【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种快速有效分离提取土壤样品中雌激素的前处理方法及应用，属于样品前处理方法。
技术介绍
1、雌激素主要有天然雌激素和人工合成雌激素，人工合成雌激素的不当使用，会影响动物正常的生长、发育、繁殖等行为。最终这些雌激素经过食物链进入人体，对人类健康带来潜在危险。水环境中的雌激素通过地表径流和污水处理厂的出水进入到土壤环境中，研究调查结果显示，大多数国家的土壤中检出μg/kg浓度水平的雌激素。雌酮(e1)、17β-雌二醇(e2)和17α-乙炔雌二醇(ee2)是三种具有代表性的雌激素，微量就能对生物体内的激素合成、分泌、转运和活性等产生效应，影响生物体正常的生长、发育和繁殖。因此，一种有效的提取和纯化土壤中雌激素的前处理方法尤为重要。
2、对土壤样品中的雌激素进行检测分析，样品的前处理方法十分重要。现有的土壤前处理方法需要经过快速溶剂萃取、液液萃取、固相萃取和富集纯化等多个步骤实现分离富集，最终通过液相色谱-质谱联用仪对样品中存在的一种或多种雌激素进行检测。可见，现有技术的前处理步骤较多，操作复杂，并且需要使用大量的有机溶剂，过程耗时长，成本较高，检测效率无法得到提升。
技术实现思路
1、(一)要解决的技术问题
2、为了解决现有技术的上述问题，本专利技术提供一种快速有效分离提取土壤样品中雌激素的前处理方法及应用。
3、(二)技术方案
4、为了达到上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：
5、一种快速有效分离提取土壤
6、s1、样品提取
7、将采集的土壤样品进行冷冻干燥，粉碎过筛，和同等质量的硅藻土混合均匀放入萃取池，以甲醇和丙酮作为第一萃取剂，使用快速溶剂萃取仪提取固体样品中的雌激素；然后用平行蒸发仪浓缩提取液体积至1-1.5ml的浓缩液；
8、s2、提取液净化
9、加入碱液溶解浓缩液后，再加入等体积的正己烷/甲基叔丁基醚作为第二萃取剂进行液液萃取提取目标化合物，将上层萃取相吸出后再次加入新的第二萃取剂，重复三次操作并将所有第二萃取液混合。然后将萃取液在氮气流下缓慢吹至近干，将底物用有机溶剂溶解定容至1ml，涡旋、过滤后转移到进样瓶中，待测；
10、s3、高效液相色谱-串联质谱联用仪测定步骤s2中进样瓶中雌激素的物质峰面积；
11、s4、标准曲线的绘制
12、将雌激素的标准品配置为一系列梯度浓度的标准溶液；按步骤s3的高效液相色谱-串联质谱联用检测方法进行测定，以浓度为横坐标，对应的物质峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
13、s5、将测得的雌激素的物质峰面积代入标准曲线进行计算，从而确定样品中雌激素的浓度。
14、如上所述的前处理方法及应用，优选地，所述雌激素为雌酮、17β-雌二醇和17α-乙炔雌二醇。
15、如上所述的前处理方法及应用，优选地，在步骤s1中，所述快速溶剂萃取仪的第一萃取剂为体积比为1:1的丙酮和甲醇的混合物。
16、如上所述的前处理方法及应用，优选地，在步骤s1中，所述快速溶剂萃取仪的温度为80℃，压力为1500psi，静态萃取8分钟，循环2次。
17、如上所述的前处理方法及应用，优选地，在步骤s2中，所述碱液为40g/l氢氧化钠溶液；正己烷/甲基叔丁基醚为按体积比为9:1的混合物。
18、如上所述的前处理方法及应用，优选地，在步骤s2中，有机溶剂为甲醇，过滤使用孔径0.22μm的聚四氟乙烯针式滤头进行过滤。
19、如上所述的前处理方法及应用，优选地，在步骤s3中，选用德国agilent 1290-6470高效液相色谱-串联质谱联用仪对雌激素进行检测，液相色谱的色谱柱使用反相色谱柱extend-c18型号50mm×2.1mm，1.8μm。
20、如上所述的前处理方法及应用，优选地，在步骤s3中，色谱柱柱温为30℃，进样量10μl，流速0.20ml/min，以甲醇和0.3％氨水溶液作为流动相；梯度洗脱程序为0-0.2min，30％甲醇；0.2-1min，30％甲醇-70％甲醇；1-3min，70％甲醇-100％甲醇；3-3.5min，100％甲醇-30％甲醇；3.5-5.5min，30％甲醇。
21、如上所述的前处理方法及应用，优选地，在步骤s3中，质谱检测使用负离子模式的电喷雾离子源(esi)，选择动态多反应监测扫描方式；氮气作为帘幕气，喷雾气和碰撞气；流速设定为10l/min，恒温350℃；鞘流气为11l/min，恒温400℃；毛细管电压为3500v，喷嘴电压为2000v，喷雾压力为45psi，delta电子倍增电压为800v。
