本发明专利技术公开了一种用于鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对及其应用；所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明专利技术通过基于CO I基因的DNA条形码技术设计得到用于鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对；利用该条形码引物对待检物种进行PCR扩增，将扩增产物用于测序，测序得到的序列与本发明专利技术提供的参考序列进行比对，构建系统进化树来确定待检物种的种类，可以有效鉴别鱼翅种的来源。本发明专利技术用于鉴别鱼翅种的方法简单易行，结果准确可靠，能有效用于鲨鱼物种识别、保护和相关研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于鉴别鱼翅种的dna条形码引物对及其应用。
技术介绍
1、鲨鱼是鱼翅的主要来源，在物种分类中属于软骨鱼纲(chondrichthyes)板鳃亚纲(elasmobranchⅱ)脊椎动物，迄今全球共发现8目25科494种，因此急需建立一种快速、有效的鲨鱼翅物种鉴定方法，可以对背景不明，形态不完整的干鱼翅进行快速物种鉴定，为有关部门履行cites公约提供技术支持。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种用于鉴别鱼翅种的dna条形码引物对。
2、本专利技术还提出一种含有上述dna条形码引物对的试剂盒。
3、本专利技术还提出上述dna条形码引物对和试剂盒的应用。
4、本专利技术还提出一种鱼翅的检测方法。
5、根据本专利技术的一个方面，提出了一种用于鉴别鱼翅种的dna条形码引物对，所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如seq id no:1所示；所述反向引物的核苷酸序列如seq id no:2所示。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述鱼翅种包括大青鲨、镰状真鲨、半锯鲨、长鳍真鲨、直齿真鲨、公牛真鲨、钝吻真鲨、沙拉真鲨、尖头斜齿鲨、无沟双髻鲨、路氏双髻鲨、黑斑星鲨、尖吻鲭鲨、深海长尾鲨、浅海长尾鲨、圆犁头鳐、澳洲尖犁头鳐、黑颌犁头鳐、大犁头鳐。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述鱼翅包括干鱼翅。
8、根据本专利技术的第二方面，提出了一种试剂盒，所述试剂盒含有上述dna条形码引物对。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括pcr反应混合液。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述pcr反应混合液为taq pcr master mix。
11、根据本专利技术的第三方面，提出了上述dna条形码引物对和试剂盒的应用，所述应用为在制备检测鱼翅的试剂中的应用。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述应用为在鉴别鱼翅真伪中的应用。
13、在本专利技术的一些实施方式中，所述鉴别鱼翅真伪包括鉴别鲨鱼和鳐鱼。
14、在本专利技术的一些实施方式中，所述应用为在检测鱼翅品种中的应用。
15、在本专利技术的一些实施方式中，所述鱼翅的品种包括大青鲨、镰状真鲨、半锯鲨、长鳍真鲨、直齿真鲨、公牛真鲨、钝吻真鲨、沙拉真鲨、尖头斜齿鲨、无沟双髻鲨、路氏双髻鲨、黑斑星鲨、尖吻鲭鲨、深海长尾鲨、浅海长尾鲨、圆犁头鳐、澳洲尖犁头鳐、黑颌犁头鳐、大犁头鳐的鱼翅。
16、在本专利技术的一些实施方式中，所述鱼翅包括干鱼翅。
17、根据本专利技术的第四方面，提出了一种鱼翅的检测方法，所述方法包括以下步骤：采用上述引物或试剂盒对待测样本进行pcr扩增；将pcr扩增得到的产物采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，若pcr扩增产物的电泳条带位于约950bp的位置，则待测样品为鲨鱼鱼翅。
18、在本专利技术的一些实施方式中，所述pcr扩增采用的扩增反应体系为：
19、
20、
21、在本专利技术的一些实施方式中，所述pcr扩增采用的扩增程序为：92～96℃预变性3-5min；然后进入循环阶段：92～96℃变性25～35s，50～60℃退火25～35s，70～75℃延伸50～70s，35个循环；70～75℃延伸8～12min。
22、在本专利技术的一些实施方式中，所述pcr扩增采用的扩增程序为：94℃预变性4min；然后进入循环阶段：94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。
23、根据本专利技术的第五方面，提出了一种鱼翅品种的鉴定方法，所述方法包括以下步骤：
24、(1)提取待测样本的dna；
25、(2)用上述dna条形码引物或试剂盒对待测样本的dna进行pcr扩增；
26、(3)将pcr扩增产物进行测序，得到待测核苷酸序列；将所述待测核苷酸序列与参考序列进行同源性比对，鉴别鱼翅品种，并进行聚类分析。
27、在本专利技术的一些实施方式中，所述pcr扩增采用的扩增反应体系为：
28、
29、在本专利技术的一些实施方式中，所述pcr扩增采用的扩增程序为：92～96℃预变性3-5min；然后进入循环阶段：92～96℃变性25～35s，50～60℃退火25～35s，70～75℃延伸50～70s，35个循环；70～75℃延伸8～12min。
