【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，尤其涉及大豆gmwrky33基因、重组载体及其转化体在提高作物中病程相关蛋白基因pr的表达量中的应用。
技术介绍
1、大豆疫霉根腐病是由大豆疫霉菌(phytophthora sojae kaufmann&gerdemann)侵染引起的严重危害世界大豆生产的土传性卵菌病害。该病菌具有生理小种变化快，毒力结构复杂，容易导致抗病品种的抗性丧失的特点。
2、当植物受到逆境胁迫时，高温、高盐、干旱、病原菌等逆境信号通过一系列信号转导途径级联放大进入细胞核内，从而激活防御相关基因表达，进而参与到植物对逆境胁迫的应答反应中。其中，myc、wrky、erf、bzip等家族转录因子在这一系列调控机制中起到非常重要的作用。其中，wrky家族作为植物特有的转录因子，主要参与并调控植物生长发育、形态建成、代谢调控和抗逆信号转导途径建立的过程，因其蛋白质序列n端的60个氨基酸组成的高度保守结构域wrkygqk而得名。wrky家族转录因子在植物各种生命活动进程中广泛存在，暗示其在植物进化历程中发挥着关键作用。
3、目前研究表明，在多种植物中，wrky转录因子对不同生物胁迫的防御反应中往往表现出积极的作用。例如：fan等(fan s,fan s,dong l,et al.gmwrky31 andgmhdl56enhances resistance to phytophthora sojae by regulating defense-related geneexpression in soybean[j
4、目前，人们对大豆疫霉菌的分子防御机制尚不明晰。而通过基因工程手段，挖掘抗病相关基因，研究其分子防御机制，对于阐明大豆应答生物胁迫的分子机理及抗病基因工程育种具有重要意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供大豆gmwrky33基因、重组载体及其转化体在提高作物中病程相关蛋白基因pr的表达量中的应用，所述大豆gmwrky33基因过表达时能够提高大豆中病程相关蛋白基因的表达量及抗氧化防御系统的关键酶活性。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、本专利技术提供了大豆gmwrky33基因在提高作物中病程相关蛋白基因pr的表达量中的应用，在作物中过表达大豆gmwrky33基因，所述大豆gmwrky33基因如seq id no.1所示。
4、本专利技术还提供了大豆gmwrky33基因在提高作物抗氧化防御系统的关键酶活性中的应用，在作物中过表达大豆gmwrky33基因，所述大豆gmwrky33基因如seq id no.1所示。
5、本专利技术还提供了一种过表达大豆gmwrky33基因的重组载体，包括大豆gmwrky33基因和pcambia3301过表达载体，所述大豆gmwrky33基因如seq id no.1所示。
6、本专利技术还提供了所述过表达大豆gmwrky33基因的重组载体的构建方法，包括如下步骤：
7、(1)对pcambia3301过表达载体进行线性化处理，获得线性化表达载体pcambia3301；
8、(2)将大豆gmwrky33基因连接至pmdtm18-t载体上，再转化至大肠杆菌感受态细胞中扩繁，获得pmdtm18-t-gmwrky33；
9、(3)以获得的pmdtm18-t-gmwrky33为模板，设计两端带有载体末端序列的特异性引物，并通过pcr扩增出gmwrky33基因的目的片段；
10、(4)将目的片段插入线性化表达载体pcambia3301中，获得过表达大豆gmwrky33基因的重组载体。
11、本专利技术还提供了所述的重组载体在提高作物对大豆疫霉根腐病抗性中的应用。
12、本专利技术还提供了一种过表达大豆gmwrky33基因的转化体，将过表达大豆gmwrky33基因的重组载体导入大肠杆菌中，所述大豆gmwrky33基因如seq id no.1所示。
13、优选的，所述大肠杆菌为trans1-t1感受态细胞。
14、本专利技术还提供了所述的转化体在提高作物对大豆疫霉根腐病抗性中的应用。
15、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
16、本专利技术通过实验研究发现，大豆gmwrky33基因不仅能够通过调控pr基因的表达来参与到植物的抗病防御反应中，还能够通过抗氧化防御途径来提高大豆对大豆疫霉菌的抗性。本专利技术能够为抗大豆疫霉根腐病相关机制的研究提供重要的基因基础及理论支持，为推进植物防御系统的研究和应用以及培育高抗病的大豆新品种提供宝贵的基因资源，在大豆抗病基因工程育种中具有重要的应用价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.大豆GmWRKY33基因在提高作物中病程相关蛋白基因PR的表达量中的应用，其特征在于，在作物中过表达大豆GmWRKY33基因，所述大豆GmWRKY33基因如SEQ ID No.1所示。
2.大豆GmWRKY33基因在提高作物抗氧化防御系统的关键酶活性中的应用，其特征在于，在作物中过表达大豆GmWRKY33基因，所述大豆GmWRKY33基因如SEQ ID No.1所示。
3.一种过表达大豆GmWRKY33基因的重组载体，其特征在于，包括大豆GmWRKY33基因和pCAMBIA3301过表达载体，所述大豆GmWRKY33基因如SEQ ID No.1所示。
4.如权利要求3所述过表达大豆GmWRKY33基因的重组载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.如权利要求3所述的重组载体在提高作物对大豆疫霉根腐病抗性中的应用。
6.一种过表达大豆GmWRKY33基因的转化体，其特征在于，将过表达大豆GmWRKY33基因的重组载体导入大肠杆菌中，所述大豆GmWRKY33基因如SEQ ID No.1所示。
7.根据权
8.如权利要求6或7所述的转化体在提高作物对大豆疫霉根腐病抗性中的应用。
...【技术特征摘要】
1.大豆gmwrky33基因在提高作物中病程相关蛋白基因pr的表达量中的应用，其特征在于，在作物中过表达大豆gmwrky33基因，所述大豆gmwrky33基因如seq id no.1所示。
2.大豆gmwrky33基因在提高作物抗氧化防御系统的关键酶活性中的应用，其特征在于，在作物中过表达大豆gmwrky33基因，所述大豆gmwrky33基因如seq id no.1所示。
3.一种过表达大豆gmwrky33基因的重组载体，其特征在于，包括大豆gmwrky33基因和pcambia3301过表达载体，所述大豆gmwrky33基因如seq id no.1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐鹏飞，张淑珍，孙岩，吴俊江，方馨，何晟芙，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。