【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及成纤维激活蛋白的分子影像、核医学和诊疗一体化，尤其是涉及一种成纤维细胞激活蛋白特异性诊疗一体化探针制备方法及应用。
技术介绍
1、恶性肿瘤是一种形成于极其复杂微环境中的异质性疾病。恶性肿瘤除癌细胞构成外，还包括大量内源性宿主基质细胞(如成纤维细胞、血管细胞和免疫细胞)以及细胞外基质(ecm)组分，这些统称为肿瘤微环境(tme)(cell.2011mar 4；144(5):646-74.)。近年来，作为决定癌细胞行为和疾病进展的关键因素，tme组分和ecm重塑引起了广泛关注。此外，由于形成tme的各种非恶性细胞占肿瘤总体积的90％，因而在某些癌症中，靶向tme的显像可能比靶向肿瘤细胞本身更具成效。在tme基质的所有细胞中，成纤维细胞至关重要，因为其生物学功能与肿瘤发展的所有阶段都有很强的相关性。癌症相关成纤维细胞(cafs)属于一种持续激活的成纤维细胞，占所有成纤维细胞的80％，具有很强的肿瘤调节作用。在肿瘤生长、侵袭、转移、细胞外基质重塑、治疗耐药性和免疫抑制等方面都发挥着关键作用。cafs只在大多数实体肿瘤中普遍存在(如乳腺癌、结肠癌、胰腺癌和前列腺癌等)，因而被认为是恶性肿瘤诊断和治疗的潜在靶点。活化的cafs中有包括成纤维激活蛋白(fap)在内的多种生物标志物。
2、fap是ii型跨膜蛋白，属于ii型丝氨酸蛋白酶家族。其作为同型二聚体时具有催化活性，二聚体分子质量为170kda(radiology.2023feb；306(2):e220749.)。fap专门切割脯氨酸后肽键，同时具有二肽基肽酶和肽
3、1994年，放射性核素131i标记靶向fap的单克隆抗体mabf19首次进行肿瘤患者在体显像，靶向fap的放射性药物研究自此拉开序幕(j clin oncol,1994,12(6):1193-203.)。一系列靶向fap的抗体、肽类药和小分子化合物作为前体被开发、优化，并成功实现放射性核素的标记，其中部分放射性药物已成功进入临床研究。antwerp大学的一个研究小组利用基于喹啉的小分子成功研制出一系列fap抑制剂(fapis)(j med chem.2014apr10；57(7):3053-74.)。并在临床前模型中评估了这些fapis的药代动力学，以开发可用于实践的pet/ct探针。其中，fapi-04/46在广泛的临床前肿瘤模型和人体受试者中显示出令人鼓舞的诊断效果，但其治疗效果因肿瘤保留时间相对较短而受到限制。另一种新型fapi衍生物fap-2286利用环肽作为结合单元，与fap抑制剂(fap-04/46)相比具有更长的肿瘤保留时间，并在临床前模型和临床研究中取得了良好的诊断和治疗效果(eur j nucl med molimaging.2023jun；50(7):1906-1918.)。亟需优化现有的或者开发具备更高特异性、高灵敏度以及优异代谢动力学性质的fap靶向分子制剂，构建fap特异性诊疗一体化探针。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的是构建fap特异性诊疗一体化分子影像探针，无创地显示肿瘤内fap表达，并为fap阳性的恶性肿瘤的诊断和监测提供了更好的方法，并开发基于fap的放射性配体治疗。基于此，本专利技术提供了一种成纤维细胞激活蛋白特异性诊疗一体化探针制备方法及应用。
2、成纤维细胞激活蛋白特异性多肽
3、在一个方面，本专利技术提供了一种成纤维激活蛋白特异性多肽，所述多肽选自fd1、fd2、fd3；
4、所述fd1、fd2、fd3氨基酸序列如下：
5、fd1：
6、[{dota}mvk{cysteamide}]{1,3,5-tris(bromomethyl)benzene}[{hex}cpptqfc]；
7、fd2：
8、[{dota}{lys(4-(piodophenyl)butyricacid)}{cysteamide}]{1,3,5-tris(bromomethyl)benzene}[{hex}cpptqfc]；
9、fd3：
10、[{dota}mvk{lys(4-(piodophenyl)butyricacid)}{cysteamide}]{1,3,5-tris(bromomethyl)benzene}[{hex}cpptqfc]。
11、在本专利技术中，为了简便起见，将具有seq id no.1、seq id no.2或seq id no.3所示的氨基酸序列的成纤维激活蛋白特异性多肽分别称为fd1、fd2、fd3。
12、如本文中所使用的，术语“成纤维激活蛋白特异性”是指特异性结合成纤维激活蛋白。
