【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于合成生物学，尤其是涉及一种新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗及应用。
技术介绍
1、致新生儿脑膜炎大肠杆菌(neonetal meningitis escherichia coli，nmec)是引起新生儿细菌性脑膜炎最常见的病原菌之一，伴有较高的死亡率。nmec能够突变、获取和传递质粒和其他编码抗性基因的移动遗传元件，这使得其能够对几乎所有的常见抗菌药物产生耐药性。近年来，nmec对治疗单纯性尿路感染的传统药物复方磺胺甲恶唑(sxt)的耐药性逐年增强，许多临床nmec分离株还获得了编码超广谱内酰胺酶(esbl)的基因，这些基因赋予了其对超广谱头孢菌素、氨曲南、氨基糖苷类和四环素类抗生素的多重抗性。在早产儿中，由多重耐药nmec引起的早发性新生儿败血症发病率呈上升趋势。此外，针对nmec的新型抗生素的研发难度越来越大，研发速度较为迟缓，这使得nmec的抗生素治疗愈发困难，开发新型的nmec治疗方案成为亟待解决的问题。
2、有效的nmec疫苗可以预防感染并降低多重耐药nmec菌株的流行。细菌表面多糖(o抗原、k抗原)可作为细菌的保护性抗原，免疫后可以刺激成熟的b淋巴细胞，激发免疫系统产生抗体以保护机体免受随后同源病菌的侵袭。根据这些表面多糖设计的多糖结合疫苗主要诱导没有t细胞参与的免疫反应，产生低亲和力抗体igm+，且不能形成有效的免疫记忆，无法对2岁以下的婴儿发挥免疫作用。细菌表面多糖可以与载体蛋白共价偶联形成多糖蛋白结合疫苗，这类疫苗可以作为t细胞依赖性抗原诱导高亲和力免疫反应，从而诱导b细胞增殖分化为
3、糖蛋白疫苗弥补了多糖疫苗的缺陷，是有史以来最安全、最有效的疫苗之一。近年来，利用原核糖基化系统进行体内生物偶联技术使得糖偶联技术取得了重要进步。体内生物偶联技术是指工程细菌细胞内多糖和载体蛋白的生物合成及其随后通过使用寡糖基转移酶进行的体内偶联。与传统的化学偶联方法相比，生物偶联技术为糖偶联疫苗的开发和生产提供了一种更高效、更节省成本的策略。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供一种新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗及应用。
2、本专利技术采用的技术方案是：一种新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，包括一种或多种免疫缀合物，免疫缀合物由新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖与载体蛋白耦联形成。
3、优选地，血清型新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖为o1、o5、o6、o7、o18或o45；
4、载体蛋白为血流感杆菌表面蛋白hid、肺炎链球菌pspa蛋白、白喉毒素载体蛋白crm197或霍乱毒素b亚基ctb，优选为霍乱毒素b亚基ctb。
5、优选地，由血清型新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖o6、o18和o45分别与霍乱毒素b亚基ctb耦合的糖蛋白混合而成；
6、或者由血清型新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖o1、o5、o6、o7、o18和o45分别与霍乱毒素b亚基ctb耦合的糖蛋白混合而成的六价疫苗。
7、新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的制备方法，构建含有能够表达得到新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖质粒和表达得到载体蛋白质粒的重组工程菌，培养后产生新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖与载体蛋白耦联的免疫缀合物，提取纯化后能够用于制备疫苗原液。
8、优选地，重组工程菌删除zwf、pfkb、glgc、wecg、wecc、usha、wcaj、wcaa-i和waal基因。
9、优选地，能够表达得到新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖质粒通过将大肠杆菌o1、o5、o6、o7、o18或o45的galf-wzz区域克隆到酵母-大肠杆菌穿梭载体pcrg16中得到；
10、能够表达得到载体蛋白质粒通过将hid、pspa、crm197或ctb分别于经过大肠杆菌密码子优化的o-糖基转移酶编码基因克隆到pcdfduet-1质粒中得到。
11、优选地，能够表达得到载体蛋白质粒中由两对p15启动子和bba_b1004终止子替代原始t7启动子和终止子；
12、优选地，o-糖基转移酶基因来自于脑膜炎奈瑟氏球菌、贝氏不动杆菌、淋病奈瑟球菌、铜绿假单胞菌、乳糖奈瑟球菌或多糖奈瑟球菌，优选为来自脑膜炎奈瑟球菌的pgll。
13、一种重组工程菌，能够产生制备新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗所需的糖蛋白。
14、优选地，重组工程菌删除了zwf、pfkb、glgc、wecg、wecc、usha、wcaj、wcaa-i和waal基因。
15、新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗在制备预防nmec感染药物中的应用。
16、本专利技术具有的优点和积极效果是：版专利技术所涉及的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，能够刺激小鼠产生保护性抗体，保护率可达90％以上，并可通过母婴传递将抗体传递给新生小鼠，保护其免于感染。
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1.一种新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，其特征在于：包括一种或多种免疫缀合物，免疫缀合物由新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖与载体蛋白耦联形成。
2.根据权利要求1所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，其特征在于：血清型新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖为O1、O5、O6、O7、O18或O45；
3.根据权利要求1所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，其特征在于：由血清型新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖O6、O18和O45分别与霍乱毒素B亚基CTB耦合的糖蛋白混合而成；
4.权利要求1-3中任一所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于：构建含有能够表达得到新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖质粒和表达得到载体蛋白质粒的重组工程菌，培养后产生新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖与载体蛋白耦联的免疫缀合物，提取纯化后能够用于制备疫苗原液。
5.根据权利要求4所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于：所述重组工程菌删除zwf、pfkB、glgC、wecG、wecC、ushA、wcaJ、wcaA-I和waaL基因。<...
【技术特征摘要】
1.一种新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，其特征在于：包括一种或多种免疫缀合物，免疫缀合物由新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖与载体蛋白耦联形成。
2.根据权利要求1所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，其特征在于：血清型新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖为o1、o5、o6、o7、o18或o45；
3.根据权利要求1所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗，其特征在于：由血清型新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖o6、o18和o45分别与霍乱毒素b亚基ctb耦合的糖蛋白混合而成；
4.权利要求1-3中任一所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于：构建含有能够表达得到新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖质粒和表达得到载体蛋白质粒的重组工程菌，培养后产生新生儿脑膜炎大肠杆菌表面多糖与载体蛋白耦联的免疫缀合物，提取纯化后能够用于制备疫苗原液。
5.根据权利要求4所述的新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于：所述重组工程菌删除zwf、pfkb、glgc、wecg、we...
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