【技术实现步骤摘要】
本申请涉及抗辐射药物的制备和应用，具体涉及mir-29在制备预防溃疡性结肠炎靶向纳米药物中的应用，属于生物制药领域。
技术介绍
1、溃疡性结肠炎（uc）是一种非特异性的慢性复发性肠道炎症性疾病。uc患者的主要临床表现有腹痛、腹泻和粘液脓血便。uc病程长、易反复，长期的炎症极易诱发癌变，极大威胁着患者的健康。然而uc的发病机制尚未明确，且无特效针对性的根治手段，临床上的一线用药如氨基水杨酸类和糖皮质激素类，在长期服药期间均有明显的毒副作用。因此研制新型的、副作用更小的药物制剂对治疗uc至关重要。
2、随着研究的不断深入，针对uc特定功能基因的靶向治疗逐渐成为本领域的研究热点，纳米载体的应用也为基因递送提供了有效技术手段。microrna作为一类非常重要的转录后调控因子，在应激条件下发挥重要作用，并具有调控肠道干细胞的功能，具有成为临床药物的潜力。microrna29 (mir-29) 是 microrna 的一员，研究已证实mir-29能够调控wnt、nf-κb等与肠道健康息息相关的信号通路，参与着肠道的更新修复进程，具有促进肠道更新修复的潜力。研究表明，敲除mir-29a 或 mir-29b，由 dss 诱导的小鼠结肠炎性症状加剧，损伤修复变慢；而以注射回补的方式将 mir-29 递送至肠道细胞，则可以发挥其促进肠道更新修复、缓解肠道炎症的作用。然而，目前用于注射的mir-29体系没有靶向性，mir-29难以有效地直接作用于炎症部位，而且血液循环会增加毒性反应。因此，设计载体有效地将mir-29装载、传递和释放, 从
3、壳聚糖（chitosan，cs）作为自然界存在的一种天然高分子，已被列入国家食品添加剂使用标准gb-2760，有望成为包埋mir-29的理想载体。壳聚糖带正电的胺基可通过静电相互作用与带负电的mir-29结合形成纳米颗粒，辅助核酸类物质被细胞识别内化，避免内涵体逃逸作用，实现基因的表达。但以壳聚糖纳米颗粒为载体的递送体系在结肠复杂环境中容易降解，且在较短的滞留时间内，纳米药物在结肠中难以穿透肠屏障, 容易随粪便排出体外，难以单独用于结肠炎的治疗。
4、硅酸镁锂可形成具有三维网络状结构的水凝胶（lithium magnesium silicatehydrogel, lmsh），生物安全性良好，具有剪切变稀的性能，有望成为灌肠递送的良好敷料。尤其是硅酸镁锂可与多糖、蛋白质、细胞因子等相互作用，实现对活性分子的递载，减缓其扩散速度，提高生物疗效。因此研发lmsh-cs-mir-29载药体系对于结肠炎的治疗具有潜在的应用价值和前景。
技术实现思路
1、基于现有技术存在的缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是设计并制备能够保护mir-29 的载体材料，使其可以递送 mir-29到结肠炎症部位释放，实现基因调控，靶向治疗结肠炎。
2、专利技术人开发了壳聚糖纳米颗粒和硅酸镁锂水凝胶的复合载体，该载体中，壳聚糖纳米颗粒具有高效的mir-29吸附以及辅助递送的功能，硅酸镁锂水凝胶具有靶向结肠释放纳米颗粒的能力。以该载体为基础制备的mir-29药物递送系统不但能够靶向结肠给药，而且具有很好的缓释作用，有效避免了mir-29的降解，实现了mir-29的结肠靶向的缓慢释放，提高了mir-29的利用率。
3、为解决上述的技术问题，本专利技术的提供如下具体的技术方案：
4、本专利技术的第一个方面提供一种硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒lmsh-cs-mir-29 ，其特征在于，所述的壳聚糖纳米颗粒吸附有治疗性的核酸。在一个具体的实施例中，所述治疗性的核酸为sirna或mirna；在另外有一个具体的实施例中，所述的治疗性的核酸为mir-29或其类似物；在另外一个具体的实施例中，所述的mir-29的类似物的核苷酸序列为：
5、mmu-mir-29b-3p
6、sence:uagcaccauuugaaaucaguguu(seq id no:1)
7、antisence:cacugauuucaaauggugcuauu(seq id no:2)
8、本专利技术的第二个方面是提供一种硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒的制备方法，其中壳聚糖纳米颗粒吸附有治疗性的核酸，所述的方法为：
9、1）壳聚糖溶于1~2%冰醋酸无菌无酶水中，混匀，调节ph为4.0~5.0；过滤除菌；
10、2）用无菌无酶水配置2~3mg/ml 焦磷酸硫胺素（tpp）溶液，过滤除菌；
11、3）将配置好的tpp溶液和治疗性核酸的水溶液逐滴加至壳聚糖溶液中；
12、4）冰浴静置，等待纳米颗粒自组装，然后高速离心，沉淀即吸附有治疗性核酸的壳聚糖纳米颗粒，用无菌无酶水复溶沉淀，洗涤；
13、5）称取硅酸镁锂，用无菌无酶水配置的步骤4）制备获得的吸附有治疗性核酸的壳聚糖纳米颗粒溶液将其溶解，快速吹吸混匀，静置等待凝胶自组装获得硅酸镁锂水凝胶包埋壳聚糖纳米颗粒。
14、在一个具体的实施例中，步骤3）中所述治疗性的核酸为sirna或mirna；优选的，所述的治疗性的核酸为mir-29或其类似物；更优选的，所述的mir-29的类似物的核苷酸序列为：
15、mmu-mir-29b-3p
16、sence:uagcaccauuugaaaucaguguu(seq id no:1)
