【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农产品质量安全领域，具体的说涉及一种禾谷镰刀菌fghnrnp g基因的应用。
技术介绍
1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，don)，又称呕吐毒素(vomitoxin)，是由禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)等产生的单端孢霉烯族真菌毒素，广泛污染小麦、大麦、燕麦、黑麦和玉米等谷物及其制品。don可通过其c12/c13环氧基团干扰真核细胞的核糖体聚合体解离，阻碍核糖体循环，抑制蛋白质合成，引起拒食、恶心、呕吐、生长延迟、生殖紊乱、贫血、头痛等急慢性中毒症状，给人畜健康带来巨大的安全风险，已成为我国农产品质量安全的主要威胁之一。
2、目前，农业生产上防治don主要依靠多菌灵等化学杀菌剂，但随着禾谷镰刀菌抗药性的增加，防治效果并不稳定，且存在环境污染、引入新的安全风险等一系列问题，亟待开发新的don污染防治方法。
技术实现思路
1、本专利技术首先提供了一种抑制禾谷镰刀菌合成don的方法，该方法包括如下步骤：
2、敲除禾谷镰刀菌基因组中的fghnrnp g基因，获得fghnrnp g基因敲除的基因工程菌株δfghnrnp g；
3、具体的说，本专利技术提供的一种抑制禾谷镰刀菌合成don的方法，包括如下步骤：
4、(1)提取禾谷镰刀菌的基因组dna；
5、(2)以禾谷镰刀菌的基因组dna为模板，依据同源重组的原理，采用split-pcr构建敲除fghnrnp g基因片段和peg介导
6、(3)使用引物fghnrnp g-1f/fghnrnp g-2r和fghnrnp g-3f/fghnrnp g-4r分别扩增fghnrnp g上游片段和下游片段，并分别使用hph-f、hp-r和ph-f、hph-r扩增潮霉素磷酸转移酶基因(hph)得到h1和h2片段；
7、(4)采用split-pcr方法使用引物fghnrnp g-1f和hp-r将fghnrnp g上游片段和h1片段融合，使用引物fghnrnp g-4r和ph-f将fghnrnp g下游片段和h2片段进行融合，分别得到融合片段；
8、(5)通过peg介导的原生质体转化的方法将融合片段转至野生型禾谷镰刀菌ph-1中，并利用潮霉素抗性筛选，从而获得fghnrnp g基因敲除的基因工程菌株δfghnrnp g；
9、其中扩增上游片段和下游片段的引物如下：
10、fghnrnp g-1f：gcggtatgcacattgacgac
11、fghnrnp g-2r：ttgacctccactagctccagccaagccatcattgacggagcaaggca fghnrnpg-3f：gaatagagtagatgccgaccgcgggtttcgccccttctcatggtcta fghnrnp g-4r：gtcagcagctgttggttgtg
12、扩增潮霉素磷酸转移酶基因h1和h2片段的引物如下；
13、hph-f：ggcttggctggagctagtggaggtcaa
14、hph-r：atagagtagatgccgaccgcgggttc
15、hp-r：gtattgaccgattccttgcggtccgaa
16、ph-f：gatgtaggagggcgtggatatgtcct
17、其中所述的fghnrnp g基因的序列如seq id no.1所述；其所编码的蛋白如seq idno.2所述。
18、本专利技术还提供了一种上述方法制备得到的敲除fghnrnp g基因的基因工程菌株δfghnrnp g；
19、所述的基因工程菌株δfghnrnp g，其合成don的能力较野生菌株ph-1大大下降，但是对小麦的侵染能力影响较小或无影响。
20、本专利技术还提供了fghnrnp g基因作为抑制靶点在抑制禾谷镰刀菌合成don中的应用；
21、或者说fghnrnp g基因作为敲除靶点在抑制禾谷镰刀菌合成don中的应用；
22、也就是说，本专利技术提供的禾谷镰刀菌fghnrnp g基因的应用，是通过抑制禾谷镰刀菌中fghnrnp g基因的翻译或者其蛋白的表达，实现抑制禾谷镰刀菌合成don。
23、本专利技术还提供一种降低禾谷镰刀菌合成don毒素的方法，包括使所述禾谷镰刀菌fghnrnp g基因或fghnrnp g基因编码蛋白表达降低或不表达的步骤。
24、优选方案中，使所述禾谷镰刀菌fghnrnp g基因或fghnrnp g基因编码蛋白表达降低或不表达的方法包括：突变或敲除所述fghnrnp g基因的全部或部分序列；或者构建干涉载体干扰所述fghnrnp g基因的表达；或者使用基因沉默系统使所述fghnrnp g基因的表达沉默。
25、本专利技术提供的禾谷镰刀菌fghnrnp g基因的应用，通过深入了解禾谷镰刀菌产毒分子机制，挖掘和鉴定禾谷镰刀菌don生物合成过程中的关键基因，对有效防治禾谷镰刀菌引起don毒素污染具有重要意义。
26、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：
27、(1)本专利技术提供了影响禾谷镰刀菌don毒素生物合成的基因fghnrnp g的应用，即用于抑制禾谷镰刀菌合成don；
28、(2)本专利技术提供了一种的新的防控禾谷镰刀菌don毒素生物合成的方法，即通过抑制禾谷镰刀菌fghnrnp g基因或fghnrnp g基因编码蛋白的表达实现抑制禾谷镰刀菌产生don毒素的能力；
29、(3)本专利技术提供了一个防控don污染的基因靶标，能够破坏该基因的表达、剪切及其编码蛋白的表达、修饰、定位或活性的药剂可有效防控禾谷镰刀菌引起的don污染；
30、(4)禾谷镰刀菌fghnrnp g基因在其他病原真菌中的同源基因和同源蛋白均可作为候选靶标，以该基因或蛋白为靶标所研制的新型抑菌剂，可破坏该基因或蛋白的正常表达和功能，从而有效的防控真菌引起的don污染。
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1.一种抑制禾谷镰刀菌合成DON的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的抑制禾谷镰刀菌合成DON的方法，包括如下步骤
3.权利要求1或2任一方法制备得到的敲除FghnRNP G基因的基因工程菌株ΔFghnRNPG。
4.FghnRNP G基因作为抑制靶点或敲除靶点在抑制禾谷镰刀菌合成DON中的应用。
5.一种降低禾谷镰刀菌合成DON的方法，包括使所述禾谷镰刀菌FghnRNP G基因或FghnRNP G基因编码蛋白表达降低或不表达的步骤。
6.根据权利要求5所述的降低禾谷镰刀菌合成DON的方法，包括如下步骤：敲除所述FghnRNP G基因的全部或部分序列；或者构建干涉载体干扰所述FghnRNP G基因的表达；或者使用基因沉默系统使所述FghnRNP G基因的表达沉默。
【技术特征摘要】
1.一种抑制禾谷镰刀菌合成don的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的抑制禾谷镰刀菌合成don的方法，包括如下步骤
3.权利要求1或2任一方法制备得到的敲除fghnrnp g基因的基因工程菌株δfghnrnpg。
4.fghnrnp g基因作为抑制靶点或敲除靶点在抑制禾谷镰刀菌合成don中的应用。
5.一...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩铮，范楷，胡政，赵志辉，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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