【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫检测，具体涉及一种动态双模、超灵敏的免疫检测试纸条及其制备方法。
技术介绍
1、免疫检测试纸条是应用最为广泛的一种即时检测体外诊断技术，具有快速便捷、低成本、裸眼可视化的优点，其实际应用场景从高浓度靶标检测需求(ng/ml～ug/ml)逐渐扩展至低浓度靶标检测需求(pg/ml～ng/ml)。现有的免疫检测试纸条，绝大多数都基于aunps或者荧光微球/量子点，采用单一模态比色或者荧光信号进行检测，其面临的关键问题在于：aunps免疫检测试纸条在检测高浓度靶标时易于裸眼识别、定量分析，但是其灵敏度不足难以有效检测低浓度靶标；荧光微球/量子点免疫检测试纸条灵敏度大大提升，能够有效检测检测低浓度靶标，但是其在检测高浓度靶标时荧光信号易饱和，难以有效裸眼识别或者定量分析。
2、当前有少量研究报道基于荧光量子点@aunps复合材料的荧光-比色双模免疫检测试纸条，虽然实现了荧光-比色双模态检测信号读出，但是其荧光信号模态的灵敏度较比色信号模态的灵敏度并没有显著提升，仍在同一数量级内，一方面未能实现覆盖高、低浓度的动态裸眼识别和同时超灵敏定量分析，另一方面研究报道的荧光量子点@aunps复合材料基于层层包覆的逐步合成法其制备较为复杂，且后续抗体蛋白标记等仍依赖传统的化学共价修饰工艺，增加了工艺技术难度和人力、物力成本，降低了免疫检测试纸条技术的低成本经济性。
3、为满足不同检测场景应用需求、解决制备工艺复杂的问题。因此，十分有必要开发一种动态双模、超灵敏的免疫检测试纸条及其制备方法，能够在靶标低浓度时以
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种动态双模、超灵敏的免疫检测试纸条及其制备方法，能够在靶标低浓度时以荧光信号模态实现超灵敏检测的同时又能够在靶标高浓度时以比色信号模态实现有效裸眼识别和定量分析。
2、本专利技术的第一方面提供一种动态双模、超灵敏的免疫检测试纸条的制备方法。
3、具体的，包括以下步骤：
4、(1)将底板和位于底板上的吸水垫、层析膜、标记垫和样品垫依次固定；
5、(2)以四(4-羧基苯)乙烯为有机配体，氯化锆为金属离子盐，合成maf纳米颗粒；
6、(3)使用柠檬酸钠包裹纳米金颗粒，制得aunps；
7、(4)将maf纳米颗粒进行表面化学改性后，与aunps混合孵育0.5～2h，自组装形成maf@aunps复合纳米颗粒；
8、(5)将maf@aunps复合纳米颗粒与一抗蛋白(ab1)混合孵育1～3h，再加入封闭剂继续孵育0.1～1h，离心后取沉淀使用复溶剂复溶，制得ab1修饰maf@aunps复合纳米颗粒；
9、(6)将ab1修饰maf@aunps复合纳米颗粒滴加于标记垫，烘干；
10、(7)取一抗蛋白抗体(anti-ab1)划线于层析膜，标记为c线；取二抗蛋白(ab2)划线于层析膜，标记为t线，烘干；
11、(8)使用硼酸盐缓冲液处理样品垫，制得免疫检测试纸条。
12、优选的，步骤(2)中，所述maf纳米颗粒的粒径为150～250nm。
13、进一步优选的，所述maf纳米颗粒的粒径为200nm。
14、优选的，步骤(5)中，以体积份数计所述maf@aunps复合纳米颗粒为1～3份，所述一抗蛋白为0.02～0.05份，所述封闭剂为0.1～0.4份，所述复溶剂为0.2～0.5份。
15、优选的，步骤(7)中，以重量份数计所述一抗蛋白抗体为2～5份，所述二抗蛋白为2～5份。
16、优选的，步骤(3)中，所述aunps的粒径为10～30nm。
17、进一步优选的，所述aunps的粒径为15nm。
18、优选的，步骤(4)中，所述表面化学改性的步骤包括：将maf纳米颗粒与正电聚合物分子混合孵育0.1～1h，离心后取沉淀复溶。
19、进一步优选的，所述表面化学改性的步骤包括：在室温、搅拌的条件下将带负电的maf纳米颗粒与正电聚合物分子混合孵育0.5h，混合液经离心后去上清液，取沉淀复溶于等体积去离子水。
20、优选的，步骤(4)中，所述将maf纳米颗粒进行表面化学改性后，与aunps混合孵育1h。
21、进一步优选的，步骤(4)中，在室温、搅拌的条件下将maf纳米颗粒进行表面化学改性后，与带负电的aunps混合孵育1h，混合液经离心去上清液，取沉淀复溶于等体积去离子水，获得自组装maf@aunps复合纳米颗粒。
22、aunps通过静电作用吸附于荧光maf纳米颗粒表面，避免了传统复杂的层层包裹合成过程，有效简化制备工艺，同时aunps暴露于溶剂可用于直接吸附标记抗体蛋白，避免传统羧基/氨基化功能修饰和共价交联，进一步有效简化制备工艺提升经济性。
