一种显著提高外源基因在植物中转化效率、表达水平以及遗传稳定性的方法技术

本发明专利技术涉及一种显著提高外源基因在植物中转化效率、表达水平以及遗传稳定性的方法。利用核基质分离法，从烟草中分离的一段核基质结合序列（ＭＡＲ）ＴＭ６构建到不同启动子驱动下的单／双子叶植物表达载体报告基因表达盒的两端，通过农杆菌介导法导入植株。获得转基因植物中，携带有ＴＭ６的外源基因的表达量比未携带ＴＭ６的高１０倍，其转化效率提高了４０％，同时转有ＭＡＲ的转基因植物将外源基因在后代个体间的遗传稳定性提高了３０％。同时ＴＭ６可以作为增强子元件显著提高启动子的表达强度，但并不改变启动子的表达模式。因此，ＴＭ６可以用于植物基因工程，能有效的提高外源基因在植物中得转化效率，表达水平及转基因后代遗传稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核基质结合序列(MAR)TM6的功能及应用，属于分子生物学和生物技 术领域。用MAR序列改造常用的单子叶植物表达载体PCAMBIA1301及双子叶植物表达载体 PBI121，使其携带的外源基因在植物中的转化效率、表达水平以及遗传稳定性得到显著提尚ο
技术介绍
转基因技术广泛的应用于物种改良和分子生物学的基础研究，随着大量转基因植 物的获得，人们发现外源基因沉默和外源基因表达量过低的问题普遍存在(Fagard M, et al. ,Annu RevPlant Physiol Plant Mol Biol,2000,51 167-194)。近年来研究表明将MAR 序列构建到表达载体外源基因表达盒的两侧可以消除基因沉默的现象，能够增强基因表达 或降低转基因在转化个体间的表达差异(Spiker S，et al.，Plant Physiol, 1996,110 15-21)，具有广泛的应用价值。本专利技术人同时结合实验室自身分离的不同类型的启动子，如光合组织特异启动子 PNZIP，冷诱导启动子DREB及C0R15等，我们分析了在MAR调控下不同类型启动子在转基 因植物中的表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
一种显著提高外源基因在植物中转化效率、表达水平以及遗传稳定性的方法，其特征在于核基质结合序列TM6具有下述所示的核苷酸序列tttaccgtag accaagttaa ggagttttag aagcactttg catgggagca ttagtgtatg60ttatggcttt atcaaatata ggttttgaag attcagagag ccaagaaaag ctagaaccca120agaactagga agttagagta attcacaata ccataacgtg atataaaact ttttattgta180actcaaatcg gtaatatttt ttgctttagt cttaatcgat aaattatttt tttatattga240ttagttatag gaggctcaca aagttgggaa taattaaaat atcatatttt gtatttgaac300aatttatgaa atagtaattg gtaaaaaatc actttaaatt tttatcctat atcc...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑成超，冀芦沙，卢龙涛，许瑞，吴长艾，杨国栋，黄金光，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：37