一种抑制由酶酪蛋白激酶2(CK2)介导的磷酸化的线性肽，其具有选自由标识为SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:57‑SEQ ID NO:62的序列组成的组的氨基酸序列，以及包含所述肽和胞内穿透肽的多肽。一种药物组合物，其包含这些线性肽或多肽中的至少一种和药学上可接受的载体。本发明专利技术还公开了所述肽或多肽用于制造药物的用途，以及治疗其中施用了所述药物的实体瘤或液体瘤的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及分子药理学和人类医学领域。具体而言，本专利技术涉及获得线性肽，所述线性肽通过与底物上的磷酸受体位点直接相互作用来抑制由酶酪蛋白激酶2(ck2)介导的磷酸化事件。由于其生物活性，本专利技术的肽和多肽可用于治疗不同类型的实体瘤和其它来源的实体瘤。先前的技术ck2是参与增加细胞增殖的丝氨酸/苏氨酸酶，在恶性转化过程中其细胞内定位基本上是细胞核内的(tawfic s.等人，2001,histol.histopathol.16:573-582)。因此，这种酶构成了有吸引力的治疗靶点。(duncan j.s.等人，2008,biochim.biophys.acta,1784:33-47)。通过使用衍生自4,5,6,7-四溴苯并三唑(tbb)的化合物(pagano m.a.等人，2004,j.med.chem.,47:6239-6247)、反义寡核苷酸(slaton j.w.等人，2004,mol.cancer res.2:712-720)和阻断该酶的催化亚基与调节亚基之间相互作用的肽(laudet b.等人，2007,biochem.j.,408:363-373)，已经在实验肿瘤学中操纵了由ck2酶介导的磷酸化事件。化合物cx-4945抑制ck2酶的两个催化亚基(siddiqui-jain a.等人，2010,cancer res.70:10288-10298)，并且是体外细胞增殖的强效抑制剂，平均最大抑制浓度(ic50)为5.5μm。然而，需要高剂量的该化合物(25和75mg/kg)和积极的给药方案来抑制体内肿瘤生长。只有这种ck2酶抑制剂在人中得到令人满意的评估，其中在i期临床研究中记录了有利的药代动力学和安全性参数(lim j.k.c.等人，2010,cancer res.70:2763-2766)。首次用名为cigb-300的肽(专利申请w003/054002；perea s.e.，等人，2004，cancer res.，64:7127-7129)描述了通过分子与底物中ck2酶的磷酸受体位点直接相互作用抑制这种磷酸化事件。cigb-300肽是嵌合分子，其含有与底物上的ck2磷酸受体位点相互作用的环肽和来自人免疫缺陷病毒(hiv)的tat1蛋白的“胞内穿透”肽，以保证其在细胞中的内化。cigb-300已在体外和体内在各种实体瘤(诸如肺、子宫颈、喉)的细胞株(perera y.等人，2014,molclinoncol,2(6):935-944)中和液体瘤诸如慢性淋巴细胞白血病(martins l.等人，2013,oncotarget,5(1):258-263)和t型急性淋巴母细胞性白血病(perera y.等人，cancers,12,1377)中表示出抗增殖和促凋亡特性。另外，这种肽显示出在i/ii期临床研究中得到证实的临床获益的迹象(perea s.等人，2011,mol cell biochem.,356(1-2):45-50)(sarduy m.等人，2015,br.j.cancer,112:1636-1643)。然而，cigb-300是在其序列中含有甲硫氨酸和分子内二硫键的25个氨基酸的肽。这些是分子中化学不稳定性的来源，并且可能是产品开发的更高阶段中不一致的原因，无论是在液体中还是在冻干制剂中以及在稳定性研究中。(frokjaer s.等人，2000,pharmaceutical formulation development of peptides and proteins.taylor&francis)。这种肽中存在的主要杂质归因于甲硫氨酸的氧化和聚集体(二聚体和三聚体)的形成(由于分子间二硫键的形成而导致的)。(garay h.等人，2018,j pept sci.24(6):e3081)。另一方面，含半胱氨酸肽的合成过程更加繁琐。(albericio f.等人，2000,fmocsolid phase peptide synthesis.a practical approach.oxford university pressinc,new york.第4章，77-114)，并且分子内二硫键的形成在生产过程中引入了额外的步骤，这增加了生产成本。因此，对于开发针对不同类型肿瘤的疗法，获得由ck2酶介导的磷酸化的抑制剂仍然是令人感兴趣的，所述抑制剂是线性肽类型的，具有更小的大小和结构复杂性，其合成更简单和更便宜。专利技术描述本专利技术通过提供线性肽解决了上述问题，所述线性肽抑制由ck2介导的磷酸化，并且具有选自由标识为seq id no:45、seq id no:49、seq id no:50和seq id no:57-seq idno:62的序列组成的组的氨基酸序列。这些序列如下所示：这些肽不同于cigb-300，因为它们是线性的，大小更小，化学性质更稳定。它们在其序列中没有甲硫氨酸或半胱氨酸，这是有利方面。另外，从生产的角度来看，这种获得更可行。