【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，特别是涉及一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法。
技术介绍
1、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)是乳酸杆菌中的一种，常存在于发酵的蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体胃肠道的益生菌群，具有维持肠道内菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种功能。
2、微胶囊包埋技术是以天然或合成材料为壁材，将芯材益生菌包裹成微胶囊制备得到包埋型益生菌的技术，可以有效避免菌株与外界不利环境的直接接触，减少活性物质在加工或贮藏过程中的损失，保证产品的稳定性，同时能克服胃酸破坏溶解，使芯材具有较好的肠道靶向性。因此，现有技术中常通过制备植物乳杆菌微胶囊来提高其应用效果并延长货架期。
3、包埋型益生菌的活菌数是目前评价产品质量的指标之一，理想的活菌计数方法应具备计数结果准确和重现性好等特点。目前有技术改进通过利用由碳酸氢钠和二水合柠檬酸三钠组成的解囊液进行包埋型益生菌产品的活菌数量检测，但在解囊步骤即出现10-30％的活菌损失，从而导致活菌检测结果出现较大偏差。因此，亟需开发一种计数结果准确和重现性好的包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，以解决上述现有技术存在的问题，利用该检测方法进行包埋型益生菌产品的活菌数量检测，检测结果准确，重现性良好。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种包埋型益生
4、所述检测方法包括以下步骤：
5、对所述包埋型益生菌产品进行溶胀处理后，利用壳聚糖酶进行酶解处理，之后离心取沉淀；
6、将所述沉淀和解囊液混合均匀，反应5min后，进行平板活菌计数，得到活菌含量；
7、所述解囊液为0.06mol/l二水合柠檬酸三钠溶液，ph8.0。
8、进一步地，所述溶胀处理的时间为20min。
9、进一步地，所述包埋型益生菌产品与所述壳聚糖酶的质量比为10:0.5。
10、进一步地，所述酶解处理的ph为5.5-6.0，时间为40-50min。
11、进一步地，所述沉淀和所述解囊液的质量体积比为1g:10ml。
12、进一步地，所述平板活菌计数包括梯度稀释的步骤，所述梯度稀释采用含有木质素磺酸钠的无菌生理盐水进行。
13、进一步地，在所述无菌生理盐水中，所述木质素磺酸钠的浓度为0.1wt％。
14、进一步地，所述平板活菌计数采用的检测培养基的配方为：胰蛋白胨8-12g/l、酵母浸膏4-6g/l、葡萄糖4-6g/l、菊粉1.5-3g/l、磷酸氢二钾0.1-0.2g/l、七水合硫酸镁0.2-0.3g/l、四水合硫酸锰0.02-0.05g/l、氯化钠1.5-2.5g/l和琼脂15.0-20g/l。
15、进一步地，所述检测培养基的配方为：胰蛋白胨10g/l、酵母浸膏5g/l、葡萄糖5g/l、菊粉2g/l、磷酸氢二钾0.2g/l、七水合硫酸镁0.2g/l、四水合硫酸锰0.05g/l、氯化钠2g/l和琼脂15g/l。
16、本专利技术公开了以下技术效果：
17、按照本专利技术的方法进行包埋型微胶囊的活菌数量检测，想较于现有技术的利用由碳酸氢钠和二水合柠檬酸三钠组成的解囊液进行检测的方法，活菌数量检测结果提高了14-27％。本专利技术采用壳聚糖酶进行酶解，破开微胶囊的壳聚糖外壳，使二水合柠檬酸三钠与海藻酸钠凝胶珠反应，使其迅速液化，从而使微胶囊快速完成解囊。利用本专利技术的酶解方法，无需使用碳酸氢钠进行破囊，并且将化学解囊的时间缩短一半，显著降低了活菌损失，从而大大提高了包埋型微胶囊的活菌数量检测结果的准确性。此外，包埋型微胶囊在制备过程中，植物乳杆菌容易发生粘连，形成生物膜而不易分离，本专利技术选择在梯度稀释过程中，添加木质素磺酸钠，从而有效打散植物乳杆菌，使检测数据的平行性良好；本专利技术还在检测培养基中添加了菊粉，其能够起到分散剂和促进植物乳杆菌生长的作用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，所述包埋型益生菌产品的囊壳为海藻酸钠/壳聚糖囊壳；
2.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述溶胀处理的时间为20min。
3.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述包埋型益生菌产品与所述壳聚糖酶的质量比为10:0.5。
4.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述酶解处理的pH为5.5-6.0，时间为40-50min。
5.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述沉淀和所述解囊液的质量体积比为1g:10mL。
6.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述平板活菌计数包括梯度稀释的步骤，所述梯度稀释采用含有木质素磺酸钠的无菌生理盐水进行。
7.根据权利要求6所述的活菌数量检测方法，其特征在于，在所述无菌生理盐水中，所述木质素磺酸钠的浓度为0.1wt％。
8.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述平板活菌计数采用的检测培养基的配方为：胰蛋白胨8-12g/L
9.根据权利要求8所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述检测培养基的配方为：胰蛋白胨10g/L、酵母浸膏5g/L、葡萄糖5g/L、菊粉2g/L、磷酸氢二钾0.2g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、四水合硫酸锰0.05g/L、氯化钠2g/L和琼脂15g/L。
...【技术特征摘要】
1.一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，其特征在于，所述包埋型益生菌产品的囊壳为海藻酸钠/壳聚糖囊壳；
2.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述溶胀处理的时间为20min。
3.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述包埋型益生菌产品与所述壳聚糖酶的质量比为10:0.5。
4.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述酶解处理的ph为5.5-6.0，时间为40-50min。
5.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述沉淀和所述解囊液的质量体积比为1g:10ml。
6.根据权利要求1所述的活菌数量检测方法，其特征在于，所述平板活菌计数包括梯度稀释的步骤，所述梯度稀释采用含有木质素磺酸钠的无菌生理盐水进行。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：马新，喻扬，郁雪平，
申请(专利权)人：善恩康生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。