17、antisence:cacugauuucaaauggugcuauu(seq id no:2)
18、在另外一个具体的实施例中，步骤4）中静置时间为1~3h，离心转速为16000~18000g；
19、在另外一个具体的实施例中，其中步骤5）中，壳聚糖纳米颗粒溶液的浓度为3~7mg/ml, 吹吸混匀后静置时间为20~40min，获得硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒。
20、本专利技术第三个方面是提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括本专利技术第一个方面所述的硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒lmsh-cs-mir-29以及药学上可接受的载体；在一个优选的实施例中，所述的药物组合物通过消化道给药，优选的为结直肠给药，更优选的为灌肠。
21、本专利技术的第四个方面是提供第一方面所述的硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒或者第二方面所述的硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒的制备方法在制备治疗肠病的应用；在一个具体的实施中，所述的肠病为结肠炎，优选的为溃疡性结肠炎。
22、本专利技术的有益效果为：通过提供mir-29或mir-29类似物在制备预防溃疡性结肠炎的应用，为结肠炎的治疗提供新的解决思路；同时提供一种靶向结肠的药物递送系统，其包含壳聚糖纳米颗粒、和包覆在纳米颗粒外的硅酸镁锂水凝胶，为microrna的肠炎靶向递送提供理论依据。
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1.一种硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒，其特征在于，所述的壳聚糖纳米颗粒吸附有治疗性的核酸,所述的治疗性的核酸为miR-29或其类似物。
2.一种硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒的制备方法，其中壳聚糖纳米颗粒吸附有治疗性的核酸，所述的方法为：
3.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤3）中所述治疗性的核酸为siRNA或miRNA。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述治疗性核酸为miR-29或其类似物。
5.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤4）中静置时间为1~3h，离心转速为16000~18000g。
6.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤5）中，吸附有治疗性核酸的壳聚糖纳米颗粒溶液的浓度为3~7mg/mL, 吹吸混匀后静置时间为20~40min，获得LMSH-CS-miR-29 凝胶。
7.一种药物组合物，所述的药物组合物包括权利要求1所述的硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒以及药学上可接受的载体。
8.权利要求1所述的硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒或者权利要求2-6任一项所述
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的肠病为结肠炎。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的肠病为溃疡性结肠炎。
...【技术特征摘要】
1.一种硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒，其特征在于，所述的壳聚糖纳米颗粒吸附有治疗性的核酸,所述的治疗性的核酸为mir-29或其类似物。
2.一种硅酸镁锂水凝胶包埋的壳聚糖纳米颗粒的制备方法，其中壳聚糖纳米颗粒吸附有治疗性的核酸，所述的方法为：
3.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤3）中所述治疗性的核酸为sirna或mirna。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述治疗性核酸为mir-29或其类似物。
5.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤4）中静置时间为1~3h，离心转速为16000~18000g。
6.根据权利要求3所述的方法，其中，...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭慧媛，张雨凝，王宇琦，林莹莹，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
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