【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、癌症对社会健康的威胁越来越大。平均而言，随着医疗技术日益延长生命，当前人口正在老龄化，导致癌症发病率增加。全球每四例死亡中就有一例归因于癌症。
2、由于患者和类型之间存在巨大异质性，因此癌症是一种治疗起来具有挑战性的疾病。即使是现在，许多癌症中心仍在对每个患者的基因组进行测序以鉴定癌症突变。因此，对于每种癌症都需要独特的治疗，并且个性化药物最终可能成为护理标准。
3、测序已经揭示，每个人的癌症包含其基因组的变化。另外被称为多命中假设，这些变化以逐步方式发生。机体通过消除突变细胞经由免疫系统抵抗这些变化。该系统包含一般性靶向效应细胞和特异性靶向效应细胞，分别称为先天免疫系统和适应性免疫系统。先天细胞，诸如自然杀伤细胞和单核细胞，使用病原体相关分子或人细胞上自体信号的缺失来鉴定外来物质。适应性免疫系统必须由抗原递呈细胞(apc)活化。t细胞具有t细胞受体(tcr)以鉴定在主要组织相容性复合体i或ii(mhc)的背景下由apc呈递的抗原。靶向是严格的，并且可用于对抗表达该抗原的患者细胞，而不是杀伤所有细...
【技术保护点】
1.一种产生表达特异性结合一种或多种抗原的一种或多种T细胞受体(TCR)的T细胞群体的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种抗原是癌症新抗原。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述癌症新抗原选自表1至表9和表11中列出的新抗原。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种抗原是病毒抗原。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种抗原是通过对与所述癌症或所述病毒感染相关的无细胞脱氧核糖核酸(cfDNA)进行测序来鉴定的。
6.根据权利要求5所述的方法，...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种产生表达特异性结合一种或多种抗原的一种或多种t细胞受体(tcr)的t细胞群体的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种抗原是癌症新抗原。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述癌症新抗原选自表1至表9和表11中列出的新抗原。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种抗原是病毒抗原。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种抗原是通过对与所述癌症或所述病毒感染相关的无细胞脱氧核糖核酸(cfdna)进行测序来鉴定的。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述测序包括下一代测序。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述一种或多种抗原的长度为约15至约50个氨基酸。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述mrna是至少约80％纯的。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述一种或多种mrna分子包含多个所述抗原的编码序列，每个编码序列由多接头分开。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述多接头包含ggsgggss的氨基酸序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述一种或多种mrna分子各自包含信号肽、5'非翻译区(utr)、3'非翻译区(utr)和/或聚腺嘌呤(聚(a))尾。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中步骤(v)的使所分离的单核细胞分化成树突状细胞发生在含有一种或多种细胞因子的培养基中。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子包括gm-csf和il-4。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子还包括il-1β、il-6、tnf-α和/或pge2。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中在步骤(v)中使全部或基本上全部的所述单核细胞分化成树突状细胞。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在步骤(vii)之前将步骤(v)的所述树突状细胞和与所述癌症或所述病毒感染相关的一种或多种抗原肽一起孵育。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中步骤(vi)的用所述一种或多种mrna分子对所述树突状细胞进行所述转染是通过阳离子脂质转染、脂转染或核转染进行的。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中步骤(vii)中所述树突状细胞与所述t细胞的比例为约1:2至约1:4。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中步骤(vii)的所述刺激所述t细胞发生在含有细胞因子的培养基中。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述细胞因子包括il-7和il-15。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中将步骤(vii)的所述刺激所述t细胞重复2、3、4或更多次。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述方法还包括用结合cd3、cd28和cd2的四聚体抗体刺激步骤(vii)的所述t细胞。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述t细胞具有内源β2-微球蛋白(b2m)基因的缺失或破坏。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中在步骤(vii)期间将所述t细胞进一步暴露于一种或多种凋亡抑制剂中。