辅助鉴别具有不同脂肪性状鸡的方法及其专用引物技术

本发明专利技术公开了一种辅助鉴别具有不同脂肪性状鸡的方法及其专用引物。本发明专利技术提供的方法，是检测待测鸡的１号染色体中序列表的序列３所示ＤＮＡ自５’末端第３０１位核苷酸是Ｔ还是Ｃ，确定待测鸡的基因型是ＴＴ、ＣＴ还是ＣＣ，ＣＣ基因型鸡的脂肪性状优于ＴＴ基因型鸡和ＣＴ基因型鸡；ＣＣ基因型为该位点的核苷酸为Ｃ的纯合体；ＴＴ基因型为该位点的核苷酸为Ｔ的纯合体；ＣＣ基因型为它们的杂合体。应用本发明专利技术的方法可以辅助筛选具有优良脂肪性状（如腹部脂肪含量较低，同时生长状况较好）的鸡，具有快速、简便、可以早期筛选等优点，对于鸡的育种具有重要意义，也对于进一步研究鸡的脂肪代谢机理具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种辅助鉴别具有不同脂肪性状鸡的方法及其专用引物。
技术介绍
1990年Issemarm等首先发现PPAR这种新的留体激素受体能被一类脂肪酸样化合 物过氧化物酶体增殖剂(peroxisome proliferators, PP)激活，因此被命名为过氧化物酶 WWM.MW^^W (PPAR) 。 (Issemarm I. and Green S. Activation of a member of the steroid hormone receptor superfamily by peroxisome proliferators. Nature, 1990, 347(6294) =645-50)。PPARs属于核受体超家族。目前发现有3种亚型的PPARs =PPARa、 PPARii和PPARy。核受体属于脂溶性激素受体，其一级结构有很高的同源性，并含有相同 的功能域，即N端(A/B区)、DNA结合区(C区)、连接区⑶和C端的配体结合区(E/F)。A/ B区主要含有AFl的功能域。AFl具有不依赖配体的低转录活性，而且AFl的序列决定了该 基因的转录特异性，然而A/B区与其他受体蛋白融合形成的嵌合蛋白会抑制靶基因激活的 特异性。C区即DNA结合区域，它含有两个相当保守的锌指结构，使其特异性地结合到DNA 上。D区是一个灵活的铰链结构，起连接DNA结合区和配体结合区的作用。E/F区即配体结 合区域，同样含有一个功能域AF2，不同的是AF2需要与相应的配体蛋白结合，使结构域发 生转变，才具有活性。配体结合区是受体作用的分子开关，当受体与配体激素结合后即被 活化，活化的核受体的DNA结合区和靶基因的过氧化物酶体增殖剂反应元件(peroxisome proliferator response elements, PPREs)结合，然后通过蛋白质间的直接相互作用或间 接通过转录中介因子与基础转录(basic transcription machinery)成分相互作用，促进 或抑制靶基因的表达，从而引起生物学效应。人和小鼠的PPARa基因在染色体上的位置已被确定。人的PPARa基因被定位 于6个基因和一些遗传标记相连锁的22号染色体上的22ql2_ql3区，编码468个氨基 酸。(Sher Τ. , Yi H. F. , McBride 0. W. , et al. cDNA cloning, chromosomal mapping, and functional characterization of the human peroxisome proliferator activated receptor. Biochemistry, 1993, 32 (21) :5598_604)。小鼠的 PPARa 基因被定位于 15 号 染色体，同样编码468个氨基酸。人和鼠PPARα基因都包含8个外显子和7个内含子，且 有共同的特征第一外显子、第二外显子和第三外显子的部分序列转录为mRNA的5’端非 翻译区，剩余的第三外显子及4-8外显子编码PPARa的氨基酸序列，而第8外显子最后的 232bp 转录为 3，端非番羽译区(Gearing K. L. , Crickmore A. and Gustafsson J. A. Structure of the mouse peroxisome proliferator activated receptor alpha gene. Biochem Biophys Res Commun, 1994，199 (1) :255_63)。鸡 PPAR α 基因位于 1 号染色体，全长 37. 15kb(NC_006088. 2)，CDS 为 1407bp (AF163809 或 NM_001001464)。PPARa的配体可分为两类合成化合物(synthetic xenobiotics)和生物活性 分子(biological molecules)，前者是外源性的，后者是内源性的。合成配体，即过氧化 物酶体增殖剂，简称PPs。包括降血脂药物(安妥明clofibrate、非诺贝特fenofibrate、二甲苯氧庚酸gemfibrozil、苯扎贝特bezafibrate、环丙贝特ciprofibrate、萘酚平 nafenopin等)和用来制作聚乙烯塑料的邻苯二甲酸盐(二邻苯二甲酸酯di_ (2-ethylhex yl)-phthalate (DEHP)和二 己二酸 di_ (2-ethylhexyl) adipate (DEHA))。另外一些除草剂 (herbicides)、杀虫剂(pesticides)、工业溶剂(industrial solvents)、食品调味剂(food flavoring agents)禾口 白三炼 D4 受体 吉抗齐[J (leukotriene D4 receptor antagonists) 也都具有PPARci配体功能。天然的生物活性分子作为PPARa的配体，主要是脂肪酸及其 衍生物，也在试验中得到了证实(Forman B. M.，Chen J. and Evans R. Μ.，Hypolipidemic drugs, polyunsaturated fatty acids, and eicosanoids are ligands for peroxisome proliferator-activated receptors alpha and delta. Proc Natl Acad Sci USA,1997, 94(9) :4312-7.)。PPARa在体内与RXR形成功能性的异二聚体PPARa /RXR，PPARa /RXR和辅阻遏 物一起抑制靶基因的转录，当与配体结合时，辅阻遏物将被释放，PPARa/RXR和靶基因的 DNA特异序列PPRE结合，来调控靶基因的转录。PPARa的靶基因是很丰富的，在这些靶基 因中，有肝脂肪酸结合蛋白、脂肪酸转运蛋白、乙酰辅酶A合成酶、细胞色素P450CYP4A6、 肉碱脂酰转移酶I、酰基辅酶A脱氢酶、苹果脱氢酶等。它们促进肝的脂肪酸摄取，促进 脂肪酸的分解和氧化，影响脂肪酸和胆固醇在血浆中的转运。肝脏是动物脂质代 谢的重要部位，肝脏的PPARa几乎转录调节了脂质代谢的所有过程，从脂肪酸的合成， 到脂肪酸的转运及氧化，还包括固醇类的代谢(Desvergne B. and Wahli W. Peroxisome proliferator-activated receptors :nuclear control of metabolism.Endocr Rev, 1999，20 (5) :649-88.)。对PPAR α缺失[PPAR α (-/-)]小鼠、过氧化物酶体脂酰辅酶A氧化酶缺失 [Α0Χ (-/)]小鼠及两者均缺失(DKO)小鼠的研究发现，禁食48 72h，PPAR α (-/-)和DKO 小鼠均引起脂肪酸氧化受损及肝细胞脂肪变性，而且DKO较PPAR α (-/-)小鼠出现更为严 重的肝细胞脂肪变性。而AOX(-/_)小鼠则表现为PPARa的持续活化，线粒体脂肪酸β 氧化本文档来自技高网...

