本发明专利技术公开了一种新型鱼类催产剂，该催产剂为具有氨基酸序列Ｔｙｒ－Ａｓｎ－Ｌｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ组成的多肽，或具有与所述氨基酸序列同源性在６０％以上的多肽。使用时将多肽溶于鱼用生理盐水后，每１毫克多肽溶于毫升生理盐水；注射的剂量为每克鱼体重注射０．５－１μｇ；通过鱼的胸鳍基部或背鳍肌肉附近注射入鱼体内。本发明专利技术能有效诱导金鱼、鲫鱼、泥鳅的排卵，是一种具有重要生产应用前景的新型鱼类催产剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种在水产养殖中人工诱导鱼类排卵的新型鱼类催产剂。
技术介绍
鱼类性腺的最后成熟和排卵受下丘脑_脑垂体_性腺轴分泌的激素所控制，此外， 环境因素对鱼类的生殖活动也有很大的影响。感觉器官把外界环境的刺激(如温度、光照、 降雨等)传送到脑，使下丘脑分泌促性腺激素释放激素(GnRH)，激发脑垂体分泌促性腺激 素(GtH)作用于性腺并促进性腺分泌性类固醇激素，以促使性腺发育成熟与排出精子和卵子。然而，很多鱼类在性腺发育成熟的情况下，由于环境条件的不适合，导致鱼类不能 正常排卵，使卵粒残留在体内，慢慢退化，这给鱼类养殖的苗种需求带来了极大的不便，因 此，对鱼类进行人工催产是满足养殖鱼类苗种需求的重要途径，而催产剂的使用则是鱼类 人工繁殖成功的关键。Kisspeptin首先在哺乳动物中发现，编码kissp印tin的基因或其受体 GPR54基因的失活性突变，均会造成人类、小鼠的青春期启动失败及生殖缺陷。经研 究证实kissp印tin通过调控GnRH的释放进而控制生殖轴的活动。在鱼类中，同样 存在kissp印tin/GPR54信号系统，本专利技术人于2009年，内分泌学杂志Journal of Endocrinology (2009) 201，407-418 ；公开了在金鱼中克隆了两种 kissp印tin 基因(kissl、 kiss2)及两种GPR54基因(GPR54a、GPR54b)，首次证明鱼类kissp印tin的核心十肽Tyr-Asn-Lys-Asn-Ser-Phe-Gly-Lys-Arg-Tyr(kiss 1-10)在在体条件下能有效地刺激脑垂体的 促黄体生成激素(LH)的大量释放。本专利技术人推测kissp印tin对LH的刺激作用也可能是 通过调控下丘脑GnRH的释放来实现的；本专利技术试图通过注射鱼类kissp印tin的核心十肽， 诱导鱼类的排卵。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于鱼类催产剂的多肽产品，为鱼类催产技术的开发和 应用提供新思路。上述专利技术目的通过以下的技术措施来实现一种新型的鱼类催产剂，该催产剂为 具有氨基酸序列Tyr-Asn-Lys-Asn-Ser-Phe-Gly-Lys-Arg-Tyr组成的多肽，或具有与所述 氨基酸序列同源性在60%以上的多肽。本专利技术所述的多肽为白色粉末状；使用时将多肽溶于鱼用生理盐水后注射，每1 毫克多肽溶于1毫升生理盐水；注射的剂量为每克鱼体重注射0. 5-1 u g ；通过鱼的胸鳍基 部或背鳍肌肉附近注射入鱼体内。本专利技术所述生理盐水中的浓度为0. 7% -0. 9%。本专利技术用作人工诱导鱼类排卵的外源性药物。采用本专利技术进行鱼类人工催产，经试验，能有效地诱导金鱼、泥鳅、鲫鱼的排卵活动，具有催产的效果。注射了本专利技术催产剂后，有30%的金鱼、10%的泥鳅、40%的鲫鱼出现 了排卵现象。具体实施例方式通过克隆金鱼kissp印tin的基因kissl，然后根据信息生物学手段对克隆得到的 序列进行分析，推测金鱼kissp印tin基因发挥生物活性的十肽(kissl-10) :Tyr Asn Lys Asn Ser Phe Gly Lys Arg Tyr。通过人工化学合成这十个氨基酸的肽段。具体过程可参 见内分泌学杂志Journal of Endocrinology (2009) 201，407-418。上述氨基酸序列的多肽 用作人工诱导鱼类排卵的外源性药物，对鱼类催产。选取卵巢发育成熟的金鱼20尾，分为对照组和处理组，每组各10尾。对照组注射 生理盐水，处理组注射具有氨基酸序列Tyr-Asn-Lys-Asn-Ser-Phe-Gly-Lys-Arg-Tyr组成 的多肽(kissl-10)。