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述一种或多种凋亡抑制剂选自10058-f4、4'-甲氧基黄酮、azd5438、bag1(72-末端)蛋白、bax抑制肽、bepp单羟基氯、bi-6c9、btzo、米酵菌酸、ctp抑制剂、ctx1、钙蛋白酶抑制剂、氯法拉滨、凝聚素核形式蛋白、康普瑞汀a4、环状抑制剂-a氢溴酸、em20-25、fasentin、ferrostatin-1、gnf-2、im-54、ischemin-calbiochema可渗透细胞的偶氮苯、liproxstatin-1、mdl28170、mdivi-1、线粒体融合促进剂、n-乙基马来酰亚胺、n-乙基马来酰亚胺、ns3694、nsci、necrostatin-1、冬凌草甲素、pd151746、pdi抑制剂16f16、喷司他丁、抑制剂-a、抑制剂-a p-硝基环、抑制剂-u、s-15176二富马酸盐、ucf-101、p53-snail结合抑制剂gh25、tw-37和z-vad-fmk
26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中在步骤(vii)开始时，将所述t细胞进一步暴露于一种或多种rho相关蛋白激酶(rock)抑制剂中。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述一种或多种rock抑制剂选自y-27632 2hcl、thiazovivin、法舒地尔(ha-1077)hcl、gsk429286a、rki-1447、氮杂吲哚1(tc-s 7001)、gsk269962a hcl、奈舒地尔(ar-13324)、y-39983hcl、zinc00881524、kd025(slx-2119)、利帕舒地尔(k-115)、羟基法舒地尔(ha-1100)at13148、ama-0076、ar-1286、ats907、de-104、ins-115644、ins-117548、pg324、y-39983；rki-983、snj-1656、wf-563、氮杂苯并咪唑-氨基呋咱、h-1152p、xd-4000、hmn-1152、rhostatin、4-(1-氨基酰基)-n-(4-吡啶)环己烷-甲酰胺、ba-207、ba-215、ba-285、ba-1037、ki-23095、vas-012、喹唑啉、奈舒地尔和itri-e-212
28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述树突状细胞和所述t细胞在单个封闭系统生物反应器中培养。
29.一种源自根据权利要求1至28中任一项所述的方法的t细胞群体。
30.根据权利要求29所述的t细胞群体，其中所述t细胞包括初始t细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、中枢记忆t细胞、干细胞记忆t细胞、效应记忆t细胞或它们的任何组合。
31.根据权利要求29或30所述的t细胞群体，其中至少约70％的所述t细胞是cd3+。
32.根据权利要求29或30所述的t细胞群体，其中至少约70％的所述t细胞是中枢记忆t细胞。
33.根据权利要求29或30所述的t细胞群体，其中至少约70％的所述t细胞是效应记忆t细胞。
34.根据权利要求29或30所述的t细胞群体，其中至少约70％的所述t细胞是cd4+t细胞。
35.根据权利要求29或30所述的t细胞群体，其中至少约70％的所述t细胞是cd8+t细胞。
36.根据权利要求29或30所述的t细胞群体，其中所述群体不包含或基本上不包含耗竭标记物，所述耗竭标记物包括但不限于对pd-1、lag3、tim-3、ctla4、btla、tigit中的至少一者呈阳性的细胞。
37.一种产生表达特异性结合抗原的一种或多种t细胞受体(tcr)的t细胞群体的方法，所述方法包括：
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述抗原是癌症新抗原。
39.根据权利要求37所述的方法，其中所述抗原是病毒抗原。
40.根据权利要求37至39中任一项所述的方法，其中步骤(ii)中所述树突状细胞与所述t细胞的比例为约1:2至约1:4。
41.一种分离的工程化t细胞，所述分离的工程化t细胞包含t细胞受体(tcr)，所述t细胞受体靶向选自表1至表9和表11中列出的新抗原的多种癌症新抗原。
42.根据权利要求41所述的t细胞，其中当暴露于所述多种新抗原中的任一种时，所述t细胞分泌肿瘤坏死因子α(tnfα)和/或干扰素γ(ifnγ)。
43.根据权利要求41或42所述的t细胞，其中所述t细胞包含内源β2-微球蛋白(b2m)基因的破坏或缺失。
44.根据权利要求41至43中任一项所述的t细胞，其中所述t细胞被进一步工程化以瞬时表达修饰肿瘤微环境的一种或多种蛋白质。
45.根据权利要求44所述的t细胞，其中所述一种或多种蛋白质选自il-2、il-7、il-12、il-15、il-18、il-21、ifnα、ifnβ、ifnγ、tnfα、il-2r、il-7r、il-12r、il-15r、il-18r、il-21r、ifnα受体、ifnβ受体、ifnγ受体、tnfα受体、ccl2、ccl5、ccl9、ccl10、ccl11、ccl12、ccl13、ccl19、ccl21、ccr2b、ccr2、ccr7、cxcr3、cxcr4、cd28、cd40l、4-1bb、ox40、cd46、cd27、icos、hvem、light、dr3、gitr、cd30、tim1、slam、cd2、cd226、抗pd-1、抗pd-l1、抗ctla-4、抗fas、抗fasl、抗lag3、抗b7-1、抗b7-h1、抗cd160、抗btla、抗lair1、抗tim3、抗2b4、抗tigit、抗tgfβ受体、抗il-4受体、抗il-10受体、抗vegf受体、抗avβ8、以及它们的融合蛋白。
46.根据权利要求44所述的t细胞，其中所述一种或多种蛋白质包括改变细胞外基质的一种或多种外源性酶。
47.根据权利要求44至46中任一项所述的t细胞，其中所述瞬时表达是通过用编码修饰肿瘤微环境的所述一种或多种蛋白质的一种或多种mrna分子转染所述t细胞来实现的。
48.根据权利要求47所述的t细胞，其中所述一种或多种mrna分子是线性rna、...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·E·斯莱内兹，W·巴里，
申请(专利权)人：金纽斯生物科技公司，
类型：发明
国别省市：
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