一种分泌表达人溶菌酶的里氏木霉工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种分泌表达人溶菌酶的里氏木霉工程菌及其构建方法和应用，涉及分子生物学和生物技术领域。该构建方法包括将表达模块转化到里氏木霉原始菌株中，构建得到所述里氏木霉工程菌的步骤；所述表达模块包括依次连接的启动子、融合基因和终止子；所述融合基因包括依次连接的分泌肽基因、肽切割位点基因和人溶菌酶基因。本发明专利技术成功构建了分泌表达人溶菌酶的工程菌株，该工程菌株可用于人溶菌酶制剂的生产，通过实验验证，该人溶菌酶酶制剂可以显著杀灭革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。本发明专利技术为食品、饲料等行业提供了新的人溶菌酶制剂及其制备方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和生物，特别是涉及一种分泌表达人溶菌酶的里氏木霉工程菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、溶菌酶是1922年由英国科学家fleming首先在人的唾沫、眼泪和鼻涕中发现的，因其可使细菌细胞壁溶解而得名。肽聚糖是革兰氏阳性菌细胞壁的一种重要成分。溶菌酶可水解肽聚糖中的n-乙酰胞壁酸和n-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物溢出而使细菌溶解。因此，溶菌酶能杀灭大多数的革兰氏阳性菌株。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与dna、rna、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，因此该酶具有抗菌、消炎、抗病毒、止血、消肿、镇痛等作用。溶菌酶的这些特殊性质使其在食品、医学、畜牧生产等工业中有着广泛的应用前景。目前，基于廉价易得的原因，鸡蛋清溶菌酶(简称，蛋清溶菌酶)是应用最为广泛的、商业化的溶菌酶制剂。

2、人溶菌酶是人体自身的一种杀菌的蛋白质。人溶菌酶与其他来源的溶菌酶相比，有许多无法逾越的优势：如酶活性是蛋清溶菌酶的3倍；并且来源于人体，和人体具有天然相容性，不会产生任何副本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种分泌表达人溶菌酶的里氏木霉工程菌的构建方法，其特征在于，包括将表达模块转化到里氏木霉原始菌株中，构建得到所述里氏木霉工程菌的步骤；

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述分泌肽基因的核苷酸序列如SEQID NO.28～35中任一项所示；所述肽切割位点基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.36～40中任一项所示；所述人溶菌酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.23～27中任一项所示。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述里氏木霉原始菌株包括里氏木霉QM6a、QM9414、RUT-C30、RL-P37、NG14或PC-3-7。...

【技术特征摘要】

1.一种分泌表达人溶菌酶的里氏木霉工程菌的构建方法，其特征在于，包括将表达模块转化到里氏木霉原始菌株中，构建得到所述里氏木霉工程菌的步骤；

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述分泌肽基因的核苷酸序列如seqid no.28～35中任一项所示；所述肽切割位点基因的核苷酸序列如seq id no.36～40中任一项所示；所述人溶菌酶基因的核苷酸序列如seq id no.23～27中任一项所示。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述里氏木霉原始菌株包括里氏木霉qm6a、qm9414、rut-c30、rl-p37、ng14或pc-3-7。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述启动子为cbhi启动子或cbhii启动子，所述终止子为cbhi终止子或cbhii终止子；当所述所述启动子为cbhi启动子时，所述终止子为cbhi终止子；当所述启动子为cbhii启动子时，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玮，蔡万钏，陈雨蒙，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：