一种简单高效的天门冬快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种简单高效的天门冬快繁方法，就是采用组织培养方法，它包括如下步骤：１）外植体的准备和消毒；２）接种及愈伤组织的诱导；３）愈伤组织的分化；４）生根；５）炼苗；６）栽培。本发明专利技术解决了天门冬依靠种子繁殖难的问题。本方法采用组织培养法，在离体培养下进行植物的无性繁殖，是快速繁殖优良植株的捷径；本申请提出的天门冬外植体在组织的诱导、分化、生根过程中的各种培养基配方，更有利于其繁殖及存活；本申请还发明专利技术了一种炼苗的方法，解决一般炼苗方法中幼苗成活率低的问题。本方法可以达到快速繁殖，节约了大量时间，可以投入生产实践中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体是一种简单高效的药用植物天门冬快繁方法。
技术介绍
天门冬(Asparagus cochinchinensis (Lour. )Merr.)，又名天冬，为百合科天门冬 属植物，原产非洲，我国主产于贵州、云南、四川、湖南、湖北等省，是传统的中草药，在我国 已有几千年的使用历史，在《神农本草经》和《千金方》等中均有记载，是多个民族的常用 药，其块根有养阴润燥、清肺生津的功效，常用于治疗肺燥干咳，咽干口渴，肠燥便秘等症， 并具有抗菌、抗肿瘤、杀灭蚊蝇幼虫等生理活性，也常用作滋补品、收敛药使用。天门冬作 为我国一种传统的中药，毒副作用较少，极具开发价值，近年来由于天门冬出口量大增，野 生天门冬资源逐年减少，货源紧缺，价格逐年攀升。2004年至2008年每公斤价格上涨了近 30元。自2001年以来，天门冬的种植开始发展，但由于天门冬的种植周期较长，从种植到 收获要3-4年，且天门冬种子常规条件下很难萌发，发芽率极低。而组织培养是解决依靠种 子繁殖难的植物繁殖的有效途径，且组织培养周期短，见效快。1902年，德国著名植物学家 G. Haberlandt根据细胞学理论，提出了 “高等植物的器官和组织可以不断分割，直到单个 细胞，即植物体细胞，在适当的条件下，具有不断分裂和繁殖、发育成完整植株的潜力”的观 点_即植物细胞具有全能性。1958年，Steward和Reinert在胡萝卜愈伤组织和细胞培养 实验中获得了植株，证实了“植物细胞的全能性”，为植物组织培养技术奠定了理论基础。经 过30多年的实验研究，目前已有600多种植物能用组织培养方法形成芽、胚状体及完整的 植株。在离体培养下植物细胞所具有的这种能重新形成新个体的“全能性”，使组织培养技 术在保持优良种质，加速植物的无性繁殖等应用中，取得了越来越多的成功，是快速繁殖优 良植株的捷径。目前尚未见有用组织培养方法繁殖天门冬的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，采用组织培养方法，解决 天门冬依靠种子繁殖难的问题，同时解决繁殖培养过程中的营养及成活率等问题。本专利技术解决问题所采用的技术方案是，采用组 织培养方法，包括如下步骤1)外植体的准备和消毒；2)接种及愈伤组织的诱导；3)愈伤组织的分化；4)生根；5)炼苗；6)栽培所述的外植体的准备和消毒操作人员消毒，将外植体、接种工具进行消毒。所述的接种及愈伤组织的诱导进行接种，接种后放置于光照培养箱中。所述的愈伤组织的分化愈伤组织诱导3-7天后，待出现较大团状的淡黄色愈伤 组织时，将愈伤组织转入分化培养基，继续放置于光照培养箱中。所述的生根愈伤组织分化7-10天后，待出现1-3个枝芽时，转入到生根培养基 中，继续放置于光照培养箱中。所述的炼苗在生根培养基中10-25天后，待出现一定数量的白根，形成幼苗，这 时把带幼苗的培养瓶取出进行炼苗，首先揭盖，加入少量双蒸水并盖上盖，以防组培苗失水 及培养基被污染，搁置培养箱中2-3天，然后取出培养箱，加入少量自来水，放在室内自然 光照20-28°C下培养2-3天，接着揭盖培养。所述的栽培待瓶内长出新鲜的嫩叶后，从瓶内取出苗并洗净培养基，放在营养土 里栽培成株，待幼苗出现3-5个新枝后入土栽培。所述的诱导愈伤组织的培养基配方为l/2MS+1.0mg/L 6-BA+O. 5mg/L NAA+琼 脂 0. 7% + 蔗糖 3%，PH = 5. 8。所述的分化培养基配方为MS+1. 5mg/L 6-BA+O. 5mg/L IAA+琼脂0. 7 % +蔗糖 3%, PH = 5. 8。所述的生根培养基中配方为l/2MS+0. 5mg/L IBA+0. 5mg/LIAA+琼脂0. 7% +蔗糖2%，其中MS培养基中的Fe盐的浓度降低到0. 25mg/L，PH =5. 8。天门冬种子常规条件下很难萌发，发芽率极低，为此，湖南省高校创新平台开放基 金项目(09K106)资助对此进行研究，根据研究结果提出了本专利技术。根据本专利技术的方法繁殖 天门冬，解决了依靠种子繁殖难的问题。