【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学和分子生态学，具体涉及利用qpcr检测入侵物种鳄雀鳝的引物探针组合、试剂盒及方法。
技术介绍
1、生物入侵是指生物通过自然或人为手段,从其原始的生态环境迁移到其他新的生态环境中,并在新的生态环境中生长、繁殖和扩散的过程。这个过程会破坏新环境的生物多样性和稳定性,对社会和经济造成危害,威胁人类健康,并且可能引发生态灾难。近年来,随着全球贸易和国际社会经济的快速发展,全球生物入侵的情况也越来越严重,给被入侵地区带来了重大的生态灾难和危害。
2、鳄雀鳝学名atractosteus spatula(lacepède,1803)，隶属于雀鳝目、雀鳝科、大雀鳝属，是鱼类中比较古老的一个类群。在原产地的北美地区，由于天敌的存在，鳄雀鳝的数量维持在适合的水平，并不会带来很大危害，但这种“淡水杀手”在我国水域暂时没有天敌。鳄雀鳝进入自然水体后，土著鱼类会被大量捕食，从而导致水生生物多样性降低，危害生态安全。
3、2021年4月15日正式施行《中华人民共和国生物安全法》。这里面规定了“防范外来物种入侵与保护生物多样性”内容，要求制定外来入侵物种名录和管理办法。为此，相关部门制定《关于印发外来入侵物种普查总体方案的通知》，对10种主要的外来水生生物进行全国性普查，其中就包含了鳄雀鳝。
4、如今除了其原产地北美，在世界范围内的多个地方都能在流域中捕捞到鳄雀鳝。在我国长江流域及以南地区，常有渔民或垂钓爱好者发现鳄雀鳝或其他雀鳝的踪迹。生物入侵已经成为全球生物多样性迅速下降的关键因素之一,是一个世
5、环境dna是指来源于生物体并存在于环境中的胞外遗传物质。环境dna技术是指直接对环境中目的基因片段进行定性或者定量的方法。通过环境dna的方法可以监测到环境中的稀有物种与隐秘物种。目前环境dna的研究大多使用通用的分子标记进行物种的全类群检测，鲜有研究设计物种特异性的引物。通用引物能够覆盖大多的物种多样性，但是其对于环境中稀有物种及隐秘物种检出率偏低，对于入侵物种的早期监测不够敏感，且需要进行测序和下游生物信息分析，整个实验流程较长，无法进行实时监测。目前已有基于机器学习，针对鳄雀鳝的图像识别专利，但是成本较高。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术的目的之一是提供利用qpcr检测入侵物种鳄雀鳝的引物探针组合，能够在复杂背景(环境edna)下特异性扩增出鳄雀鳝dna。
2、具体的，所述引物探针组合选自以下四种之一：
3、组合a：
4、 名称 序列 序号 上游引物atsp8923qf 5'-ggctctacatcccttatggcac-3' seq id no.1 下游引物atsp9061qr 5'-ttattccatatcgcagcccct-3' seq id no.2 探针atsp8946qi 5'-fam-atcgtacgagaaggcacatttcagggc-bhq1-3' seq id no.3
5、组合b：
6、 名称 序列 序号 上游引物atsp10329qf 5'-caacccgaacacatggaactagc-3' seq id no.4 下游引物atsp10554qr 5'-gatggctagataagagtttagggtggt-3' seq id no.5 探针atsp10411qi 5'-joe–tcctaccacctgacttgtctccccaa-bhq1-3' seq id no.6
7、组合c：
8、 名称 序列 序号 上游引物atsp12581qf 5'-tctcctctattcacggcgtt-3' seq id no.7 下游引物atsp12799qr 5'-gggctgtagggttttgtccaatc-3' seq id no.8 探针atsp12686qi 5'-cy5–actgccactaataggactaattttagccgc-bhq1-3' seq id no.9
9、组合d：
10、 名称 序列 序号 上游引物atsp13518qf 5'-cgaacctttacatacccagagc-3' seq id no.10 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的引物探针组合，其特征在于：为以下四种引物探针组合之一：
2.利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的引物探针组合。
3.根据权利要求2所述的利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的试剂盒，其特征在于：还包括HiFi-Taq酶、缓冲液、ddH2O。
4.根据权利要求2或3所述的利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的试剂盒，其特征在于：还包括内参DNA模板、内参引物和内参探针，所述内参DNA模板的碱基序列如SEQ ID NO.13所示，所述内参引物的碱基序列如SEQ ID NO.14-15所示，所述内参探针的碱基序列如SEQ IDNO.16所示。
5.利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的方法，其特征在于：包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的方法，其特征在于：步骤S3中，qPCR扩增的反应体系为：HiFi-Taq Master Mix 10μL、引物每条1μL、探针1μL、eDNA模板2μL、内参引物每条0.5
7.根据权利要求5所述的利用qPCR检测入侵物种鳄雀鳝的方法，其特征在于：
...【技术特征摘要】
1.利用qpcr检测入侵物种鳄雀鳝的引物探针组合，其特征在于：为以下四种引物探针组合之一：
2.利用qpcr检测入侵物种鳄雀鳝的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的利用qpcr检测入侵物种鳄雀鳝的引物探针组合。
3.根据权利要求2所述的利用qpcr检测入侵物种鳄雀鳝的试剂盒，其特征在于：还包括hifi-taq酶、缓冲液、ddh2o。
4.根据权利要求2或3所述的利用qpcr检测入侵物种鳄雀鳝的试剂盒，其特征在于：还包括内参dna模板、内参引物和内参探针，所述内参dna模板的碱基序列如seq id no.13所示，所述内参引物的碱基...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晨虹，王辉，戚亿利，凌海宁，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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