【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种il-17a mrna、tlsv纳米粒/il-17a mrna复合物在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
技术介绍
1、恶性肿瘤是导致死亡的主要重大疾病之一，其中结直肠癌为最常见的恶性肿瘤之一。目前治疗癌症的手段主要有手术治疗、放疗、化疗及免疫治疗等，为进一步提高治疗的安全性及治疗效果，基因治疗被认为是一种有潜力的创新治疗手段。其中，基于mrna的基因治疗是一种新兴的治疗策略。mrna分子可在较短时间内在细胞中表达蛋白质，发挥补充、替代和编辑等作用进而抑制肿瘤生长。相较其他形式的核酸分子，mrna因其生产效率较高，递送基因较灵活，能够避免基因组插入等优势，是肿瘤基因治疗的理想形式。肿瘤免疫基因疗法通过调控机体免疫应答而发挥抗肿瘤作用，mrna由于其上述优点，在肿瘤免疫基因治疗策略中具有一定开发潜力。然而，如何提高mrna分子的递送效率以及寻找合适的抗肿瘤免疫刺激策略是基于mrna的肿瘤免疫基因治疗当前的重要研究方向。
2、白细胞介素17a(il-17a)是il-17细胞因子家族中的一员，它作为一种细胞外分泌因子可激活免疫细胞，上调免疫趋化因子cxcl9、肿瘤杀伤因子tnf-α的表达，招募dc细胞、自然杀伤细胞(nk细胞)的抗肿瘤免疫作用，因此编码il-17a的mrna是一种潜在的免疫基因治疗靶点。
3、但目前的研究仅表明il-17a蛋白质具有抗肿瘤作用，没有关于il-17a mrna递送到细胞进行肿瘤治疗的相关研究，因此，关于il-17a的mrna是否能应用于抗肿瘤领域
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题为：现有缺乏il-17a mrna是否具有抗肿瘤效果、如何进行递送、如何抗肿瘤等研究的问题。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案为：提供了一种il-17a mrna在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
3、其中，上述用途中，所述的il-17a mrna的核苷酸序列如seq id no:1所示。
4、seq id no:1il-17amrna的核苷酸序列
5、atgagtccagggagagcttcatctgtgtctctgatgctgttgctgctgctgagcctggcggctacagtgaaggcagcagcgatcatccctcaaagctcagcgtgtccaaacactg aggccaaggacttcctccagaatgtgaaggtcaacctcaaagtctttaactcccttggcgcaaaagtgagctccagaaggccctcagactacctcaaccgttccacgtcaccctggactctccaccgcaatgaagaccctgatagatatccctctgtgatctgggaagctcagtgcc
6、gccaccag
7、cgctgtgtcaatgcggagggaaagctggaccaccacatgaattctgttctc
8、atccagcaagagatcctggtcctgaagagggagcctgagagctgccccttcactttcag
9、ggtcgagaagatgctggtgggtgtgggctgcacctgcgtggcctcgattgtccgccaggcagcc。
10、其中，上述用途中，所述il-17a mrna的使用方法为与tlsv纳米粒结合，形成tlsv纳米粒/il-17a mrna复合物。
11、进一步的，所述的tlsv纳米粒由dotap阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mpeg-pcl包裹肿瘤细胞裂解物制备得到。所述的tlsv纳米粒的平均粒径为372.93±24.51nm，平均电位为+21.40±2.77mv。
12、更进一步的，所述的tlsv纳米粒的具体组成为：dotap重量份数为1～5份，两亲性mpeg-pcl双嵌段共聚物的重量份数为45～50份，肿瘤细胞裂解物的重量份数为12～15份。
13、优选的，所述的肿瘤细胞裂解物为ct26细胞或b16细胞的裂解物。其中，所述的ct26细胞裂解物为全细胞裂解物，主要成分包括：蛋白质、核酸、脂质糖类等有机成分及其他无机成分，蛋白质浓度≤1.2mg/ml。ct26细胞裂解物中蛋白质浓度不能过高，否则得到的tlsv纳米粒无法通过静电结合mrna分子。
14、其中，上述用途中，所述的肿瘤为结直肠癌。
15、本专利技术还提供了一种tlsv纳米粒/il-17amrna复合物，所述复合物是由dotap阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mpeg-pcl包裹肿瘤细胞裂解物制备的tlsv纳米粒，与il-17amrna分子静电吸附获得。
16、优选的，所述的tlsv纳米粒的重量份数为30～40份，il-17amrna为1～5份。
17、本专利技术还提供了一种上述tlsv纳米粒/il-17amrna复合物制备方法，包括以下步骤：
18、a、将ct26细胞重悬，反复冻融并粉碎，离心收集上清液，获得细胞裂解物溶液；
19、b、称取原料，mpeg-pcl共聚物45～50份、dotap 1～5份；
