【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及用于治疗肿瘤的组合疗法。该组合包含第一和第二部分，其中两个部分共同起作用以提供增强的抗肿瘤反应。第一部分是多肽构建体，其包含与抗体连接的减弱的i型干扰素，所述抗体与肿瘤细胞上表达的细胞表面相关抗原结合，第二部分是减少cd47信号传导的药剂。
技术介绍
1、已经描述了许多肽和多肽分子通过与细胞表面上的受体相互作用而起作用，从而刺激、抑制或以其他方式调节生物反应，通常涉及携带所述受体的细胞内的信号转导途径。此类分子的实例包括肽和多肽激素，细胞因子，趋化因子，生长因子，凋亡诱导因子等。这些分子可以是可溶的，或可以附着在另一个细胞的表面上。
2、由于这些分子的生物活性，一些分子具有作为治疗剂的潜在用途。几种肽或多肽分子已被管理机构批准作为治疗产品，包括例如人生长激素、胰岛素、干扰素ifnα2b、ifnα2a、ifnβ、ifnγ、促红细胞生成素、g-csf和gm-csf。许多这些和其他肽已经在治疗应用中显示出潜力，但是当施用于人类患者时也表现出毒性。毒性的一个原因是大多数这些分子触发多种细胞上的受体，包括介导所需治疗效果的细胞以外的细胞。例如，当ifnα2b用于治疗多发性骨髓瘤时，其效用至少部分地在于其与骨髓瘤细胞上的i型干扰素受体的结合，这反过来又引发减少的增殖并因此限制疾病进展。然而，不幸的是，该ifn还与体内许多其他正常细胞结合，引发多种其他细胞反应，这些反应在治疗情形中是不希望的，其中一些是有害的(例如流感样症状，中性粒细胞减少症，抑郁症)。肽的这种“脱靶”活性的结果是许多肽不适合作为候选药物
3、尽管一些肽(例如ifnα2b)被批准用于治疗医学病症，但由于它们的“脱靶”生物活性，它们的耐受性差。脱靶活性和相关的差耐受性还意味着这些基于肽的药物中的一些不能以足够高的剂量施用以对介导治疗效果的靶细胞产生最佳治疗效果。
4、类似地，自1980年代中期以来已知干扰素，特别是ifnα，能够增加细胞凋亡并减少某些癌细胞的增殖。这些生物学活性由癌细胞表面上的i型干扰素受体介导，当受到刺激时，它们启动各种信号转导途径，导致增殖减少和/或终末分化或凋亡的诱导。ifnα已被fda批准用于治疗多种癌症，包括黑素瘤，肾细胞癌，b细胞淋巴瘤，多发性骨髓瘤，慢性髓性白血病(cml)和毛细胞白血病。ifnα对肿瘤细胞的“直接”作用是由ifnα与那些细胞上的i型ifn受体的直接结合并刺激细胞凋亡、终末分化或减少的增殖所介导的。ifnα对非癌细胞的一种“间接”作用是刺激免疫系统，这可通过使免疫系统排斥肿瘤而产生额外的抗癌作用。
5、不幸的是，i型干扰素受体也存在于大多数非癌细胞上。ifnα对非癌细胞上的该受体的激活导致许多促炎细胞因子和趋化因子的表达，导致毒性。这种毒性防止了ifnα以对癌细胞发挥最大抗增殖和促凋亡活性的水平给予受试者。
6、ozzello等人(breast cancer research and treatment 25：265-76,1993)描述了将人ifnα共价连接到肿瘤靶向抗体，从而将ifnα的直接抑制活性定位到肿瘤，作为降低肿瘤生长速率的方法，并证明了这种缀合物在人癌症的异种移植模型中具有抗肿瘤活性。观察到的抗癌活性的机制归因于ifnα对癌细胞的直接影响，因为在实验中使用的人ifnα与小鼠i型ifn受体不会显著相互作用，这可能导致间接抗癌作用。然而，由于缺乏人ifnα与鼠细胞的结合，作者无法评估抗体-ifnα缀合物相对于游离ifnα的毒性。这些作者使用化学方法将ifnα连接到抗体上。
7、alkan等人(journal of interferon research，第4卷，第3期，第355-63页，1984)证明了将人ifnα附着于与epstein-barr病毒(ebv)膜抗原(ma)结合的抗体上增加了其对表达ebv-ma抗原的细胞的抗增殖活性。这种增加的效力取决于靶细胞的抗原表达和抗体的结合特异性二者。测试的细胞系是癌细胞系qimr-wil，一种成髓细胞白血病。作者提出ifnα与抗体的连接可用作癌症的治疗，因为它会减少肿瘤的生长。alkan等人没有解决这些抗体-ifnα缀合物与正常的抗原阴性细胞相互作用产生的潜在毒性。
8、还已知抗体和ifnα之间的连接可以通过制备融合蛋白构建体来实现。例如，idec(wo01/97844)公开了人ifnα与靶向肿瘤抗原cd20的igg的重链的c末端的直接融合。其他组已经公开了在igg重链的c末端和ifnα之间使用各种接头。例如，us 7,456,257公开了抗体重链恒定区的c末端可以通过序列(ggggs)n的间插的富含丝氨酸-甘氨酸(s/g)接头与ifnα连接，其中n可以是1、2或3，并且不管接头长度如何，融合蛋白构建体的ifnα活性没有显著差异。