就它们与人乳头瘤病毒(hpv)-16的e7底物上ck2酶的磷酸受体位点(lndsseeedei)相互作用的能力以及其抑制由ck2介导的这种癌蛋白的磷酸化的能力选择被标识为seq id no:45、seq id no:49、seq id no:50和seq id no:57-seq id no:62的线性肽。如在本专利技术的实施例中所见，这些线性肽能够以与肽cigb-300相似的方式抑制由ck2介导的e7蛋白的磷酸化。为了实现对内源性ck2底物的细胞内作用，可将本专利技术的肽与“胞内穿透”肽化学缀合，所述胞内穿透肽属于诸如hiv的tat1蛋白(schwarze s.r.等人，2000,trendspharmacol,21:45-48)、单纯疱疹病毒vp22蛋白(lindgreen m.等人，2000,trendspharmacolsci,21:99-103)、penetratin和转运素(transportan)(gariepy j.等人，2001,trends biotech 19:21-28)等的蛋白质。因此，本专利技术还提供了包含线性肽的多肽和一种细胞穿透肽，所述线性肽具有选自标识为seq id no:45、seq id no:49、seq id no:50和seq id no:57-seq id no:62的序列的氨基酸序列。在本专利技术的一个实施方案中，这些多肽中的胞内穿透肽是来自hiv的tat1蛋白的肽。在其一个实施方案中，胞内穿透肽具有标识为seq id no:65或seq id no:66的氨基酸序列。在特定的实施方案中，本专利技术的多肽具有选自由标识为seq id no:35、seq idno:47、seq id no:48和seq id no:51-seq id no:56的序列组成的组的氨基酸序列。这些序列如下所示：a)seq id no:35 grkkrrqrrrppq-βa-rkrsrywpb)seq id no:47 grkkrrqrrrppq-βa-rkrwrywpc)seq id no:48 grkkrrqrrrppq-βa-rkrswywpd)seq id no:51 ac-grkkrrq(d-arg)rrppq-β本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制由酪蛋白激酶2(CK2)介导的磷酸化的线性肽，其特征在于具有选自由标识为SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:57-SEQ ID NO:62的序列组成的组的氨基酸序列。
2.一种多肽，其包含权利要求1的抑制由酶酪蛋白激酶2(CK2)介导的磷酸化的线性肽和胞内穿透肽。
3.权利要求2的多肽，其中所述胞内穿透肽是来自人免疫缺陷病毒的Tat1蛋白的肽。
4.权利要求2的多肽，其中所述胞内穿透肽具有被标识为SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
5.权利要求4的多肽，其具有选自由标识为SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:51-SEQ ID NO:56的序列组成的组的氨基酸序列。
6.一种药物组合物，其包含至少一种权利要求1的抑制由酪蛋白激酶2(CK2)介导的磷酸化的线性肽或权利要求2-5中任一项的多肽以及药学上可接受的赋形剂。
7.权利要求6的药物组合物，其经配制用于通过全身、瘤内、口服或粘膜途径施用。
8.权利要求6的药物组合物，其对于治疗实体瘤或液体瘤是有用的。
9.权利要求1的抑制由酪蛋白激酶2(CK2)介导的磷酸化的线性肽或权利要求2-5中任一项的多肽用于制备药物的用途。
10.根据权利要求9的用途，其中所述药物用于治疗实体瘤或液体瘤。
11.一种治疗有需要的个体的实体瘤或液体瘤的方法，其包括施用治疗有效量的权利要求6的药物组合物。
12.权利要求11的治疗方法，其中所述实体瘤为肺、子宫颈、喉、胰腺或膀胱的实体瘤。
13.权利要求11的治疗方法，其中所述液体瘤为慢性淋巴细胞白血病、T型急性淋巴母细胞性白血病或急性髓细胞样白血病。
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种抑制由酪蛋白激酶2(ck2)介导的磷酸化的线性肽，其特征在于具有选自由标识为seq id no:45、seq id no:49、seq id no:50和seq id no:57-seq id no:62的序列组成的组的氨基酸序列。
2.一种多肽，其包含权利要求1的抑制由酶酪蛋白激酶2(ck2)介导的磷酸化的线性肽和胞内穿透肽。
3.权利要求2的多肽，其中所述胞内穿透肽是来自人免疫缺陷病毒的tat1蛋白的肽。
4.权利要求2的多肽，其中所述胞内穿透肽具有被标识为seq id no:65或seq id no:66的氨基酸序列。
5.权利要求4的多肽，其具有选自由标识为seq id no:35、seq id no:47、seq id no:48和seq id no:51-seq id no:56的序列组成的组的氨基酸序列。
6.一种药物组合物，其包含至少...
【专利技术属性】
技术研发人员：Y·马斯福罗尔冈萨雷斯，H·E·加雷派雷兹，O·乐耶斯阿克斯塔，Y·佩雷拉尼格林，E·卡瓦列罗门嫩德斯，L·J·冈萨雷斯洛佩斯，V·A·贝萨达佩雷斯，S·E·派雷罗德里圭兹，G·E·吉伦涅托，S·冈萨雷斯布兰科，
申请(专利权)人：遗传工程与生物技术中心，
类型：发明
国别省市：
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