20、c、将mpeg-pcl共聚物、dotap共同溶于有机相溶剂中，然后采用旋转蒸发仪，在55～60℃水浴条件下运行40～45min从而将溶剂蒸发，随后加12～15份细胞裂解物溶液水化直到完全溶解，得到tlsv纳米粒溶液；
21、d、30-40份tlsv纳米粒溶液和1～5份il-17a mrna在室温下孵育15～30分钟，得到tlsv纳米粒/il-17amrna复合物。
22、其中，上述tlsv纳米粒/il-17amrna复合物的制备方法中，步骤c所述的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或环己烷中的至少一种；所述的有机相溶剂为乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、甲醇中的至少一种。
23、本专利技术还提供了一种上述tlsv纳米粒/il-17amrna复合物在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
24、进一步的，所述的肿瘤为结直肠癌。
25、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
26、本专利技术首次发现il-17amrna可以用于制备预防或治疗肿瘤的药物，并首次对il-17a mrna的应用开发出了新的方式，即通过与tlsv纳米粒结合，形成tlsv纳米粒/il-17amrna复合物的方式进行递送。本专利技术首次针对il-17amrna开发出了递送效率高的tlsv纳米粒，两者形成的复合物可以有效地将目的基因导入细胞中，在基于il-17amrna的基因功能研究、基因治疗研究及临床应用中有很好的应用前景。本专利技术的tlsv纳米粒/il-17a mrna复合物可介导淋巴细胞在体外有效抑制ct26细胞的生长；在体内tlsv纳米粒/il-17a mrna复合物亦可以有效抑制结本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.IL-17A mRNA在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的IL-17A mRNA的核苷酸序列如SEQID:1所示。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述IL-17A mRNA的使用方法为与TLSV纳米粒结合，形成TLSV纳米粒/IL-17A mRNA复合物。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的TLSV纳米粒由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL包裹肿瘤细胞裂解物制备得到。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的TLSV纳米粒的具体组成为：DOTAP重量份数为1～5份，两亲性mPEG-PCL双嵌段共聚物的重量份数为45～50份，肿瘤细胞裂解物的重量份数为12～15份。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的肿瘤为结直肠癌。
7.一种TLSV纳米粒/IL-17A mRNA复合物，其特征在于：由DOTAP阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mPEG-PCL包裹肿瘤细胞裂解物制备的TLSV纳米粒，与IL-1
8.一种TLSV纳米粒/IL-17A mRNA复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的TLSV纳米粒/IL-17A mRNA复合物的制备方法，其特征在于：步骤c所述的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、乙醇、甲醇、乙酸乙酯或环己烷中的至少一种；所述的有机相溶剂为乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、四氯甲烷、甲醇中的至少一种。
10.权利要求7所述的TLSV纳米粒/IL-17A mRNA复合物在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.il-17a mrna在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的il-17a mrna的核苷酸序列如seqid:1所示。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述il-17a mrna的使用方法为与tlsv纳米粒结合，形成tlsv纳米粒/il-17a mrna复合物。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的tlsv纳米粒由dotap阳离子磷脂与两亲性双嵌段共聚物mpeg-pcl包裹肿瘤细胞裂解物制备得到。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的tlsv纳米粒的具体组成为：dotap重量份数为1～5份，两亲性mpeg-pcl双嵌段共聚物的重量份数为45～50份，肿瘤细胞裂解物的重量份数为12～15份。
6.根据权利要求1所述...
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