【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于纳米材料。更具体地，涉及一种装载药物的纳米复合粒子及其应用。
技术介绍
1、帕金森症(pd)是神经退行性疾病和最常见的运动障碍疾病。pd患者会表现出运动迟缓、静息性震颤等运动症状，以及以认知障碍为主的非运动症状。目前，临床上主要通过药物和手术这两种手段减轻pd的运动症状。但是药物往往不具备神经保护作用，无法逆转、阻止甚至减缓pd进程，并具有一定的毒副作用。而手术疗法也同样无法阻止pd的进展并缓解患者的认知障碍。
2、pd的神经病理学特征是黑质(sn)多巴胺能神经元缺失，以及含α-突触核蛋白(α-syn)聚集体的细胞内包涵体的出现。而氧化应激是pd神经退变的主要因素之一。pd的潜在分子发病机制还涉及α-突触核蛋白(α-syn)蛋白聚集、线粒体功能障碍和神经炎症，这些退行性过程也与氧化应激密切相关。
3、氧化应激是胞内活性氧(ros)过量产生与抗氧化成分相对不足导致氧化系统和抗氧化系统间平衡被打破的结果。ros水平的升高与炎症、衰老以及糖尿病、癌症、心血管疾病、慢性肾脏病和神经退行性疾病等多种疾病的发病机制和进展密切相关。因此，通过递送抗氧化剂来恢复ros稳态是一种很有前途的治疗方法[15]。
4、槲皮素(quercetin，que)及其苷类化合物(如异槲皮苷、芦丁)是广泛存在于植物中的黄酮类化合物。具有抗炎、抗氧化、保护线粒体、螯合铁和抑制α-syn聚集等作用，已被证明是一种有前途的治疗pd的药物。
5、然而，单纯使用传统的抗氧化剂收效甚微，无法阻止ros相关疾病的进展
6、纳米药物及纳米递药体系可以克服上述缺陷。纳米粒子可以相对地批量生产；小尺寸的纳米颗粒不仅能突破血脑屏障(bbb)的限制，也能作为载体以不同的方式介导药物跨越bbb，同时减缓药物在大脑中的释放，降低外周毒性。此外，通过改变纳米粒子的成分、尺寸、形状或进行表面功能化改性，能进一步提高粒子的载药量、稳定性、溶解性、生物相容性、半衰期、靶向性和安全性。
7、纳米酶具有与天然酶相当的ros清除能力，对各类有毒ros物种具有广谱的清除活性，在复杂的疾病环境中稳定性强，并能顺利从体内排除，具备良好的生物相容性。其中，氧化铈纳米颗粒可表现出多种抗氧化酶的类似活性。不同构型的氧化铈纳米粒子能够有效清除线粒体及细胞内外的ros，抑制pd模型鼠纹状体内小胶质细胞的激活和脂质过氧化，同时保护纹状体内的酪氨酸羟化酶，发挥帕金森治疗的作用。
8、谷胱甘肽(glutathione，gsh)是一种普遍存在于真核细胞的含有巯基的三肽，能通过清除活性氧来保护机体免受氧化应激所致的损伤，是脑内重要的抗氧化剂。由于谷胱甘肽转运蛋白在哺乳动物的血脑屏障和中枢神经系统中广泛表达，因此谷胱甘肽具有通过受体介导的转胞吞作用诱使其连接的纳米粒子实现脑靶向递送的潜力。偶联gsh的纳米递药系统能更有效的穿过血脑屏障，且对细胞有良好的安全性。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，提供一种装载药物的纳米复合粒子及其应用。
2、本专利技术的第一目的是提供一种纳米复合物的制备方法。
3、本专利技术的第二目的是提供所述方法制备得到的纳米复合物。
4、本专利技术的第三目的是提供所述纳米复合物在制备装载药物的纳米粒子中的应用。
5、本专利技术的第四目的是提供一种装载药物的纳米复合粒子的制备方法。
6、本专利技术的第五目的是提供所述制备方法制备得到的纳米复合粒子。
7、本专利技术的第六目的是提供所述纳米复合物和/或所述纳米复合粒子在制备药物中的应用。
8、本专利技术的第七目的是提供所述纳米复合物和/或所述纳米复合粒子在制备帕金森药物中的应用。
9、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