本方法采用组织培养法，在离体培养下进行植物的 无性繁殖，是快速繁殖优良植株的捷径；本申请提出的天门冬外植体在组织的诱导、分化、 生根过程中的各种培养基配方，更有利于其繁殖及存活；本申请还专利技术了一种炼苗的方法， 解决一般炼苗方法中幼苗成活率低的问题。本方法可以达到快速繁殖，节约了大量时间，能 够投入生产实践中。附图说明图1-2是外植体；图3-4是愈伤组织的诱导；图5-6是愈伤组织的分化；图7-8是生根；图9-10是炼苗；图11-12是栽培。具体实施例方式，主要包括如下步骤1)外植体的准备和消毒采用常规消毒法，用酒精棉球擦拭手掌，将外植体移入工作台面，用升汞(1% )浸 泡8分钟，再用75%酒精浸泡5分钟；无菌水漂洗3-4次。点燃酒精灯，用具入酒精瓶(酒 精浓度为75%)浸泡数分钟，取出在酒精灯上灼烧。把接种刀和镊子放在酒精灯火焰上灼烧，初次2-3分钟，以后30-60秒左右即可。2)接种及愈伤组织的诱导接种工具和外植体消毒后，进行接种。每接种完一瓶，均应把接种刀和镊子放 入酒精瓶中浸泡，灼烧后再接下一瓶，以免引起交叉感染。接种时瓶口进行火焰灭菌，然 后用镊子夹外植体在培养基，培养基为诱导愈伤组织的培养基，配方为dAMS+l.Omg/L 6-BA+O. 5mg/LNAA+琼脂0. 7% +蔗糖3%，PH = 5. 8。接种后放置于光照培养箱中，光照强度设 置为 4000LX，温度为 26°C 士 1°C。3)愈伤组织的分化愈伤组织诱导3-7天时，会出现较大团状的淡黄色愈伤组织时，这时将愈伤组 织转入新的培养基，培养基为分化培养基，配方为MS+1. 5mg/L 6-BA+O. 5mg/L IAA+琼脂 0. 7% +蔗糖3%，PH = 5. 8。继续放置于光照培养箱中，条件同上。4)生根愈伤组织分化7-10天时，会出现1-3个枝芽时，这时转入到新的培养基中，该培养 基为生根培养基中，1/2MS+0. 5mg/L IBA+0. 5mg/L IAA+琼脂0. 7% +蔗糖2%，其中MS培养 基中的Fe盐的浓度降低到0. 25mg/L, PH = 5. 8。继续放置于光照培养箱中，条件同上。5)炼苗在生根培养基中10-25天后，待出现一定数量的白根，形成幼苗，这时把带幼苗的 培养瓶取出进行炼苗，首先揭盖，加入少量双蒸水并盖上盖，以防组培苗失水及培养基被污 染，搁置培养箱中2-3天，然后取出培养箱，加入少量自来水，放在室内自然光照20-28°C下 培养2-3天，接着揭盖培养。6)栽培待瓶内长出新鲜的嫩叶后，从瓶内取出苗并洗净培养基，用一定浓度， 100-200mg · Γ1浓度的生根剂浸根20 30min后晾干，最后放在营养土里栽培成株，待幼 苗出现3-5个新枝后入土栽培。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种简单高效的天门冬快繁方法，采用组织培养方法，包括如下步骤：１）外植体的准备和消毒；２）接种及愈伤组织的诱导；３）愈伤组织的分化；４）生根；５）炼苗；６）栽培所述的外植体的准备和消毒：操作人员消毒，将外植体、接种工具进行消毒。所述的接种及愈伤组织的诱导：进行接种，接种后放置于光照培养箱中。所述的愈伤组织的分化：愈伤组织诱导３－７天后，待出现较大团状的淡黄色愈伤组织时，将愈伤组织转入分化培养基，继续放置于光照培养箱中。所述的生根：愈伤组织分化７－１０天后，待出现１－３个枝芽时，转入到生根培养基中，继续放置于光照培养箱中。所述的炼苗：在生根培养基中１０－２５天后，待出现一定数量的白根，形成幼苗，这时把带幼苗的培养瓶取出进行炼苗，首先揭盖，加入少量双蒸水并盖上盖，以防组培苗失水及培养基被污染，搁置培养箱中２－３天，然后取出培养箱，加入少量自来水，放在室内自然光照２０－２８℃下培养２－３天，接着揭盖培养。所述的栽培：待瓶内长出新鲜的嫩叶后，从瓶内取出苗并洗净培养基，放在营养土里栽培成株，待幼苗出现３－５个新枝后入土栽培。

【技术特征摘要】
一种简单高效的天门冬快繁方法，采用组织培养方法，包括如下步骤1)外植体的准备和消毒；2)接种及愈伤组织的诱导；3)愈伤组织的分化；4)生根；5)炼苗；6)栽培所述的外植体的准备和消毒操作人员消毒，将外植体、接种工具进行消毒。所述的接种及愈伤组织的诱导进行接种，接种后放置于光照培养箱中。所述的愈伤组织的分化愈伤组织诱导3 7天后，待出现较大团状的淡黄色愈伤组织时，将愈伤组织转入分化培养基，继续放置于光照培养箱中。所述的生根愈伤组织分化7 10天后，待出现1 3个枝芽时，转入到生根培养基中，继续放置于光照培养箱中。所述的炼苗在生根培养基中10 25天后，待出现一定数量的白根，形成幼苗，这时把带幼苗的培养瓶取出进行炼苗，首先揭盖，加入少量双蒸水并盖上盖，以防组培苗失水及培养基被污染，搁置培养箱中2 3天，然后取出培养箱，加入少量自来水，放在室内自然光照20 28℃下培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧立军，许栋，杨加强，
申请(专利权)人：怀化学院，欧立军，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]