【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定食品中低聚半乳糖含量的方法，属于食品检测。
技术介绍
1、低聚半乳糖(galactooligosaccharides，gos)一般是由葡萄糖或者半乳糖与1～6个半乳糖基链连得到的低聚糖。低聚半乳糖是由2～7个聚合度组成的混合物。经芽孢杆菌atcc 31382(bacillus sp.)或米曲霉(aspergillus oryzae)生产的β-半乳糖苷酶催化水解半乳糖苷键，将乳糖水解成为半乳糖和葡萄糖，同时通过转移半乳糖苷的作用，将水解下来的半乳糖苷转移到乳糖分子，生成食品营养强化剂低聚半乳糖。并且相同聚合度的异构体种类众多，因此定性定量的难度极大。
2、低聚半乳糖由于其独特的益生作用，现被食品保健品行业广泛的应用。在市场中，存在低聚半乳糖乳制品，主要原理是利用转糖基β-半乳糖苷酶，将乳中含有的大量乳糖合成为低聚半乳糖。
3、目前，低聚半乳糖的检测方法主要有通过酶解低聚半乳糖为半乳糖的离子色谱法，利用原料做对照品的离子色谱指纹图谱测定法、高效液相色谱双柱法、气相色谱法、半制备液相色谱-离子色谱以及高效液相色谱-质谱法。但离子色谱法重复性较差，对乳糖含量较高的样品测定不准确；离子色谱指纹图谱法必须要用到相应的原料做对照品，并且需要确定原料准确的gos含量；高效液相双柱法检测限较高，只适合测定原料；气相色谱法、半制备液相色谱-离子色谱以及高效液相色谱-质谱法前处理相对复杂，或仪器普及率不高，不能很好地测定食品中的低聚半乳糖含量。此外，目前尚且缺乏能够测定食品中各聚合度的低聚半乳糖的含量的方
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种测定食品中低聚半乳糖含量的方法。本专利技术的方法能够准确测定食品中的低聚半乳糖含量，并能够得到其各聚合度的含量。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供了一种测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其包括以下步骤：
3、将样品于水中溶解后，取适量的上清液进行酶解、灭酶、衍生，得到衍生液；
4、对衍生液进行液相色谱检测；
5、基于液相色谱检测结果，采用混合有乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准标尺工作液和昆布三糖标准系列工作液对样品进行定性分析和定量分析，得到样品中低聚半乳糖的总含量以及不同聚合度的低聚半乳糖的含量。
6、在上述的方法中，优选地，所述酶解采用淀粉葡萄糖苷酶进行。
7、在上述的方法中，优选地，所述酶解是将上清液与磷酸盐缓冲溶液、淀粉葡萄糖苷酶溶液混合进行酶解。
8、在上述的方法中，优选地，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.19～0.21mol/l(以溶液中磷酸盐的总摩尔量计)，ph值为5.5～6.5。更优选地，所述磷酸盐缓冲溶液是通过以下步骤配制的：将质量比为2.2:0.6的磷酸二氢钾和磷酸氢二钾三水合物溶解于水中并稀释后，得到所述的磷酸盐缓冲溶液。
9、在上述的方法中，优选地，所述淀粉葡萄糖苷酶溶液的酶活力为150～180u/ml。更优选地，所述淀粉葡萄糖苷酶溶液是通过以下步骤配制的：将淀粉葡萄糖苷酶溶解于乙酸铵溶液中，得到所述的淀粉葡萄糖苷酶溶液。尤为优选地，所述乙酸铵溶液的浓度为0.19～0.21mol/l，ph值为4.4-4.6。
10、在上述的方法中，优选地，所述上清液、磷酸盐缓冲溶液和淀粉葡萄糖苷酶溶液的体积比为500:50:200；
11、在上述的方法中，优选地，所述酶解的温度为50～65℃，时间为60～120min；更优选地，所述酶解的温度为50～60℃，时间为60min；尤为优选地，所述酶解的温度为60℃。
12、在上述的方法中，优选地，所述灭酶的温度为90～100℃，时间为5～6min。
13、在上述的方法中，优选地，所述衍生采用2-氨基苯甲酰胺进行。
14、在上述的方法中，优选地，所述衍生是将灭酶后的混合物与2-氨基苯甲酰胺溶液混合进行。
15、在上述的方法中，优选地，所述2-氨基苯甲酰胺溶液为浓度为0.34～0.36mol/l的2-氨基苯甲酰胺和浓度为0.9～1.1mol/l的氰基硼氢化钠的乙酸-二甲基亚砜混合溶液；更优选地，乙酸与二甲基亚砜的体积比为3:7。更具体地，所述2-氨基苯甲酰胺溶液可以是通过以下步骤配制的：将质量比为476：630的2-氨基苯甲酰胺和氰基硼氢化钠用乙酸-二甲基亚砜溶液溶解并混合均匀，得到所述的2-氨基苯甲酰胺溶液；其中，2-氨基苯甲酰胺和氰基硼氢化钠的总量与乙酸-二甲基亚砜溶液的用量比为1106mg：10ml。
16、在上述的方法中，优选地，所述灭酶后的混合物与所述2-氨基苯甲酰胺溶液的体积比为20:200。
17、在上述的方法中，优选地，所述衍生的温度为55～65℃(更优选为60℃)，时间为60～120min。
18、根据本专利技术的具体实施方式，优选地，上述测定食品中低聚半乳糖含量的方法具体包括以下步骤：
19、(1)将样品于水中溶解并定容，然后混合均匀并超声处理，得到第一混合液；
20、(2)取适量的第一混合液的上清液，加入磷酸盐缓冲溶液和淀粉葡萄糖苷酶溶液，混合均匀，得到第二混合液；
21、(3)将第二混合液在50～65℃保温60～120min进行酶解，得到酶解液；
22、(4)将酶解液在90～100℃保温5～6min后，再放置到4℃～室温冷却，得到灭酶后的混合物，然后取适量的灭酶后的混合物，加入2-氨基苯甲酰胺溶液，在55～65℃保温60～120min进行衍生，得到衍生液；