23、优选的，所述正电聚合物分子为聚赖氨酸、ε-聚赖氨酸、聚乙烯胺、聚丙烯胺、聚酰胺、聚乙烯亚胺中的至少一种。
24、进一步优选的，所述正电聚合物分子为聚乙烯亚胺。
25、优选的，所述聚乙烯亚胺的分子量为600～20000。
26、进一步优选的，所述聚乙烯亚胺的分子量为600、2000、5000、10000、20000。
27、更进一步优选的，所述聚乙烯亚胺的分子量为10000。
28、优选的，所述聚乙烯亚胺的质量浓度为0.01～1％。
29、进一步优选的，所述聚乙烯亚胺的质量浓度为0.1％。
30、当使用0.1％聚乙烯亚胺-10000对maf纳米颗粒进行表面化学改性后，与aunps进行混合孵育时，在同等条件下，aunps的投入量决定了单个maf纳米颗粒表面吸附aunps的个数多少，其中aunps投入量以体积份数计为1～5份。
31、优选的，所述aunps投入量以体积份数计为2.5份。
32、优选的，步骤(5)中，将maf@aunps复合纳米颗粒与一抗蛋白(ab1)混合孵育2h，再加入封闭剂继续孵育0.5h，离心后取沉淀使用复溶剂复溶，制得ab1修饰maf@aunps复合纳米颗粒。maf@aunps复合纳米颗粒与ab1混合孵育时，不需要调节ph。
33、优选的，步骤(5)中，所述封闭剂和所述复溶剂为含牛血清白蛋白、聚乙二醇、明胶、吐温中任意一种的磷酸盐缓冲液。
34、进一步优选的，所述封闭剂和复溶剂为含牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。
35、优选的，步骤(6)中，将体积份数为0.001～0.003份的ab1修饰maf@aunps复合纳米颗粒滴加于标记垫，烘干。
36、进一步优选的，步骤(6)中，将体积份数为0.002.5份的ab1修饰maf@aunps复合纳米颗粒滴加于标记垫，烘干。
【技术保护点】
1.一种动态双模、超灵敏的免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，以体积份数计所述MAF@AuNPs复合纳米颗粒为1～3份，所述一抗蛋白为0.02～0.05份，所述封闭剂为0.1～0.4份，所述复溶剂为0.2～0.5份。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，以重量份数计所述一抗蛋白抗体为2～5份，所述二抗蛋白为2～5份。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述表面化学改性的步骤包括：将MAF纳米颗粒与正电聚合物分子混合孵育0.1～1h，离心后取沉淀复溶。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述正电聚合物分子为聚赖氨酸、ε-聚赖氨酸、聚乙烯胺、聚丙烯胺、聚酰胺、聚乙烯亚胺中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙烯亚胺的分子量为600～20000。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙烯亚胺的质量浓度为0.01～1％。
9.权利要求1至8任一项所述的制备方法制备的免疫检测试纸条，其特征在于，所述免疫检测试纸条包括底板和位于所述底板上的吸水垫、层析膜、标记垫和样品垫；所述免疫检测试纸条的长度为40～100mm，宽度为2～10mm。
10.权利要求9所述的免疫检测试纸条的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种动态双模、超灵敏的免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，以体积份数计所述maf@aunps复合纳米颗粒为1～3份，所述一抗蛋白为0.02～0.05份，所述封闭剂为0.1～0.4份，所述复溶剂为0.2～0.5份。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，以重量份数计所述一抗蛋白抗体为2～5份，所述二抗蛋白为2～5份。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述表面化学改性的步骤包括：将maf纳米颗粒与正电聚合物分子混合孵育0.1～1h，离心后取沉淀复溶。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述正电聚合物分子为聚赖氨酸、ε-聚赖氨酸、聚乙烯胺、聚...
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