30、在本专利技术的一些实施方式中，所述pcr扩增采用的扩增程序为：94℃预变性4min；然后进入循环阶段：94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。
31、在本专利技术的一些实施方式中，所述同源性比对采用ncbi genbank数据库搜索工具blast进行。
32、在本专利技术的一些实施方式中，所述鉴别鱼翅品种还包括，将所得序列通过mega7.0软件进行分析比对，基于kimura two-parameter model(kimura两参数模型)，选择transition substitution(转换替换)以计算各物种的种内和种间遗传距离的步骤。
33、在本专利技术的一些实施方式中，所述聚类分析为构建系统发育树。
34、在本专利技术的一些实施方式中，所述系统发育树采用邻接法构建得到。
35、根据本专利技术的一些实施方式，至少具有以下有益效果：本专利技术提供了一种用于鉴别鱼翅种的dna条形码引物对。通过基于co i基因的dna条形码技术设计得到用于鉴别鱼翅种的dna条形码引物对；利用该条形码引物对待检物种进行pcr扩增，将扩增产物用于测序，测序得到的序列与本专利技术提供的参考序列进行比对，构建系统进化树来确定待检物种的种类，可以有效鉴别鱼翅种的来源。本专利技术用于鉴别鱼翅种的方法简单易行，结果准确可靠，灵敏度高，能有效用于鲨鱼物种识别、保护和相关研究。
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【技术保护点】
1.一种用于鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对，其特征在于，所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述的DNA条形码引物对，其特征在于，所述鱼翅种包括大青鲨、镰状真鲨、半锯鲨、长鳍真鲨、直齿真鲨、公牛真鲨、钝吻真鲨、沙拉真鲨、尖头斜齿鲨、无沟双髻鲨、路氏双髻鲨、黑斑星鲨、尖吻鲭鲨、深海长尾鲨、浅海长尾鲨、圆犁头鳐、澳洲尖犁头鳐、黑颌犁头鳐、大犁头鳐。
3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1或2所述的DNA条形码引物对。
4.权利要求1-2任一项所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在制备检测鱼翅的试剂中的应用。
5.权利要求1-2任一项所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在鉴别鱼翅真伪中的应用。
6.权利要求1-2任一项所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在检测鱼翅品种中的应用。
7.一种鱼翅的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：采用权利要求1-2任一项所述的引物或权利要求3所述的试剂盒对待测样本进行PCR扩增；将PCR扩增得到的产物采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，若PCR扩增产物的电泳条带位于约950bp的位置，则待测样品为鲨鱼鱼翅。
8.根据权利7所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增采用的扩增程序为：92～96℃预变性3-5min；然后进入循环阶段：92～96℃变性25～35s，50～60℃退火25～35s，70～75℃延伸50～70s，35个循环；70～75℃延伸8～12min。
9.一种鱼翅品种的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的鉴定方法，其特征在于，所述聚类分析为构建系统发育树。
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【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别鱼翅种的dna条形码引物对，其特征在于，所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如seq id no:1所示；所述反向引物的核苷酸序列如seq id no:2所示。
2.根据权利要求1所述的dna条形码引物对，其特征在于，所述鱼翅种包括大青鲨、镰状真鲨、半锯鲨、长鳍真鲨、直齿真鲨、公牛真鲨、钝吻真鲨、沙拉真鲨、尖头斜齿鲨、无沟双髻鲨、路氏双髻鲨、黑斑星鲨、尖吻鲭鲨、深海长尾鲨、浅海长尾鲨、圆犁头鳐、澳洲尖犁头鳐、黑颌犁头鳐、大犁头鳐。
3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1或2所述的dna条形码引物对。
4.权利要求1-2任一项所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在制备检测鱼翅的试剂中的应用。
5.权利要求1-2任一项所述的引物或权利要求3所述的试剂盒在鉴别鱼翅真伪中的应用。
6.权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗宝正，陈轩，蒋晓霞，黄海超，邵建宏，沙才华，林志达，赵福振，周傲白雪，徐博文，
申请(专利权)人：拱北海关技术中心，
类型：发明
国别省市：
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