【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，特别是涉及一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的应用及其作用机制的研究方法。
技术介绍
1、化疗药物诱发骨髓抑制是肿瘤患者致死的首要原因，经研究，化疗药物依托泊苷与骨髓中大量髓过氧化物酶(mpo)结合形成毒性产物是诱发骨髓抑制的主导因素。因此，在肿瘤治疗过程中，若能降低mpo的活性，减少毒性产物的形成，则可有效的缓解化疗引发的骨髓抑制，对肿瘤患者的治疗康复具有重要意义。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供了一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的应用及其作用机制的研究方法，拟从体外蛋白过渡深入到体内小鼠实验，采用体外研究和体内研究相结合的方式，从蛋白结构、流式细胞等现代分子生物技术通过药物精准结合蛋白结构位点、蛋白活性抑制及体内蛋白印迹表达等角度完整揭示人参养荣汤调控nets缓解骨髓抑制的分子生物学效应，进而推动中西医临床应用个体化精准性，为减轻患者医疗费用及治疗风险提供确凿证据。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的应用，该应用主要是利用人参养荣汤通过抑制髓过氧化物酶(mpo)活性，进而诱导活性氧(ros)降低，促进中性粒细胞胞外诱捕网(nets)降解的机制，减少化疗药物与髓过氧化物酶(mpo)结合形成的毒性产物，进而缓解化疗引发的骨髓抑制。
4、在进一步的技术方案中，所述人参养荣汤的最佳使用剂量浓度的确定，在体外蛋白选择6.25μg/ml，12.5μg/ml，25μg/ml，50μg/ml，100μg
5、本专利技术还提供了一种研究人参养荣汤治疗骨髓抑制的作用机制的方法，其技术方案如下：
6、一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的作用机制的研究方法，通过体外蛋白及细胞模型分析人参养荣汤降低髓过氧化物酶(mpo)活性，阻止骨髓抑制发生的生物学行为，结合体内小鼠实验揭示人参养荣汤抑制髓过氧化物酶(mpo)，调控中性粒细胞胞外诱捕网(nets)的分子生物学效应，对接ros-mpo-nets级联反应的效应机制，得出人参养荣汤缓解化疗后骨髓抑制的作用机制的结论。
7、在进一步的技术方案中，体外蛋白及动物模型分析的过程具体包括以下步骤：
8、s11、体外纯化髓过氧化物酶(mpo)蛋白，分析人参养荣汤对其蛋白活性影响；
9、mpo蛋白活性检测技术：使用mpo抑制剂筛选试剂盒(cayman no700170)可显著检测人参养荣汤对mpo的活性抑制；
10、s12、蛋白水解质谱技术评价人参养荣汤作用髓过氧化物酶(mpo)后表达谱的改变；
11、蛋白水解质谱技术：将1mg/ml人参养荣汤与50μg人mpo重组蛋白置于37℃孵育1小时后，在样品中加入nh4hco3溶液至终浓度50mmo l/l，加入dtt溶液使其终浓度为10mmo l/l，于56℃水浴中还原1h，加入iaa溶液使其终浓度为50mmo l/l，避光反应40min，按照胰蛋白酶与底物质量比为1:100加入胰蛋白酶，37℃酶切4小时，继续按质量比1:100加入胰酶，37℃酶切反应过夜(16h)；酶切后肽段使用自填脱盐柱脱盐，于45℃真空离心浓缩仪中挥干溶剂，将最终产物行lc-ms/ms检测；
12、s13、通过晶体结构结合质谱技术分析人参养荣汤体外结合髓过氧化物酶(mpo)的特定位点；
13、s14、不同药物浓度灌胃给药6-8周c57bl/6j小鼠，分析人参养荣汤在动物体内影响中性粒细胞胞外诱捕网(nets)的作用原理，分析得出细胞内nets级联反应的效应机制。
14、在进一步的技术方案中，体内小鼠实验具体包括以下步骤：
15、选择6-8周c57bl/6j小鼠，给予不同药物浓度及固定时间给药，通过扫描电镜，细胞流式技术，酶联免疫吸附实验(el i sa),蛋白印迹方法研究体内中性粒细胞胞外诱捕网(nets)的作用效应，得出人参养荣汤抑制髓过氧化物酶(mpo)活性介导ros下调，促进中性粒细胞胞外诱捕网(nets)的降解，从而改善化疗药物引发的骨髓抑制的作用机制的结论。
16、在进一步的技术方案中，所述小鼠模型为c57bl/6j人参养荣汤灌胃模型，该小鼠模型的构建过程如下：
17、选取小鼠，雌雄各半分成空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，1×pbs溶解不同剂量的药物每天定时灌胃，连续灌胃1个月后取小鼠骨髓行后续实验，其中，低剂量组的给药剂量为0.1g/kg.d，中剂量组的给药剂量为0.5g/kg.d，高剂量组的给药剂量为2g/kg.d。
18、本专利技术的有益效果是：
19、本专利技术拟从体外蛋白深入到体内小鼠实验，采用体外研究和体内研究相结合的方式，从蛋白纯化、蛋白水解等现代分子生物技术通过酶动力学、晶体结构解析等角度完整揭示人参养荣汤调控nets缓解骨髓抑制的分子生物学效应，进而推动中西医临床应用个体化精准性，为减轻患者医疗费用及治疗风险提供确凿证据。
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1.一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的应用，其特征在于，利用人参养荣汤通过抑制髓过氧化物酶活性，进而诱导活性氧降低，促进中性粒细胞胞外诱捕网降解的机制，减少化疗药物与髓过氧化物酶结合形成的毒性产物，进而缓解化疗引发的骨髓抑制。
2.根据权利要求1所述的人参养荣汤治疗骨髓抑制的应用，其特征在于，所述人参养荣汤的使用剂量浓度为12.53μg/ml。
3.一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的作用机制的研究方法，其特征在于，通过体外蛋白及细胞模型分析人参养荣汤降低髓过氧化物酶活性，阻止骨髓抑制发生的生物学行为，结合体内小鼠实验揭示人参养荣汤抑制髓过氧化物酶，调控中性粒细胞胞外诱捕网的分子生物学效应，对接ROS-MPO-NETs级联反应的效应机制，得出人参养荣汤缓解化疗后骨髓抑制的作用机制的结论。
4.根据权利要求3所述的人参养荣汤治疗骨髓抑制的作用机制的研究方法，其特征在于，体外蛋白及动物模型分析的过程具体包括以下步骤：
5.根据权利要求3所述的人参养荣汤治疗骨髓抑制的作用机制的研究方法，其特征在于，体内小鼠实验具体包括以下步骤：
6.根据权
...【技术特征摘要】
1.一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的应用，其特征在于，利用人参养荣汤通过抑制髓过氧化物酶活性，进而诱导活性氧降低，促进中性粒细胞胞外诱捕网降解的机制，减少化疗药物与髓过氧化物酶结合形成的毒性产物，进而缓解化疗引发的骨髓抑制。
2.根据权利要求1所述的人参养荣汤治疗骨髓抑制的应用，其特征在于，所述人参养荣汤的使用剂量浓度为12.53μg/ml。
3.一种人参养荣汤治疗骨髓抑制的作用机制的研究方法，其特征在于，通过体外蛋白及细胞模型分析人参养荣汤降低髓过氧化物酶活性，阻止骨髓抑制发生的生物学行为，结合体内小鼠实验揭示人参养荣汤抑制髓过氧化物酶，调控...
【专利技术属性】
技术研发人员：年青，刘荣兴，张靖，
申请(专利权)人：四川省医学科学院·四川省人民医院，
类型：发明
国别省市：
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