【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及核苷酸序列确定方法。
技术介绍
1、多核苷酸内，脱氧核糖链状连结后的分子称为dna链。一般情况下，在生物体内，相对于一条dna链，由互补碱基构成的另一条dna链形成螺旋状络合的双链构造。所谓互补碱基，对于腺嘌呤(a)相当于胸腺嘧啶(t)，对于胞嘧啶(c)相当于鸟嘌呤(g)。各个互补碱基经由氢键结合进行配对。另外，本说明书中，为了方便起见，将一条链称为顶链，将另一条链称为底链。此外，将通过分析获得多核苷酸的碱基序列信息的步骤称为测序。
2、多核苷酸的碱基序列信息用于病原体的鉴定、与癌症关联的基因组dna上的突变的检测、耐药性和有效性及预后的预测。鉴于对受试者的健康的影响，通过分析得到的信息的精度必须高。
3、如上所述，如果碱基对的一方确定，则能唯一地鉴定另一方。因此，在原理上测序只对一条链执行即可。但实际上，由于装置的故障、操作的失误等各种原因而导致精度下降。因此，出于提高序列信息的精度的目的，有时对双链dna分别进行测序。
4、例如，专利文献1中公开了一种分析对象dna片段中的核苷酸的共有序列的决定方法，包含通过共价键连结分析对象dna片段的顶链和底链的末端的阶段、以及通过基于聚合酶的测序法对顶链和底链双方进行测序的阶段。
5、此外，专利文献2中公开了用于决定靶多核苷酸中的1个以上的核苷酸的序列的方法，靶特异性引物包含靶结合片段和不与该靶结合的迁移率降低部分。
6、此外，专利文献3中公开了如下情况：通过使用不同长度的多核苷酸所组成的tail(尾)来降低pc
7、现有技术文献
8、专利文献
9、专利文献1：日本专利特表2011-515102号公报
10、专利文献2：日本专利特表2002-536980号公报
11、专利文献3：美国专利第6197510号说明书
技术实现思路
1、专利技术所要解决的技术问题
2、专利文献1公开的技术中，制作了用发夹环连接双链dna的单末端而得的分子、或用发夹环连接两个末端而得的环状分子。然而，为了制作这样的分子，需要经由发夹环的分子的连结、提纯这样繁琐的作业。此外，专利文献2和专利文献3记载的技术是对双链dna中的一个链进行分析的方法。
3、本专利技术的目的在于提供一种核苷酸序列确定方法，在1个反应系统中进行双链dna的分析，同时抑制成本和工夫。
4、用于解决技术问题的技术手段
5、为了解决上述问题，本专利技术是确定构成双链的靶多核苷酸互补对中的1个以上的核苷酸序列的核苷酸序列确定方法，其包括：使用包含与所述靶多核苷酸互补对的一个靶多核苷酸的一部分进行氢键结合来形成互补对的靶识别部位在内的第1引物，来确定所述一个靶多核苷酸中的1个以上的核苷酸序列的步骤；以及使用包含与所述靶多核苷酸互补对的另一个靶多核苷酸的一部分进行氢键结合来形成互补对的靶识别部位、以及停止dna聚合酶对核苷酸的延伸反应的反应停止部位在内的第2引物，来确定所述另一个靶多核苷酸中的1个以上的核苷酸序列的步骤，所述第2引物在所述另一个靶多核苷酸上使互补链延伸而得到的第2反应产物的迁移率相对于所述第1引物在所述一个靶多核苷酸上使互补链延伸而得到的第1反应产物更小。
6、专利技术效果
7、根据本专利技术，能提供一种核苷酸序列确定方法，在1个反应系统中进行双链dna的分析，同时抑制成本和工夫。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种核苷酸序列确定方法，确定构成双链的靶多核苷酸互补对中的1个以上的核苷酸序列，所述核苷酸序列确定方法的特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
3.如权利要求1所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
4.如权利要求3所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
5.如权利要求1所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
6.如权利要求1所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
7.如权利要求1所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，所述第1反应产物和所述第2反应产物通过电泳来分离并进行检测，所述第1引物和第2引物用放射性同位素来标记。
8.如权利要求3所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种核苷酸序列确定方法，确定构成双链的靶多核苷酸互补对中的1个以上的核苷酸序列，所述核苷酸序列确定方法的特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
3.如权利要求1所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
4.如权利要求3所述的核苷酸序列确定方法，其特征在于，
5.如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：隅田周志，加藤宏一，藤冈满，
申请(专利权)人：株式会社日立高新技术，
类型：发明
国别省市：
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