23、(5)将所述衍生液放置到室温冷却后，加入乙腈溶液，混合均匀，过滤膜后，进行液相色谱检测。
24、在上述的方法中，优选地，基于液相色谱检测结果，采用混合有乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准标尺工作液和昆布三糖标准系列工作液对样品进行定性分析和定量分析包括：
25、分别配制混合有乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准标尺工作液和昆布三糖标准系列工作液，然后分别取适量的标准标尺工作液、标准系列工作液，加入乙酸铵溶液和磷酸盐缓冲溶液，混合均匀；然后在50～65℃保温60～120min；之后在90～100℃保温5～6min后，再放置到4℃～室温冷却，然后分别取适量的标准标尺工作液、标准系列工作液，加入2-氨基苯甲酰胺溶液，在55～65℃保温60～120min进行衍生，放置到室温冷却后，加入乙腈溶液，混合均匀后，过滤膜，之后分别进行液相色谱检测。其中，更优选地，所述乙酸铵溶液的浓度为0.19～0.21mol/l，ph值为4.4-4.6。更优选地，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.19～0.21mol/l(以溶液中磷酸盐的总摩尔量计)，ph值为5.5～6.5，其具体配制步骤如上文所述。更优选地，所述标准标尺工作液、所述磷酸盐缓冲溶液与所述乙本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述酶解采用淀粉葡萄糖苷酶进行；
3.根据权利要求1所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述衍生采用2-氨基苯甲酰胺进行；
4.根据权利要求1-3任一项所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，基于液相色谱检测结果，采用混合有乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准标尺工作液和昆布三糖标准系列工作液对样品进行定性分析和定量分析包括：
6.根据权利要求1或5所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述定性分析包括：
7.根据权利要求6所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述基于标准标尺工作液的液相色谱检测结果得到麦芽糖系列化合物的相对保留时间，建立麦芽糖的聚合度与相对保留时间的关系曲线，获得麦芽糖系列化合物的相对保留时间与麦芽糖的聚合度的关系式包括：
<...【技术特征摘要】
1.一种测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述酶解采用淀粉葡萄糖苷酶进行；
3.根据权利要求1所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述衍生采用2-氨基苯甲酰胺进行；
4.根据权利要求1-3任一项所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，基于液相色谱检测结果，采用混合有乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准标尺工作液和昆布三糖标准系列工作液对样品进行定性分析和定量分析包括：
6.根据权利要求1或5所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述定性分析包括：
7.根据权利要求6所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述基于标准标尺工作液的液相色谱检测结果得到麦芽糖系列化合物的相对保留时间，建立麦芽糖的聚合度与相对保留时间的关系曲线，获得麦芽糖系列化合物的相对保留时间与麦芽糖的聚合度的关系式包括：
8.根据权利要求7所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，基于麦芽糖的相对保留时间与麦芽糖的聚合度的关系式，结合不同聚合度的低聚半乳糖对应的gu值范围确定不同聚合度的低聚半乳糖的起始相对保留时间、中止相对保留时间包括：
9.根据权利要求6或8所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，基于不同聚合度的低聚半乳糖的起始相对保留时间、中止相对保留时间获得不同聚合度的低聚半乳糖的起始保留时间、中止保留时间通过以下公式进行：
10.根据权利要求6或9所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，基于不同聚合度的低聚半乳糖的起始保留时间、中止保留时间进行定性分析包括：
11.根据权利要求1或5所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述定量分析包括：
12.根据权利要求1-11中任一项所述的测定食品中低聚半乳糖含量的方法，其中，所述测定...
【专利技术属性】
技术研发人员：武伦玮，林慧，徐春祥，孙彦敏，陶飞，段国霞，唐烁，刘丽君，李翠枝，罗俊溢，付永刚，
申请(专利权)人：内蒙古伊利实业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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