22、(三)有益效果
23、本专利技术的有益效果是：
24、本专利技术提供的一种快速有效分离提取土壤样品中雌激素的前处理方法及应用，仅通过快速溶剂萃取和液液萃取两个步骤就能较好的提取土壤中的目标化合物，前处理过程简单，时间缩短减少了损耗，减少了有机试剂使用量，降低了实验成本和环境影响，并有较好的回收率，提高样品的检出效率。
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1.一种快速有效分离提取土壤样品中雌激素的前处理方法及应用，其特征在于，其包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，所述雌激素为雌酮、17β-雌二醇和17α-乙炔雌二醇。
3.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤S1中，所述快速溶剂萃取仪使用第一萃取剂为体积比为1:1的丙酮和甲醇的混合物。
4.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤S1中，所述快速溶剂萃取仪的温度为80℃，压力为1500psi，静态萃取8分钟，循环2次。
5.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤S2中，所述碱液为40g/L氢氧化钠溶液；正己烷/甲基叔丁基醚为按体积比为9:1的混合物。
6.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤S2中，有机溶剂为甲醇，过滤使用孔径0.22μm的聚四氟乙烯针式滤头。
7.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤S3中，选用德国Agilent1290-6470高效液相色谱-串联质谱联用仪对雌激素进行检测，液相
8.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤S3中，色谱柱柱温为30℃，进样量10μL，流速0.20mL/min，以甲醇和0.3％氨水溶液作为流动相；梯度洗脱程序为0-0.2min，30％甲醇；0.2-1min，30％甲醇-70％甲醇；1-3min，70％甲醇-100％甲醇；3-3.5min，100％甲醇-30％甲醇；3.5-5.5min，30％甲醇。
9.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤S3中，质谱检测使用负离子模式的电喷雾离子源，选择动态多反应监测扫描方式；氮气作为帘幕气，喷雾气和碰撞气；流速设定为10L/min，恒温350℃；鞘流气为11L/min，恒温400℃；毛细管电压为3500V，喷嘴电压为2000V，喷雾压力为45psi，Delta电子倍增电压为800V。
...【技术特征摘要】
1.一种快速有效分离提取土壤样品中雌激素的前处理方法及应用，其特征在于，其包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，所述雌激素为雌酮、17β-雌二醇和17α-乙炔雌二醇。
3.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤s1中，所述快速溶剂萃取仪使用第一萃取剂为体积比为1:1的丙酮和甲醇的混合物。
4.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤s1中，所述快速溶剂萃取仪的温度为80℃，压力为1500psi，静态萃取8分钟，循环2次。
5.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤s2中，所述碱液为40g/l氢氧化钠溶液；正己烷/甲基叔丁基醚为按体积比为9:1的混合物。
6.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤s2中，有机溶剂为甲醇，过滤使用孔径0.22μm的聚四氟乙烯针式滤头。
7.如权利要求1所述的前处理方法及应用，其特征在于，在步骤s3中，选用德...
【专利技术属性】
技术研发人员：史江红，孙姝晗，郭伟，王云鹤，葛卉，李滨，许宗林，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：
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