无ASFV及PCV-2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用技术

技术编号：40794406 阅读：4 留言：0更新日期：2024-03-28 19:22

本发明专利技术提供了一种无ASFV及PCV‑2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用，属于动物疫苗生产技术领域。该培养基包括：磷酸氢二钠10g/L，磷酸二氢钾3g/L，氯化钠5g/L，酵母粉15g/L，胨类混合物30g/L，纯化水1L，吐温80 1ml。本发明专利技术通过对原材料的精确筛选，严格把控，排除掉含有猪圆环病毒2型和非洲猪瘟病毒DNA的原材料，为猪丹毒疫苗的生产提供更安全的培养基。本发明专利技术培养基营养丰富、培养滴度高、生产成本低且不含非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型，充分保证了疫苗的安全性。作为满足猪丹毒杆菌快速生长的高效培养基，本发明专利技术可使猪丹毒杆菌的活菌滴度达到110×10<supgt;8</supgt;CFU/ml以上，发酵时间仅需4～6h，可大幅降低生产成本。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物疫苗生产，具体涉及一种无asfv及pcv-2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用。

技术介绍

1、猪丹毒是一种由红斑丹毒丝菌俗称丹毒杆菌引起的传染病，在临床可分慢性、亚急性和急性，慢性型引发疣状心内膜炎及皮肤坏死与多发性非化脓性关节炎，亚急性引起皮肤疹块，急性引起败血症，主要发病于3个月以上的生长猪。猪丹毒的流行无明显季节性，但夏季发生较多，冬春季只有散发。目前集约化养猪场由于环境条件较好所以相对比较少见，但仍未完全控制，本病成世界性分布，而一旦发病整个猪场将面临巨大经济损失。

2、面对猪丹毒这种常见传染病，除了调整养殖环境以外，还可以用接种疫苗的方式进行预防。目前，用于疫苗生产的常用培养基原料中大多都难以避免携带猪圆环和非洲猪瘟病毒的成分，存在一定的安全风险。

技术实现思路

1、本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种无asfv及pcv-2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用，以解决常规培养基中可能含有非瘟病毒和圆环病毒的技术问题。

2、本专利技术要解决的另一技术问题是，常规培养基对猪丹毒杆菌的培养效率有待提升。

3、为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：

4、无asfv及pcv-2的猪丹毒杆菌培养基，包括：磷酸氢二钠10g/l，磷酸二氢钾3g/l，氯化钠5g/l，酵母粉15g/l，胨类混合物30g/l，纯化水1l，吐温80 1ml。

5、作为优选，该猪丹毒杆菌培养基的ph值为7.8。</p>

6、在以上技术方案的基础上，本专利技术进一步提供了上述猪丹毒杆菌培养基的制备方法，包括以下步骤：称取：磷酸氢二钠10g/l，磷酸二氢钾3g/l，氯化钠5g/l，酵母粉15g/l，胨类混合物30g/l，纯化水1l，吐温80 1ml；混匀。

7、作为优选，混匀后于116℃高压灭菌30min，待其自然晾凉，加入8‰含50％的葡萄糖溶液。

8、在以上技术方案的基础上，本专利技术进一步提供了上述猪丹毒杆菌培养基用于培养猪丹毒杆菌的应用。

9、作为优选，该应用包括以下步骤：

10、1、将猪丹毒杆菌用马丁肉汤稀释，划线接种含4％健康动物血清及1％血红素的马丁琼脂平板，37℃培养36～48h，经纯粹检査合格后作为种子，挑取7～8个单菌落划在含10％羊全血的马丁琼脂血斜上，37℃培养24h，在2～8℃保存，不超过1个月；使用时每根血斜用6ml 0.1％蛋白胨水冲洗，作为工作液；

11、2、使用前以培养基量的0.8‰添加浓度为50％的无菌葡萄糖溶液，将工作液按2％接种液体培养基，37℃、静置培养6～8h作为一级种子；

12、3、将一级种子按4％的比例接种发酵罐，37℃、间歇搅拌发酵4～6h；培养结束后，取样进行活菌计数，计数平板为含4％健康动物血清及0.1％血红素的马丁琼脂，同时设阴性对照，置37℃培养24～48h。

13、作为优选，所述猪丹毒杆菌是猪丹毒杆菌g4t10株。

14、在本专利技术中，所述血斜是指含10％羊全血的马丁琼脂斜面，特此说明。

15、本专利技术提供了一种无asfv及pcv-2的猪丹毒杆菌培养基、其制备方法及应用，属于动物疫苗生产
该培养基包括：磷酸氢二钠10g/l，磷酸二氢钾3g/l，氯化钠5g/l，酵母粉15g/l，胨类混合物30g/l，纯化水1l，吐温80 1ml。本专利技术通过对原材料的精确筛选，严格把控，排除掉含有猪圆环病毒2型和非洲猪瘟病毒dna的原材料，为猪丹毒疫苗的生产提供更安全的培养基。本专利技术培养基营养丰富、培养滴度高、生产成本低且不含非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型，充分保证了疫苗的安全性。作为满足猪丹毒杆菌快速生长的高效培养基，本专利技术可使猪丹毒杆菌的菌液滴度达到110×108cfu/ml以上，发酵时间仅需4～6h，可大幅降低生产成本。

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【技术保护点】

1.无ASFV及PCV-2的猪丹毒杆菌培养基，其特征在于，包括：磷酸氢二钠10g/L，磷酸二氢钾3g/L，氯化钠5g/L，酵母粉15g/L，胨类混合物30g/L，纯化水1L，吐温80 1ml。

2.根据权利要求1所述的无ASFV及PCV-2的猪丹毒杆菌培养基，其特征在于，该猪丹毒杆菌培养基的pH值为7.8。

3.权利要求1所述猪丹毒杆菌培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：称取：磷酸氢二钠10g/L，磷酸二氢钾3g/L，氯化钠5g/L，酵母粉15g/L，胨类混合物30g/L，纯化水1L，吐温80 1ml；混匀。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，混匀后调节pH值为7.8，于116℃高压灭菌30min，待其自然晾凉，加入8‰含50％的灭菌葡萄糖溶液。

5.权利要求1所述猪丹毒杆菌培养基用于培养猪丹毒杆菌的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

【技术特征摘要】

1.无asfv及pcv-2的猪丹毒杆菌培养基，其特征在于，包括：磷酸氢二钠10g/l，磷酸二氢钾3g/l，氯化钠5g/l，酵母粉15g/l，胨类混合物30g/l，纯化水1l，吐温80 1ml。

2.根据权利要求1所述的无asfv及pcv-2的猪丹毒杆菌培养基，其特征在于，该猪丹毒杆菌培养基的ph值为7.8。

3.权利要求1所述猪丹毒杆菌培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：称取：磷酸氢二钠10g...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈辰，王宇，陈坤，孙晋超，宋秀梅，李秀辉，杨飞，杨阳，郇春燕，刘超，张桐，
申请(专利权)人：中海生物技术枣庄有限公司，
类型：发明
国别省市：

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