【技术实现步骤摘要】
本公开一般地涉及横向流测定装置、测试系统和方法。更具体地，本公开涉及确定样品中多种分析物的存在和浓度的横向流测定装置，包括当一种或多种目标分析物以高浓度存在和一种或多种目标分析物以低浓度存在时。当在单次施加中将单个样品施加于单个横向流测定物时，可以确定多种分析物中每种的精确浓度，包括当第一目标分析物在单个样品中以单个样品中第二目标分析物的浓度的百万分之一存在时。
技术介绍
1、包括本文描述的横向流测定物的免疫测定系统提供了可靠、廉价、便携、快速和简单的诊断测试。横向流测定物可以快速且准确地检测样品中目标分析物的存在与否，在某些情况下还可以定量样品中的目标分析物。有利地，横向流测定物可以是微创的，并且可以用作床旁测试系统(point-of-care testing systems)。已经开发了横向流测定物来检测多种医学或环境分析物。在夹心形式的横向流测定物中，针对目标分析物的标记的抗体被沉积在样品接收区中或附近的测试条上。标记的抗体可以包括例如与抗体结合的检测器分子或“标记”。当将样品施加到测试条上时，样品中存在的分析物被标记的抗体结合，该标记的抗体沿着测试条流到捕获区，在捕获区，针对分析物的固定抗体与标记的抗体-分析物复合物结合。固定在捕获线上的抗体可能与沉积在样品接收区中或附近的标记的抗体不同。检测捕获的复合物，并确定分析物的存在。在分析物不存在的情况下，标记的抗体沿着测试条流动，而穿过捕获区。捕获区信号缺乏表明分析物不存在。可以开发多重测定物以检测在施加于横向流测定物的单个样品中存在的超过一种的目标分析物，但是这种测定物具有
技术实现思路
1、因此，本公开的方面是提供用于当样品中第一分析物以高浓度存在，而样品中第二不同分析物以低浓度(包括但不限于高浓度的百万分之一的浓度)存在时，检测样品中多种目标分析物的存在和浓度的改进的横向流测定物。
2、在本公开的一个实施方式中，提供了检测样品中以不同浓度存在的第一目标分析物和第二目标分析的方法。方法包括提供横向流测定物，其包括与横向流测定物的流动路径连接的第一复合物，该第一复合物包括特异性结合第一分析物的标记物、抗体或其片段，以及第一分析物。横向流测定物还包括连接至流动路径并配置为特异性结合第二分析物的标记的第二抗体或其片段。横向流测定物进一步包括在第一复合物下游的第一捕获区，第一捕获区包括对第一分析物具有特异性的第一固定捕获剂。横向流测定物还包括在标记的第二抗体或其片段下游并且包括对第二分析物具有特异性的第二固定捕获剂的第二捕获区。该方法还包括将样品施加到第一复合物和标记的第二抗体或其片段上；和使第二分析物与标记的第二抗体或其片段结合以形成第二复合物。该方法进一步包括使流体样品和第一复合物流动到第一捕获区，其中流体样品中的第一分析物和第一复合物竞争结合第一捕获区中的第一固定捕获剂；和使第二复合物在流动路径中流动到第二捕获区，并使第二复合物与第二捕获区中的第二固定捕获剂结合。该方法还包括检测来自在第一捕获区中结合至第一固定捕获剂的第一复合物的第一信号和在第二捕获区中结合至第二固定捕获剂的第二复合物的第二信号。
3、在本公开的另一个实施方式中，提供了配置为检测在流体样品中以不同浓度存在的第一目标分析物和第二目标分析物的横向流测定物。所述横向流测定物包括连接至横向流测定物的流动路径的第一复合物，第一复合物包括与第一分析物特异性结合的标记物、抗体或其片段，和第一分析物；连接至流动路径并被配置为特异性结合第二分析物的标记的第二抗体或其片段；第一复合物下游的第一捕获区，该第一捕获区包括对第一分析物具有特异性的第一固定捕获剂；和标记的第二抗体或其片段下游并包括对第二分析物具有特异性的第二固定捕获剂的第二捕获区。
4、在本公开的仍另一个实施方式中，提供了测定测试条。测定测试条包括配置为接收流体样品的流动路径；连接至流动路径的样品接收区；和连接至接收区下游的流动路径的检测区。检测区包括第一捕获区、第二捕获区和第三捕获区。第一捕获区包括对第一目标分析物具有特异性的第一固定捕获剂，第二捕获区包括对第二目标分析物具有特异性的第二固定捕获剂，和第三捕获区包括对第三目标分析物具有特异性的第三固定捕获剂。测定测试条还包括第一复合物，该第一复合物在第一阶段中连接至流动路径并且配置为在第二阶段中在流体样品存在的情况下在流动路径中流动至检测区。第一复合物包括标记物、特异性结合第一目标分析物的第一抗体或其片段，以及第一目标分析物。测定测试条进一步包括特异性结合第二目标分析物的标记的第二抗体或其片段，标记的第二抗体或其片段在第一阶段中连接至流动路径并配置为在第二阶段中在流体样品存在的情况下在流动路径中流动至检测区。测定测试条还包括特异性结合第三目标分析物的标记的第三抗体或其片段，标记的第三抗体或其片段在第一阶段中连接至流动路径并配置为在第二阶段中在流体样品存在的情况下在流动路径中流动至检测区。