将白色粉末状的kissl-10溶于0.7%的鱼用生理盐水中，每1毫克多 肽溶于1毫升生理盐水，剂量为每克鱼体重注射1 P go然后将溶解好的kissl-10于金鱼胸 鳍基部附近注射进鱼体，共进行两次注射，注射间隔时间为6小时。于18小时后检查排卵 和产卵情况，轻按鱼体腹部有成熟卵粒流出的为排卵。最后检测结果为对照组具有排卵现 象的金鱼为0尾，而注射了 kissl-10的组别中，具有3尾金鱼排卵，催产效率为30%。选取卵巢发育成熟的泥鳅20尾，分为对照组和处理组，每组各10尾。对照组注射 生理盐水，处理组注射kissl-10。将kissl-10溶于0.8%的鱼用生理盐水中，每1毫克多 肽溶于1毫升生理盐水，剂量为每克鱼体重注射0. 5 y g。然后将溶解好的kissl-10于泥鳅 背鳍附近的肌肉注射进鱼体，共进行两次注射，注射间隔时间为6小时。于18小时后检查 排卵和产卵情况，轻按鱼体腹部有成熟卵粒流出的为排卵。最后检测结果为对照组具有排 卵现象的泥鳅为0尾，而注射了 kissl-10的组别中，具有1尾泥鳅排卵，催产效率为10%。选取卵巢发育成熟的鲫鱼10尾，分为对照组和处理组，每组各5尾。对照组注射 生理盐水，处理组注射kissl-10。将kissl-10溶于0.9%的鱼用生理盐水中，每1毫克多 肽溶于1毫升生理盐水；剂量为每克鱼体重注射0. 8 y g。然后将溶解好的kissl-10于鲫 鱼胸鳍基部注射进鱼体，共进行两次注射，注射间隔时间为6小时。于18小时后检查排卵 和产卵情况，轻按鱼体腹部有成熟卵粒流出的为排卵。最后检测结果为对照组具有排卵现 象的泥鳅为0尾，而注射了 kissl-10的组别中，具有2尾鲫鱼排卵，催产效率为40%。另外，在与所述核心氨基酸序列同源性60%以上的多肽都可以实现催产。根据 kissl-10的序列，对kissl-10的氨基酸序列进行改造，序列为F-C6H4-C0-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2，将其命名为kissl类似物(kisslal)。选取卵巢发育成熟的金鱼21尾，分为 对照组(6尾)、kissl-10处理组(7尾)，kisslal处理组(8尾)。对照组注射生理盐水， 处理组注射kissl-10或kisslal。将kissl-10和kisslal溶于0. 7%的鱼用生理盐水中， 每1毫克多肽溶于1毫升生理盐水；剂量为每克鱼体重1 P go然后将溶解好的kissl-10或 kisslal于金鱼胸鳍基部附近注射进鱼体，共进行两次注射，注射间隔时间为6小时。于18 小时后检查排卵和产卵情况，轻按鱼体腹部有成熟卵粒流出的为排卵。最后检测结果为对 照组具有排卵现象的金鱼为0尾；而注射了 kissl-10的组别中，具有2尾金鱼排卵，催产效 率为28 % ；注射了 kisslal的组别中，具有3尾金鱼排卵，催产效率为37 %。可见具有与所 述氨基酸序列同源性多肽，也具有相同的催产效果。 本专利技术的实施方式不限于此，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知 识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，本专利技术还可以做出其它多种形 式的修改、替换或变更的实施方式，不一一例举；在与所述核心氨基酸序列同源性60%以 上的多肽都可以实现催产，均落在本专利技术权利保护范围之内。权利要求一种新型鱼类催产剂，其特征在于该催产剂为具有氨基酸序列Tyr Asn Lys Asn Ser Phe Gly Lys Arg Tyr组成的多肽，或具有与所述氨基酸序列同本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种新型鱼类催产剂，其特征在于该催产剂为具有氨基酸序列Ｔｙｒ－Ａｓｎ－Ｌｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｔｙｒ组成的多肽，或具有与所述氨基酸序列同源性在６０％以上的多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓春，李水生，张勇，刘云，林浩然，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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