【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测领域，涉及一种白介素-6aie荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、白介素-6(interleukin-6，il-6)是一种多功能细胞因子，是由纤维母细胞、单核或巨噬细胞、t淋巴细胞、b淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞以及多种瘤细胞所产生。il-6具有调节免疫应答、急性期反应及造血功能，并在机体的抗感染免疫反应中起重要作用。
2、目前临床应用和研究最广泛的感染标志物是降钙素原(pct)、c反应蛋白(crp)。而白介素-6(il-6)在自身的多种临床用途中，其作为感染标志物的意义正在逐渐为业内所研究和重视，并越来越多地应用于临床，其具有如下特点：(1)当感染和炎症发生后，il-6率先生成且水平迅速升高，可在2h达高峰，其升高水平与感染的严重程度相一致，并诱导pct和crp分别在感染2h和6h后开始升高。(2)il-6是急性感染早期诊断的灵敏指标，尤其可作为对新生儿早期脓毒症的鉴别诊断指标，并对制定患儿治疗方案和改善预后具有重要的参考意义。(3)il-6升高与疾病的严重程度呈正相关，增高幅度反应病情的严重程度。在危重患者中可持续长时间高水平的表达，可作为评估脓毒症和多器官功能障碍综合征患者严重程度和预后的敏感指标，并能更快反映抗生素治疗的效果。(4)il-6鉴别感染与非感染的敏感性高于pct和crp，还可用来评价感染严重程度和评估预后，当il-6>1000μg/l时预警重症感染患者预后不良，提示临床医师及时调整诊疗方案。因此近年来il-6作为一种炎症标志物在临床应用上越来越广泛。p>
3、目前在国内，白介素-6的检测在临床应用上主要以化学发光试剂和荧光免疫层析试剂为主，化学发光试剂价格昂贵，对于患者来说经济负担较大，不利于基层推广；而传统的荧光免疫层析方法检测灵敏度较低，线性范围较窄。由于白介素-6在健康人群中的含量极低＜7pg/ml，现有的荧光免疫层析试剂盒无法满足该项目灵敏度的要求；同时脓毒血症患者体内的白介素-6会出现＞5000pg/ml的现象，所以试剂盒需具备宽线性范围。因此当前亟需设计一种新型的白介素-6的检测方法及试剂盒来满足高灵敏度、宽线性范围的需求。
4、cn111856041a公开了一种pct/il-6荧光定量快速检测试纸条及其制备方法和应用，该专利技术中所述检测试纸条由背衬卡以及粘贴在背衬卡上的滤血膜样品垫、荧光微球结合垫、硝酸纤维素膜检测垫和吸水垫组成，所述硝酸纤维素膜检测垫上沿长度方向依次平行间隔设置有第一检测线、第二检测线和质控线，所述第一检测线和第二检测线上分别包被有il-6特异性纳米抗体和pct特异性纳米抗体，质控线上包被有羊抗兔igg。该试纸条可同时检测il-6、pct两个标靶，有效避免单一指标对感染类别判断的误差，且具有检测范围宽、灵敏度高、准确度高、检测快速简便等特点，能及时帮助临床医师尽快确定患者的治疗方案，进而提高患者治疗成功率，具有重要的临床应用价值。该专利技术未对试剂的il-6的灵敏度做出说明，仅说明了检测0～1000pg/ml的临床样本40例，相关系数r2＝0.9912(r2≥0.95)，回归方程为y＝0.9863x+1.8596。该专利技术制备的检测试剂与对比试剂相关性较好。
5、cn109975557a公开了il-6/pct联合检测时间分辨检测试剂盒及方法，该专利技术涉及一种利用时间分辨荧光免疫层析技术的灵敏性，利用稀土钒酸盐纳米荧光标记材料，结合干式免疫荧光分析仪实现高灵敏度、可准确定量、简便快捷的il-6/pct联合检测时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒及检测方法。该专利技术检测试剂盒能够准确定量检测人血清、血浆和全血样本中白介素6和降钙素原的含量，通过滤血膜样品垫的处理可实现样本无需预处理和稀释液稀释，利用时间分辨荧光微球检测技术，可避免样本本身荧光干扰，稀土钒酸盐纳米材料具有背景低，荧光信号强，信噪比高等优势，标记通过共价键将稀土钒酸盐纳米颗粒与抗体连接，标记产物稳定，具有检测范围宽、灵敏度高、准确度高、检测快速简便等特点。该专利技术的有益效果主要体现在：本专利技术检测卡及试剂盒能够准确定量检测人血清、血浆和全血样本中il-6和pct的含量，样本无需进行预处理和稀释液稀释，利用时间分辨荧光微球检测技术，可避免样本本身荧光干扰，标记通过共价键将微球与抗体连接，标记产物稳定，具有检测范围宽(pct为0.05～100ng/ml，il-6为1.5～1000pg/ml)、灵敏度高(pct检出限0.05ng/ml，il-6检出限为1.5pg/ml)、准确度高、检测快速简便等特点。但是该专利技术的il-6检测范围较窄，检测上限1000pg/ml，容易产生假阴性结果，影响疾病的诊断。
6、cn110596404a公开了一种il-6生物素-链霉亲和素免疫层析检测卡，包括pvc底板、样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸从前到后依次设置在pvc底板上，所述包被膜上设有检测t线和质控c线，所述结合垫上设有偶联示踪标记物的抗il-6单克隆抗体以及偶联生物素的抗il-6单克隆抗体；所述检测t线包被链霉亲和素，所述质控c线包被多克隆抗体。该专利技术依据双抗体夹心法原理，利用免疫层析技术定量检测人血清、血浆、全血样本中il-6的含量，可以准确获知样本中il-6的浓度，提高检测灵敏度，尤其是大大提高低端值的检测敏感度。该专利技术提供的技术与传统荧光免疫层析法比较，提高了灵敏度和检出率，检测范围为2～4000pg/ml，且本底更低，性能得以明显提升。但该专利技术采用的示踪物为胶体金、荧光素、荧光微球以及量子点中的一种，所选用的荧光材料容易荧光淬灭，光稳定性较差，试剂稳定性较差。
7、cn109374903a公开了一种超灵敏il-6荧光免疫层析测定试剂盒和测定方法，试剂盒由荧光微球标记的il-6单克隆抗体溶液和免疫层析试纸条组成，il-6单克隆抗体溶液包含特定浓度的荧光微球，抗体与荧光微球通过生物素-亲和素偶联。该专利技术提供的测定方法，测定线性范围1.72～1000pg/ml，线性相关系数为0.997；灵敏度为1.72pg/ml；精密度平均cv<10％；准确度平均回收率为97.5％。但该专利技术采用的荧光微球分别是亲和素-时间分辨荧光微球、亲和素-量子点微球中的至少一种，所选用的荧光材料容易荧光淬灭，光稳定性较差，试剂稳定性较差。再者该专利技术的il-6检测范围较窄，检测上限1000pg/ml，容易产生假阴性结果，影响疾病的诊断。
