萜生物碱类化合物由diaporthe phaseolorumh3-2制备，diaporthe phaseoloru
8、进一步的，本专利技术半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，包括以下步骤：
9、(1)首先用pda培养基活化phomopsis asparagi dhs-48，待菌落形态稳定、形成单一的菌落时，接种单菌落于pda培养基中，用于扩大培养；将单个菌落接种到灭菌后的大米培养基，27～29℃发酵28～30天；发酵完后用乙酸乙酯提取2～4次，减压浓缩后得到粗提物；
10、(2)将步骤(1)得到的粗提物用85-95％v/v甲醇-水混匀，加入等体积石油醚萃取2～4次；除去石油醚层，减压浓缩得到浸膏，即得提取物；
11、(3)将步骤(2)得到的提取物与100-200目正向硅胶粉充分研磨混合，硅胶粉和提取物的质量比为1.4～1.6：1，并以体积比为100-0：0-100的ch2cl2-meoh作为洗脱液进行梯度洗脱，洗脱硅胶柱，薄层色谱点板检测后，合并类似组分，共得到fr.1-fr.7共7个组分；
12、所述梯度洗脱的具体洗脱梯度按ch2cl2-meoh体积比为100:0、100:2、100:4、100:6、100:8、10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、0:100进行，共12个梯度，每个梯度洗脱体积为一个柱体积，通过减压浓缩收集12份样品，经过薄层色谱(tlc)点板检测后，合并类似组分，共得到fr.1-fr.7共7个组分；
13、(4)将步骤(3)得到的组分fr.2经硅胶柱色谱层析等度洗脱，洗脱液由体积比0.9～1.1：0.9～1.1的石油醚-乙酸乙酯组成，通过薄层色谱点板检测后合并类似组分，得到fr.2.1-fr.2.6共6个组分；
14、(5)将步骤(4)得到的组分fr.2.1采用体积比0.9～1.1：0.9～1.1的ch2cl2-meoh作为洗脱液经sephadexlh-20柱分离，减压浓缩，通过薄层色谱点板检测后合并类似组分，得到fr.2.1.1-fr.2.1.5共5个组分；
15、(6)将步骤(5)得到的组分fr.2.1..3经硅胶柱色谱层析等度洗脱，洗脱液为体积比0.9～1.1：0.9～1.1的pe-etoac，通过薄层色谱点板检测后合并类似组分，减压浓缩，干燥后得到diaporlabanoid b；
16、(7)将步骤(4)得到的组分fr.2.3采用体积比0.9～1.1：0.9～1.1的ch2cl2-meoh作为洗脱液经sephadexlh-20柱纯化，减压浓缩，干燥后得到化合物diaporlabanoid a；
17、(8)将步骤(4)得到的组分fr.2.4采用高效液相色谱法进行分离，以体积比70:30-100:0的meoh-h2o为流动相进行线性梯度洗脱，得到diaporlabanoid c。
18、进一步的，所述大米培养基包括以下重量份原料制得：大米95～105份，蛋白0.5～0.7份，粗海盐2～4份，水95～105份。
19、进一步的，所述高效液相色谱法条件：色谱柱为waters，色谱柱的规格为(5μm，10×150mm)，色谱柱的填料为c18，柱温24-26℃，流速1.5-2.5ml/min，运行时间25-35分钟，优选柱温25℃，流速2ml/min，运行时间30分钟。
20、。本专利技术半日花烷型二萜生物碱类化合物在制备免疫抑制药物中应用。
21、进一步的，所述半日花烷型二萜生物碱类化合物在制备靶向can/nfat和pkcθ/nf-κb两个级联信号通路的免疫抑制药物中应用。
22、更进一步的，所述半日花烷型二萜生物碱类化合物为化合物diaporlabanoid a。
23、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
24、(1)本专利技术提供3种新骨架的半日花烷型二萜生物碱类化合物，具有良好的免疫抑制活性，可应用于制备免疫抑制药物。
25、(2)本专利技术提供的diaporlabanoids a(化合物b-5)不仅免疫抑制活性较强，而且对正常脾细胞毒性较低，可应用于制备一种新型高效低毒的免疫抑制剂。
26、(3)经试验研究表明，diaporlabanoid a对cona诱导小鼠t淋巴细胞具有较强的免疫抑制活性且对正常脾细胞毒性较低，可用于制备靶向can/nfat和pkcθ/nf-κb两个级联信号通路的免疫抑制药物。
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1.一种半日花烷型二萜生物碱类化合物，其特征在于，所述半日花烷型二萜生物碱类化合物的结构式如式1或式2或式3所示：
2.权利要求1所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，所述化合物由Diaporthe phaseolorum H3-2制备，Diaporthe phaseolorum H3-2保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO:M20231234。
3.根据权利要求2所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，所述大米培养基包括以下重量份原料制得：大米95～105份，蛋白0.5～0.7份，粗海盐2～4份，水95～105份。
5.根据权利要求3所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，具体洗脱梯度按CH2Cl2-MeOH体积比为100:0、100:2、100:4、100:6、100:8、10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、0:100进行。
7.权利要求1所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物在制备免疫抑制药物中应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述半日花烷型二萜生物碱类化合物在制备靶向CaN/NFAT和PKCθ/NF-κB两个级联信号通路的免疫抑制药物中应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述半日花烷型二萜生物碱类化合物为化合物Diaporlabanoid A。
...【技术特征摘要】
1.一种半日花烷型二萜生物碱类化合物，其特征在于，所述半日花烷型二萜生物碱类化合物的结构式如式1或式2或式3所示：
2.权利要求1所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，所述化合物由diaporthe phaseolorum h3-2制备，diaporthe phaseolorum h3-2保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号cctcc no:m20231234。
3.根据权利要求2所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，所述大米培养基包括以下重量份原料制得：大米95～105份，蛋白0.5～0.7份，粗海盐2～4份，水95～105份。
5.根据权利要求3所述的半日花烷型二萜生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，具体洗脱梯度按ch2cl2-m...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐静，邓小林，徐志勇，冯婷，李晴，吴静婉，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：
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