9、morrison等人(us8,563,692；和xuan c，steward kk，timmerman jm，morrisonsl，targeted delivery of interferon-a via fusion to anti-cd20 results inpotent antitumor activity against b-cell lymphoma.blood 2010；115：2864-71)还公开了与靶向癌症的igg抗体的重链的c末端连接的ifnα，具有插入的s/g接头，并观察到igg和接头与ifnα的融合降低了ifnα对在细胞表面上不表达相应抗原的细胞的活性。与作用于人细胞的人非融合蛋白ifnα(游离ifnα)相比，这些融合蛋白构建体的ifn活性降低是适度的，但似乎对于鼠ifnα对鼠细胞上更显著。如morrison等人和us 7,456,257所观察到的，将其融合至抗体c末端所导致的人ifnα活性的降低是适度的，并且通常被认为是缺点，因为它降低了ifn的效力。例如，rossi等人(blood vol.114，no.18，pp3864-71)指出了这一缺点，他使用了一种替代策略，即将ifnα连接到肿瘤靶向抗体的方式使得没有观察到ifnα活性的损失。
10、通常，现有技术教导使用强效的ifn并将该ifn靶向癌细胞。虽然这种方法导致ifn对抗癌细胞的活性增加，但它没有解决ifn对正常“脱靶”细胞的活性的问题。在上面提到的现有技术实例中，当暴露于不在其细胞表面上表达相应抗原的人细胞时，抗体-ignα融合蛋白的人ifnα部分在很大程度上维持天然ifnα活性。这种活性的维持可能导致由融合蛋白的ifnα部分激活非癌性正常(“脱靶”)细胞引起的毒性。
11、因此，需要降低基于ifn的药物的“脱靶”活性，同时保持这些药物的“靶向”治疗效果。靶特异性活性的维持并且同时这些类型的治疗剂的非靶毒性的降低将为治疗上有用的肽产生更大的治疗浓度窗口。例如，希望以这样的形式使用人ifnα，使得其活性可以针对癌细胞，同时使其对正常人细胞的影响最小化。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.多肽构建体和CD47拮抗剂在制备用于治疗受试者中的肿瘤的药物中的用途，其中所述多肽构建体包含与抗体连接的减弱的I型干扰素(IFN)，所述抗体结合在肿瘤细胞上表达的细胞表面相关抗原，并且包含功能性Fc区，并且所述CD47拮抗剂抑制CD47与SIRPα受体的相互作用。
2.如权利要求1所述的用途，其中减弱的I型IFN通过肽键与抗体连接。
3.如权利要求1所述的用途，其中减弱的I型IFN直接地或通过长度为1-20个氨基酸的接头与抗体连接。
4.如权利要求1所述的用途，其中所述肽或多肽信号传导配体与所述抗体的轻链或重链恒定区的C末端连接。
5.如权利要求1所述的用途，其中减弱的I型IFN是减弱的IFNα。
6.如权利要求5所述的用途，其中IFNα的氨基酸序列选自SEQ ID NOs 1至3、80至90、391和392，并且其中IFNα包含减弱IFNα活性的至少一个氨基酸取代或缺失。
7.如权利要求5所述的用途，其中减弱的IFNα是减弱的IFNα2b。
8.如权利要求7所述的用途，其中减弱的IFNα2b
9.如权利要求7或8所述的用途，其中减弱的IFNα2b是非糖基化的减弱的IFNα2b。
10.如权利要求9所述的用途，其中非糖基化的减弱的IFNα2b的T106缺失或被除T以外的氨基酸取代。
11.如权利要求10所述的用途，其中非糖基化的减弱的IFNα2b的T106被A取代。
12.如权利要求10所述的用途，其中缺失了非糖基化的减弱的IFNα2b的T106。
13.如权利要求7或8所述的用途，其中减弱的IFNα2b的序列是SEQ ID NO：44或SEQ IDNO：536。
14.如权利要求1所述的用途，其中所述细胞表面相关抗原选自CD38，CD138，RANK配体，HM1.24，CD56，CS1，CD20，CD74，IL-6R，Blys(BAFF)，BCMA，Kininogen，beta2微球蛋白，FGFR3，ICAM-1，matriptase，CD52，EGFR，GM2，α4整合素，IFG-1R，KIR，CD3，CD4，CD8，CD24，CD30，CD37，CD44，CD69，CD71，CD79，CD83，CD86，CD96，HLA，PD-1，ICOS，CD33，CD115，CD11c，CD19，CD52，CD14，FSP1，FAP，PDGFRα，PDGFRβ，ASGR1，ASGR2，FSP1，LyPD3，RTI140/Ti-α，HTI56，VEGF受体，CD241，RCHE基因的产物，CD117(c-kit)，CD71(转铁蛋白受体)，CD36(血小板反应蛋白受体)，CD34，CD45RO，CD45RA，CD115，CD168，CD235，CD236，CD237，CD238，CD239，CD240，TROP2，CD70，CCR2，HER2，EGFR和CCR3。
15.如权利要求1所述的用途，其中所述细胞表面相关抗原选自CD38，CD138，EpCAM，TROP2，CD19，CD20，CD79b，CD22和CD52。
16.如权利要求15所述的用途，...