13、如本文中所使用的，术语“特异性结合”是指两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以由该相互作用的平衡解离常数(kd)表示。在本专利技术中，术语“kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体-抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。
14、两分子间的特异性结合性质可使用本领域公知的方法进行测定。一种方法涉及测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速度。“结合速率常数”(ka或kon)和“解离速率常数”(kdis或koff)两者都可通过浓度及缔合和解离的实际速率而计算得出(参见malmqvistm,nature,1993,361:186-187)。kdis/kon的比率等于解离常数kd(参见davies等人,annualrev biochem,1990；59:439-473)。可用任何有效的方法测量kd、kon和kdis值。在某些实施方案中，可以使用表面等离子体共振术(spr)在biacore中来测量解离常数。除此以外还可用生物发光干涉测量法或kinexa来测量解离常数。
15、在另一方面，本专利技术还提供了上述成纤维激活蛋白特异性多肽的制备方法，包括以下步骤：
16、a、制备段1的肽段：段1为{dota}mvk{cysteamide}、{dota}{lys(4-(piod本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种成纤维激活蛋白特异性多肽，其特征在于，所述多肽选自FD1、FD2、FD3；
2.根据权利要求1所述的成纤维激活蛋白特异性多肽，其特征在于，所述FD1、FD2、FD3的化学结构分别如下式I、式II、式III所示：
3.一种根据权利要求1或2所述的成纤维激活蛋白特异性多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种多核苷酸，其特征在于，编码根据权利要求1所述的成纤维激活蛋白特异性多肽。
5.一种载体，其特征在于，包含根据权利要求3所述的多核苷酸。
6.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求4所述的载体。
7.一种人成纤维激活蛋白特异性68Ga标记探针，其特征在于，包含经放射性核素68Ga标记的根据权利要求1或2所述的成纤维激活蛋白特异性多肽。
8.一种人成纤维激活蛋白特异性177Lu标记探针，其特征在于，包含经放射性核素177Lu标记的根据权利要求1或2所述的成纤维激活蛋白特异性多肽。
9.一种用于可视化成纤维激活蛋白的表达、诊断成纤维激活蛋白相关的肿瘤、预测成纤维激活蛋白
10.根据权利要求1或2所述的Trop2特异性单域抗体、根据权利要求4所述的多核苷酸、根据权利要求5所述的载体、根据权利要求6所述的宿主细胞或根据权利要求7-8中任一项所述的探针在制备用于可视化成纤维激活蛋白的表达、诊断成纤维激活蛋白相关的肿瘤、预测成纤维激活蛋白相关肿瘤的进展和预后、预测成纤维激活蛋白相关肿瘤的治疗效果或治疗成纤维激活蛋白相关肿瘤的试剂盒或组合物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种成纤维激活蛋白特异性多肽，其特征在于，所述多肽选自fd1、fd2、fd3；
2.根据权利要求1所述的成纤维激活蛋白特异性多肽，其特征在于，所述fd1、fd2、fd3的化学结构分别如下式i、式ii、式iii所示：
3.一种根据权利要求1或2所述的成纤维激活蛋白特异性多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种多核苷酸，其特征在于，编码根据权利要求1所述的成纤维激活蛋白特异性多肽。
5.一种载体，其特征在于，包含根据权利要求3所述的多核苷酸。
6.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求4所述的载体。
7.一种人成纤维激活蛋白特异性68ga标记探针，其特征在于，包含经放射性核素68ga标记的根据权利要求1或2所述的成纤维激活蛋白特异性多肽。
8.一种人成纤维激活蛋白特异性177lu标记探针，其特征在于，包含经放射性核素177lu标记...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏伟军，黄未，刘建军，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：
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