8、因此，在本领域，期望提供一种材料光稳定性好、具有高灵敏度、宽检测范围的il-6荧光免疫层析试剂盒。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种白介素-6aie荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其应用。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一方面，本专利技术提供一种白介素-6aie荧光免疫层析试纸条，所述试纸条包括衬底和沿层析方向依次固定于所述衬底上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光标记物ⅰ和本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包括衬底和沿层析方向依次固定于所述衬底上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光标记物Ⅰ和荧光标记物Ⅱ，所述荧光标记物Ⅰ为AIE荧光微球标记的IL-6单克隆抗体1，所述荧光标记物Ⅱ为AIE荧光微球标记的羊抗鸡IgY；所述硝酸纤维素膜上按样品流动方向从前到后依次设置包被有IL-6单克隆抗体2的检测线和包被有鸡IgY抗体的质控线；所述IL-6单克隆抗体1和IL-6单克隆抗体2为针对IL-6抗原不同表位的两种抗体。
2.根据权利要求1所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述AIE荧光微球中AIE分子选自下列AIE-2、AIE-4或AIE-5分子中的至少一种：
3.根据权利要求1所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述AIE荧光微球为基态下稳定，在365～450nm的激发光源作用下发射出波长范围在510～620nm的荧光的AIE荧光微球；
4.根据权利要求1所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述AIE荧光微球为
5.根据权利要求4所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述AIE荧光微球的制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫上包被的AIE荧光微球标记的IL-6单克隆抗体1的量为0.00002～0.0004mg/cm2，包被的AIE荧光微球标记的羊抗鸡IgY的量为0.000002～0.000032mg/cm2；
7.根据权利要求1所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的孔径为3μm～12μm，长度为2cm～3cm，宽度为3.0mm～4.0mm；
8.一种白介素-6AIE荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1-7中任一项所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条。
9.根据权利要求8所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括设置在试纸条外侧的卡壳，所述卡壳包括相互卡接的上卡壳和下卡壳，所述下卡壳设有放置试纸条的卡槽，所述上卡壳对应于试纸条的样品垫处设有加样口、对应于试纸条的硝酸纤维素膜处设有观察窗，硝酸纤维素膜上的检测线和质控线均暴露于观察窗处；
10.根据权利要求1-7中任一项所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试纸条或权利要求8或9所述的白介素-6AIE荧光免疫层析试剂盒在定量检测IL-6中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种白介素-6aie荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包括衬底和沿层析方向依次固定于所述衬底上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光标记物ⅰ和荧光标记物ⅱ，所述荧光标记物ⅰ为aie荧光微球标记的il-6单克隆抗体1，所述荧光标记物ⅱ为aie荧光微球标记的羊抗鸡igy；所述硝酸纤维素膜上按样品流动方向从前到后依次设置包被有il-6单克隆抗体2的检测线和包被有鸡igy抗体的质控线；所述il-6单克隆抗体1和il-6单克隆抗体2为针对il-6抗原不同表位的两种抗体。
2.根据权利要求1所述的白介素-6aie荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述aie荧光微球中aie分子选自下列aie-2、aie-4或aie-5分子中的至少一种：
3.根据权利要求1所述的白介素-6aie荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述aie荧光微球为基态下稳定，在365～450nm的激发光源作用下发射出波长范围在510～620nm的荧光的aie荧光微球；
4.根据权利要求1所述的白介素-6aie荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述aie荧光微球为聚合物包裹aie分子得到的微球；
5.根据权利要求4所述的白介素-6aie荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述aie荧光微球的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐本忠，解巧丽，程松，刘勇，王志明，李亚伟，胡亚新，
申请(专利权)人：广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院，
类型：发明
国别省市：
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