【技术特征摘要】
1.多肽构建体和cd47拮抗剂在制备用于治疗受试者中的肿瘤的药物中的用途，其中所述多肽构建体包含与抗体连接的减弱的i型干扰素(ifn)，所述抗体结合在肿瘤细胞上表达的细胞表面相关抗原，并且包含功能性fc区，并且所述cd47拮抗剂抑制cd47与sirpα受体的相互作用。
2.如权利要求1所述的用途，其中减弱的i型ifn通过肽键与抗体连接。
3.如权利要求1所述的用途，其中减弱的i型ifn直接地或通过长度为1-20个氨基酸的接头与抗体连接。
4.如权利要求1所述的用途，其中所述肽或多肽信号传导配体与所述抗体的轻链或重链恒定区的c末端连接。
5.如权利要求1所述的用途，其中减弱的i型ifn是减弱的ifnα。
6.如权利要求5所述的用途，其中ifnα的氨基酸序列选自seq id nos 1至3、80至90、391和392，并且其中ifnα包含减弱ifnα活性的至少一个氨基酸取代或缺失。
7.如权利要求5所述的用途，其中减弱的ifnα是减弱的ifnα2b。
8.如权利要求7所述的用途，其中减弱的ifnα2b具有相对于seq id no：3包含至少一个选自下述的氨基酸取代或缺失的序列：l15a，r22a，r23a，s25a，l26a，f27a，l30a，l30v，k31a，d32a，r33a，r33k，r33q，h34a，q40a，d114r，l117a，r120a，r120e，r125a，r125e，k131a，e132a，k133a，k134a，m148a，r149a，s152a，l153a，n156a，(l30a，h57y，e58n和q61s)，(r33a，h57y，e58n和q61s)，(m148a，h57y，e58n和q61s)，(l153a，h57y，e58n和q61s)，(r144a，h57y，e58n和q61s)，(n65a，l80a，y85a和y89a)，(n65a，l80a，y85a，y89a和d114a)，(n65a，l80a，y85a，y89a和l117a)，(n65a，l80a，y85a，y89a和r120a)，(y85a，y89a和d114a)，(d114a和r120a)，(l117a和r120a)，(l117a，r120a和k121a)，(r120a和k121a)，(r120e和k121e)，第144位的r取代为a、d、e、g、h、i、k、l、n、q、s、t、v或y，第145的a取代为d、e、g、h、i、k、l、m、n、q、s、t、v或y，缺失残基l161至e165及其组合。
9.如权利要求7或8所述的用途，其中减弱的ifnα2b是非糖基化的减弱的ifnα2b。
10.如权利要求9所述的用途，其中非糖基化的减弱的ifnα2b的t106缺失或被除t以外的氨基酸取代。
11.如权利要求10所述的用途，其中非糖基化的减弱的ifnα2b的t106被a取代。
12.如权利要求10所述的用途，其中缺失了非糖基化的减弱的ifnα2b的t106。
13.如权利要求7或8所述的用途，其中减弱的ifnα2b的序列是seq id no：44或seq idno：536。
14.如权利要求1所述的用途，其中所述细胞表面相关抗原选自cd38，cd138，rank配体，hm1.24，cd56，cs1，cd20，cd74，il-6r，blys(baff)，bcma，kininogen，beta2微球蛋白，fgfr3，icam-1，matriptase，cd52，egfr，gm2，α4整合素，ifg-1r，kir，cd3，cd4，cd8，cd24，cd30，cd37，cd44，cd69，cd71，cd79，cd83，cd86，cd96，hla，pd-1，icos，cd33，cd115，cd11c，cd19，cd52，cd14，fsp1，fap，pdgfrα，pdgfrβ，asgr1，asgr2，fsp1，lypd3，rti140/ti-α，hti56，vegf受体，cd241，rche基因的产物，cd117(c-kit)，cd71(转铁蛋白受体)，cd36(血小板反应蛋白受体)，cd34，cd45ro，cd45ra，cd115，cd168，cd235，cd236，cd237，cd238，cd239，cd240，trop2，cd70，ccr2，her2，egfr和ccr3。
15.如权利要求1所述的用途，其中所述细胞表面相关抗原选自cd38，cd138，epcam，trop2，c...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·L·珀古，D·S·小威尔逊，T·塔尤拉，
申请(专利权)人：梯瓦制药澳大利亚股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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