10、本专利技术在4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(smcc)的介导下将牛血清白蛋白(bsa)和gsh偶联在一起，得到bsa-g偶联物。随后在碱性条件下，bsa-g作为纳米反应器引导铈离子通过生物矿化作用生长为ceo2纳米团簇，得到ceb-g纳米复合物。最后，采用尿素和nabh4体系诱导ceb-g纳米复合物的蛋白结构变性展开，便于其疏水结构域与加入的疏水性药物槲皮素(que)相互作用，并进一步诱导ceb-g纳米复合物自组装形成的q@ceb-g纳米复合粒子。q@ceb-g纳米复合粒子在体外能够有效清除包括超氧阴离子(o2·-)、过氧化氢(h2o2)和羟基自由基(·oh)在内的ros，表现出明显的超氧化物歧化酶(sod)活性、过氧化氢酶(cat)活性和羟基抗氧化能力(horac)。将q@ceb-g纳米复合粒子应用于人神经母细胞瘤细胞(sh-sy5y)帕金森模型，发现粒子细胞毒性较低，能够有效清除细胞内多余的活性氧，对神经细胞有明显的保护作用。在细胞层面上实现了抗帕金森症的目的。
11、具体地，首先用smcc马来酰化处理bsa，形成bsa-mcc半偶联物，然后与gsh混合，制备bsa-g偶联物。随后制备ce(no3)3·6h2o与bsa-g的混合液，用naoh调节体系ph值至10～11，通过生物矿化作用使ceo2在bsa-g内部生长得到ceb-g纳米复合物。最后，在高浓度尿素溶液和nabh4创造的还原条件下，ceb-g纳米复合物的蛋白结构中氢键和疏水作用力等非共价相互作用力减弱、二硫键断裂，粒子的结构展开。在添加疏水药物que后用水稀释，que得以与ceb-g纳米复合物中的疏水结构域相互作用，并诱导粒子自组装形成q@ceb-g纳米复合粒子。随后形成的二硫键进一步稳定了纳米复合粒子。
12、通过透射电镜观察、粒径检测、电位检测、红外光谱检测、紫外光谱检测、x射线衍射检测、x射线光电子能谱检测等一系列的表征方式对q@ceb-g纳米复合粒子的粒子结构及物理性质进行研究。通过电子自旋共振谱检测、总sod活性检测、h2o2清除检测、horac检测探究q@ceb-g纳米复合粒子对不同种类ros的清除能力。采用溶血实验、细胞毒性实验检测q@ceb-g纳米复合粒子的生物相容性。通过细胞增殖实验和细胞凋亡检测实验，验证q@ceb-g对sh-sy5y细胞的保护作用。并通过监测胞内ros，验证纳米复合物的抗氧化应激能力。
13、一种纳米复合物的制备方法，包括以下步骤：
14、s11.smcc活化(马来酰化)bsa，得到bsa-mcc半偶联物，然后与gsh混合，充分反应，纯化，制备得到bsa-g偶联物；
15、s12.bsa-g偶联物与ce(no3)3·6h2o的充分混合，调节ph值至10～11，充分反应至溶液颜色逐渐变黄，纯化，制备得到ceb-g纳米复合物，即得。
16、优选地，smc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种纳米复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.权利要求1所述方法制备得到的纳米复合物。
3.权利要求1所述纳米复合物在制备装载药物的纳米粒子中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为槲皮素。
5.一种装载药物的纳米复合粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述药物为槲皮素。
7.权利要求5或6所述制备方法制备得到的纳米复合粒子。
8.权利要求1所述纳米复合物和/或权利要求7所述纳米复合粒子在制备药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物为抗氧化应激、清除·OH、清除O2·-、抗细胞凋亡、保护细胞、降低胞内ROS水平、和/或保护神经的药物。
10.权利要求1所述纳米复合物和/或权利要求7所述纳米复合粒子在制备帕金森药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种纳米复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.权利要求1所述方法制备得到的纳米复合物。
3.权利要求1所述纳米复合物在制备装载药物的纳米粒子中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为槲皮素。
5.一种装载药物的纳米复合粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述药物为槲皮素。
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