【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及脂质体制备，特别是一种羧甲基化黄芪多糖脂质体及其制备方法。
技术介绍
1、脂质体(liposome)是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25～1000nm不等。脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部生物学定义：当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的的封闭囊泡，称为脂质体。药剂学定义脂质体(liposome):系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体。
2、近年来，人们对脂质体的研究越来越深入，脂质体的制备的方法也随之增多，制备脂质体传统方法有，薄膜分散法、逆相蒸发法、ph跳跃法、离心法、微囊化法、联合制备方法、溶剂注入法、复乳法等，新型二代方法有微流体通道法、超临界流体法等。
3、1、ph梯度法
4、ph梯度法是一种快速脂质体制备方法，避免有机溶剂的使用。当磷脂酸在水中的溶液在短时间内(<2min)使ph值增加3.5倍(从3到10.5～11)，可以形成suv。这种方法利用改变脂质体内外的ph值，使得脂质体内外的水相ph值不同，从而实现药物在不同解离状态下的穿膜。利用这种方法，药物可以以其离子形式进入脂质体内水相并被包封在内。当同样的方法应用于磷脂酸和磷脂酰胆碱的混合物时，磷脂酸：磷脂酰胆碱的比例越高，所获得的suv的百分比同样越高。
5、2、薄膜分散法
6、将磷脂与胆固醇等膜材共溶于相应量的有机溶剂中，旋转蒸发溶剂后，留下一薄层脂质。然后将薄膜在亲水性药物的溶液中水合使脂质薄膜掉落，便得脂质体。水合缓冲液的温度必须高于脂质的凝胶液相转变温度。用于水合脂质膜的水溶液的体积影响形成的脂质体的特性，大体积导致mlv的形成。
7、3、逆向蒸发法
8、脂质溶解在有机溶剂中，随后将亲水性药物与有机相混合，超声处理一定时间后形成稳定w/o型乳剂，随后减压旋蒸有机溶剂至形成“胶态”，加入缓冲溶液水化，得悬浊液，即脂质形成。逆相蒸发法制备的大多为luv和mlv的混合物，该方法简单，制备颗粒均匀、稳定，适合各种脂质及高分子量分子如蛋白质和核酸，如果应用需要更小、更均匀的颗粒，则可以通过聚碳酸酯过滤器挤压来减小脂质体的尺寸。
9、利用逆相蒸发-微孔滤膜挤压法制备马齿苋多糖脂质体,pol-pl最佳制备工艺条件为:磷脂浓度为5mg·m l-1；超声时间为5min；卵磷脂与吐温80质量比为15:1；膜材比为5:1；旋蒸温度40℃；脂药比为27:1。验证实验测定其包封率为37.83±1.49％。
10、中国专利申请号cn201810774046.7公开了一种黄芪多糖脂质体的制备方法，步骤如下：将卵磷脂、胆固醇置于干燥洁净的茄形瓶中，加入无水乙醇超声溶解，于40-50℃水浴中减压蒸发除去乙醇，使磷脂类膜材在茄形瓶壁上形成均匀的脂质薄膜；将aps溶解在纯化水中制得水相，44-46℃水浴预热，将其缓慢滴注于茄形瓶内，边滴加边振荡，至薄膜从茄形瓶壁上完全脱落溶解，旋转水合70-90min；将所得混悬液超声20-30min，过微孔滤膜，即得黄芪多糖脂质体混悬液，4℃冰箱冷藏即可。该方法简便、快捷、易操作，制备的黄芪多糖脂质体包封率高，4℃下贮存较稳定，且具有良好的缓释作用。但是其实际多糖脂质体包封率也较低。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种羧甲基化黄芪多糖脂质体及其制备方法。
2、为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
3、本专利技术的第一种技术方案为：一种羧甲基化黄芪多糖脂质体的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、利用水提醇沉法提取黄芪中的黄芪多糖aps，并进行纯化，得到精制黄芪多糖aps；
5、s2、利用精制黄芪多糖aps制备羧甲基化黄芪多糖cm-aps；
6、s3、制备羧甲基化黄芪多糖脂质体cm-apsl：
7、按质量比8:1将大豆卵磷脂与胆固醇加入梨形旋蒸瓶中，加入过量的氯仿震荡混匀，35℃减压旋蒸，蒸至瓶中液体完全干燥形成一层均匀的淡黄色薄膜，之后持续旋蒸1h尽量完全除尽残留的氯仿；取大豆卵磷脂质量十分之一的羧甲基化黄芪多糖用ph为7.4的pbs溶液溶解，充分震荡混匀后缓慢加入梨形旋蒸瓶中，充分水化1-2h后经300w超声5min得到脂质体；脂质体经0.45μm的滤膜过滤2-3次后，使用0.22μm的滤膜再次过滤，即得所需羧甲基化黄芪多糖脂质体cm-apsl，4℃保存。
8、进一步地，所述步骤s1具体包括：
9、称取30g黄芪，将黄芪按照料液比1:16加入去离子水中浸泡过夜，90℃回流提取水浴4.5h，确保黄芪有效成分充分提取，提取液冷却过滤，滤液离心取上清，使用旋转蒸发仪减压蒸发得到黄芪多糖提取液，黄芪多糖提取液加入4倍体积无水乙醇室温静置24h，所得沉淀为粗黄芪多糖；粗黄芪多糖经ab-8大孔树脂纯化除去杂质，sevag法去蛋白后经冷冻干燥获得精制黄芪多糖。
10、进一步地，所述步骤s2具体包括：
11、称取1g精制黄芪多糖于三角瓶中，加入30m l异丙醇搅拌，搅拌下缓慢加入浓度为30％的氢氧化钠溶液50m l，室温下碱化处理1h；将10g氯乙酸溶于100m l异丙醇得到氯乙酸异丙醇溶液，边搅拌边将氯乙酸异丙醇溶液缓慢滴加至反应液中，滴加完毕后升温至60℃反应4h；反应结束后，室温萃取，弃除上层醇液，收集下层水相，加入4倍体积无水乙醇进行沉淀，静置12h，离心，沉淀用纯水溶解，再用10％盐酸溶液调节ph至中性，再次加入4倍体积的无水乙醇，沉淀8h，抽滤，无水乙醇洗涤沉淀两次；将沉淀溶于纯水，4℃纯水透析72h，经冻干得羧甲基化黄芪多糖cm-aps。
12、本专利技术的第二种技术方案为：一种利用上述方法制备的羧甲基化黄芪多糖脂质体。
13、与现有技术相比，本专利技术先利用黄芪多糖aps制备羧甲基化黄芪多糖cm-aps，再利用羧甲基化黄芪多糖cm-aps制备得到羧甲基化黄芪多糖脂质体，不仅操作简单方便成本低，提高了黄芪多糖的包封率，并且羧甲基化黄芪多糖提高了黄芪多糖的抗氧化活性，因此羧甲基化黄芪多糖脂质体，比黄芪多糖脂质体抗氧化活性提高的同时包封率也提高。
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1.一种羧甲基化黄芪多糖脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的羧甲基化黄芪多糖脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：
3.根据权利要求1所述的羧甲基化黄芪多糖脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：
4.一种如权利要求1-3任一所述方法制备的羧甲基化黄芪多糖脂质体。
【技术特征摘要】
1.一种羧甲基化黄芪多糖脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的羧甲基化黄芪多糖脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤s1具体包括：
【专利技术属性】
技术研发人员：杨鸿，叶钰滢，邓桦，王鸿鑫，刘栩沂，韩梓杰，杨镁楹，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：
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