【技术保护点】
辅助鉴别具有不同脂肪性状鸡的方法，是检测待测鸡的１号染色体中序列表的序列３所示ＤＮＡ自５’末端第３０１位核苷酸是Ｔ还是Ｃ，确定待测鸡是ＴＴ基因型、ＣＴ基因型还是ＣＣ基因型，ＣＣ基因型鸡的脂肪性状优于ＴＴ基因型鸡和ＣＴ基因型鸡；所述脂肪性状优体现为如下性状中的至少一种：腹脂率低、皮厚低、腹脂重低、活体重高、屠体重高、半净膛高、全净膛高和胸肌重高；所述ＣＣ基因型为序列３所示ＤＮＡ自５’末端第３０１位核苷酸为Ｃ的纯合体；所述ＴＴ基因型为序列３所示ＤＮＡ自５’末端第３０１位核苷酸为Ｔ的纯合体；所述ＣＴ基因型为它们的杂合体。

【技术特征摘要】
辅助鉴别具有不同脂肪性状鸡的方法，是检测待测鸡的1号染色体中序列表的序列3所示DNA自5’末端第301位核苷酸是T还是C，确定待测鸡是TT基因型、CT基因型还是CC基因型，CC基因型鸡的脂肪性状优于TT基因型鸡和CT基因型鸡；所述脂肪性状优体现为如下性状中的至少一种腹脂率低、皮厚低、腹脂重低、活体重高、屠体重高、半净膛高、全净膛高和胸肌重高；所述CC基因型为序列3所示DNA自5’末端第301位核苷酸为C的纯合体；所述TT基因型为序列3所示DNA自5’末端第301位核苷酸为T的纯合体；所述CT基因型为它们的杂合体。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述待测鸡为如下(a)或(b)(a) CC基因型的鸡和TT基因型的鸡；(b)CC基因型的鸡和CT基因型的鸡。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述确定待测鸡是TT基因型、CT基因 型还是CC基因型的方法包括如下步骤(1)以待测鸡的基因组DNA为模板，用序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示 DNA组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；(2)用限制性内切酶EcoRI酶切PCR扩增产物，得到酶切产物；如果酶切产物只有一种 DNA,且为573bp，待测鸡为CC基因型；如果酶切产物为两种DNA，分别为297bp和...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓学梅，靳薇，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]