5、在本公开的仍进一步实施方式中，提供了诊断测试系统。诊断测试系统包括如上描述的测定测试条；读取器，其包括光源和检测器，以及数据分析器。
6、在本公开的另一实施方式中，提供了确定流体样品中多种目标分析物中每一种的存在或浓度的方法。方法包括当在第一阶段中第一复合物、标记的第二抗体或其片段、以及标记的第三抗体或其片段各自与流动路径连接时，将流体样品施加至上述测定测试条。方法还包括将第二分析物(如果流体样品中存在)与标记的第二抗体或其片段结合，从而形成第二复合物；将第三分析物(如果流体样品中存在)与标记的第三抗体或其片段结合，从而形成第三复合物；将第一复合物、第二复合物(如果形成)和第三复合物(如果形成)与流体路径脱离；在第二阶段中使流体样品流到检测区；在第一捕获区中使第一复合物与第一固定捕获剂结合，在第二捕获区中使第二复合物(如果形成)与第二固定捕获剂结合，和在第三捕获区中使第三复合物(如果形成)与第三固定捕获物结合；在第一捕获区中检测来自与第一固定捕获剂结合的第一复合物的第一信号；如果形成第二复合物，则在第二捕获区中检测来自与第二固定捕获剂结合的第二复合物的第二信号；以及如果形成第三复合物，则在第三捕获区中检测来自与第三固定捕获剂结合的第三复合物的第三信号。
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1.检测样品中以不同浓度存在的第一目标分析物和第二目标分析物的方法，所述方法包括：提供横向流测定物，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一目标分析物在所述样品中以大于所述样品中存在的所述第二目标分析物的浓度约六个数量级的浓度存在。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一目标分析物在所述样品中以1和999μl/ml之间的浓度存在，和所述第二目标分析物在所述样品中以1和999pg/ml之间的浓度存在。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一目标分析物在所述样品中以大于所述样品中存在的所述第二目标分析物的浓度至少一个数量级的浓度存在，所述数量级包括一个数量级、两个数量级、三个数量级、四个数量级、五个数量级、六个数量级、七个数量级、八个数量级、九个数量级或十个数量级。
5.根据权利要求1所述的方法，进一步包括使所述第一信号与所述样品中存在的所述第一目标分析物的浓度相关联，和使所述第二信号与所述样品中存在的第二目标分析物的浓度相关联。
6.根据权利要求1所述的方法，其中由结合所述第一捕获区中的所述第一固定化捕
7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括检测所述样品中第三目标分析物，其中所述横向流测定物包括：
8.根据权利要求7所述的方法，进一步包括：
9.根据权利要求8所述的方法，进一步包括分别使所述第一信号、所述第二信号、和所述第三信号与所述样品中所述第一分析物的浓度、所述第二分析物的浓度、和所述第三分析物的浓度相关联。
10.根据权利要求9所述的方法，进一步包括基于所述第一分析物、所述第二分析物和所述第三分析物的各自浓度，指示疾病症状、非疾病症状、或无症状。
...【技术特征摘要】
1.检测样品中以不同浓度存在的第一目标分析物和第二目标分析物的方法，所述方法包括：提供横向流测定物，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一目标分析物在所述样品中以大于所述样品中存在的所述第二目标分析物的浓度约六个数量级的浓度存在。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一目标分析物在所述样品中以1和999μl/ml之间的浓度存在，和所述第二目标分析物在所述样品中以1和999pg/ml之间的浓度存在。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一目标分析物在所述样品中以大于所述样品中存在的所述第二目标分析物的浓度至少一个数量级的浓度存在，所述数量级包括一个数量级、两个数量级、三个数量级、四个数量级、五个数量级、六个数量级、七个数量级、八个数量级、九个数量级或十个数量级。
5.根据权利要求1所述的方法，进一步包括使所述第一信号与所述样品中存在的所述第一目标分析物的浓度相关联，和使所述第二信号...
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