【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，更具体的说是涉及一种牛cybb基因的单碱基错义突变及其应用。
技术介绍
1、我国奶牛养殖业疫病问题突出，常规育种和现有疫病防控措施无法解决结核病等重大疫病防控难题；结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，mtb)感染所致的结核病，目前是重大危及人体健康的国际性重要感染疾病；全球约1/4人口是mtb的潜伏感染者。同时，牛结核病(bovine tuberculosis，btb)是一种由细胞内牛分枝杆菌(m.bovis)感染引起的家畜慢性呼吸道传染病，特别在奶牛中，据保守预测，该疾病每年将为全世界农民造成多达30亿美金的经济损失。目前挖掘奶牛抗结核的功能基因非常有限。
2、cybb基因(也称为gp91phox、nox2等)编码cytochrome b-245beta chain，是人还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadph)氧化酶复合物的重要组成部分。它主要在吞噬细胞(包括粒细胞、单核细胞和巨噬细胞)中表达，属于蛋白编码基因，其突变易导致遗传性免疫缺陷病症—x-cgd(x连锁慢性肉芽肿病)；cybb又是msmd(遗传性分枝杆菌易感综合征mendelian susceptibility to mycobacterial disease)的重要基因，但机理尚未可知。同时，cybb是铁死亡重要驱动基因。mtb感染巨噬细胞引起细胞发生铁死亡是否与cybb基因调控有关，mtb是否通过cybb调控从而获得胞内铁等具体机制尚未得知。
3、因此，提供一种牛cybb基因的单碱
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种牛cybb基因的单碱基错义突变及其应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种牛cybb基因的单碱基错义突变，单碱基错义突变的牛cybb基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4、进一步，含有所述的牛cybb基因的单碱基错义突变的载体。
5、进一步，含有所述的牛cybb基因的单碱基错义突变的宿主菌。
6、进一步，所述的牛cybb基因的单碱基错义突变、所述的载体或所述的宿主菌在制备抗结核病制剂中的应用。
7、进一步，所述的牛cybb基因的单碱基错义突变、所述的载体或所述的宿主菌在制备抗结核分枝杆菌感染制剂中的应用。
8、进一步，所述的牛cybb基因的单碱基错义突变、所述的载体或所述的宿主菌在制备降低结核分枝杆菌在巨噬细胞中增殖制剂中的应用。
9、进一步，牛cybb基因的单碱基错义突变通过控制宿主铁死亡降低结核分枝杆菌在巨噬细胞中的增殖。
10、进一步，所述的牛cybb基因的单碱基错义突变、所述的载体或所述的宿主菌在抗结核病奶牛育种中的应用。
11、通过结核分支杆菌h37ra感染巨噬细胞raw264.7和j774a.1细胞，发现牛cybb基因的野生型(bcybb-wt)和c.105614637a&t单碱基突变体(bcybb-mut)均能极显著降低h37ra感染24h内胞内fe2+的浓度；然而，bcybb-wt延续了细胞在感染24h后的胞内fe2+含量，而与pcmv-ha空载和bcybb-wt相比，bcybb-mut却能极显著降低感染24h后胞内fe2+的含量。此外，bcybb-mut能降低胞内因为结合分支杆菌感染而引起的大量脂质过氧化物丙二醛mda，同时能清除线粒体释放的大量活性氧ros。从而抑制h37ra在细胞内的增殖，实现巨噬细胞对结核分支杆菌的免疫作用。
12、该基因重要单碱基突变以及发现突变体得出重要功能，有望利用基因编辑技术，创制高产、抗病奶牛育种新材料，提升种业自筹创新能力。
13、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种牛cybb基因的单碱基错义突变及其应用，牛cybb功能基因的重要单核苷酸突变，达到了降低结核分支杆菌感染巨噬细胞引发铁死亡的作用，同时，降低了的分支杆菌在细胞内的增殖能力。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种牛CYBB基因的单碱基错义突变，其特征在于，单碱基错义突变的牛CYBB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.含有权利要求1所述的牛CYBB基因的单碱基错义突变的载体。
3.含有权利要求1所述的牛CYBB基因的单碱基错义突变的宿主菌。
4.权利要求1所述的牛CYBB基因的单碱基错义突变、权利要求2所述的载体或权利要求3所述的宿主菌在制备抗结核病制剂中的应用。
5.权利要求1所述的牛CYBB基因的单碱基错义突变、权利要求2所述的载体或权利要求3所述的宿主菌在制备抗结核分枝杆菌感染制剂中的应用。
6.权利要求1所述的牛CYBB基因的单碱基错义突变、权利要求2所述的载体或权利要求3所述的宿主菌在制备降低结核分枝杆菌在巨噬细胞中增殖制剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，牛CYBB基因的单碱基错义突变通过控制宿主铁死亡降低结核分枝杆菌在巨噬细胞中的增殖。
8.权利要求1所述的牛CYBB基因的单碱基错义突变、权利要求2所述的载体或权利要求3所述的宿主菌在抗结核病奶牛育种
...【技术特征摘要】
1.一种牛cybb基因的单碱基错义突变，其特征在于，单碱基错义突变的牛cybb基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.含有权利要求1所述的牛cybb基因的单碱基错义突变的载体。
3.含有权利要求1所述的牛cybb基因的单碱基错义突变的宿主菌。
4.权利要求1所述的牛cybb基因的单碱基错义突变、权利要求2所述的载体或权利要求3所述的宿主菌在制备抗结核病制剂中的应用。
5.权利要求1所述的牛cybb基因的单碱基错义突变、权利要求2所述的载体...
【专利技术属性】
技术研发人员：高元鹏，汪浩鑫，张涌，韩静，杨婧，祝振亮，樊阿娇，宋颜亮，张新艳，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：
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