【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子影像，尤其涉及一种akalumine盐酸盐的制备方法及其应用。
技术介绍
1、荧光素类似物结合相应的酶进行生物发光的发光强度与其构型息息相关，l-构型阻碍发光进程，于是d-构型的占比大小决定了成像实验的效果好坏。可是在现有报道的制备方法中，利用酯酶、碱(氢氧化锂)等水解酯中间体以获得akalumine的方法往往会得到具有l-构型的产物，使得产物在生物成像方面的效果减弱。酯酶价格昂贵，反应时间长，反应效率低，并且反应产物可能存在较杂的情况。并且，由于akalumine本身的溶剂性，其手性构型拆分往往比较困难，拆分过程易出现挂柱现象，使得拆分十分困难，制备后构型仍旧包含l-构型等问题。因此，开发出一种更佳的制备方法对于效率的提高，以及成像效果极为重要。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术提供一种荧光素类似物akalumine盐酸盐的制备方法，采用该制备方法可在最大程度上保证akalumine盐酸盐的d-构型，从而保证得到的akalumine盐酸盐对于相应酶的响应信号最佳，同时此制备方法得到的akalumine盐酸盐无需进一步手性拆分，ee值测得为100％。
2、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
3、第一方面，本专利技术提供一种akalumine盐酸盐的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)将d-半胱氨酸甲酯盐酸盐溶于酸溶液中，加入三苯基甲醇，室温下搅拌反应，减压浓缩，经阴离子交换树脂中和后，使用甲醇洗涤，
5、(2)将4-二甲基氨基肉桂醛溶于溶剂中，加入乙氧甲酰基亚甲基三苯基膦进行反应，减压旋干，萃取，纯化后得到中间体2；
6、(3)中间体2溶于溶剂中，再加入氢氧化钠水溶液进行加热回流，冷却至室温后减压浓缩得到固体物，调节固体物的ph至酸性，析出固体抽滤，冲洗，抽干后得到中间体3；
7、(4)氮气氛围下，将中间体3、中间体1溶于溶剂中，加入edc溶液，再加入dmap溶液，室温下搅拌反应，萃取，旋干，纯化后得到中间体4；
8、(5)氮气氛围下，将中间体4溶于溶剂中，加入三苯基氧化膦和三氟甲磺酸酐进行反应后加水淬灭，萃取，浓缩，纯化后得到中间体5；
9、(6)氮气氛围下，使中间体5与溶剂进行反应，萃取，过柱得到akalumine；
10、(7)将akalumine于溶剂中超声，超声后静置，离心，收集上清液并进行冻干，得到akalumine盐酸盐。
11、优选的，步骤(1)中，所述酸溶液为三氟乙酸，所述反应的温度为10～30℃，反应的时间为1～3h；所述d-半胱氨酸甲酯盐酸盐、三苯基甲醇的摩尔比为1：(1.1-1.5)。
12、优选的，步骤(2)中，所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯中的一种，进一步优选为甲苯；所述反应的温度为25～85℃，所述反应的时间为5～20h；所述4-二甲基氨基肉桂醛、乙氧甲酰基亚甲基三苯基膦的摩尔比为1：(1.6-2.5)。
13、优选的，步骤(3)中，所述溶剂为异丙醇、乙醇中的一种，进一步优选为乙醇；所述反应的温度为25～80℃，所述反应的时间为15～25h；所述中间体2、氢氧化钠水溶液的摩尔比为1：(10-30)；所述氢氧化钠水溶液的浓度为1摩尔每升。
14、优选的，步骤(4)中，所述溶剂为二氯甲烷、dmf中的一种；进一步优选为dmf；所述反应的温度为10～30℃，反应的时间为3～20h；所述中间体3、中间体1和dmap、edc的摩尔比为1：(1.1-1.3):(2.5-3):(3.4-4)。
15、优选的，步骤(5)中，所述溶剂为二氯甲烷、乙腈中的一种；进一步优选为无水二氯甲烷；所述反应的温度为10～30℃，所述反应的时间为40～50min；所述中间体4、三苯基氧化膦和三氟甲磺酸酐的摩尔比为1：(2.1-3):(10-15)；
16、优选的，步骤(6)中，所述溶剂为稀盐酸水溶液；所述稀盐酸水溶液的浓度为6摩尔每升；所述反应的温度为10～30℃，所述反应的时间为18～24h；所述中间体5、稀盐酸水溶液的摩尔比为1：(100-300)。
17、优选的，步骤(7)中，所述溶剂为稀盐酸水溶液；所述稀盐酸水溶液的浓度为6.6×10-2摩尔每升；所述反应的温度为20～30℃，所述反应的时间为1～2h。
18、所述akalumine盐酸盐结构如下所示：
19、
20、具体的，所述akalumine盐酸盐的合成路线如下：
21、
22、第二方面，本专利技术提供一种akalumine盐酸盐，由第一方面所述的方法制成。
23、第三方面，本专利技术提供一种如第二方面所述的akalumine盐酸盐在荧光产品和/或制备荧光产品中的应用。
24、优选的，所述荧光产品至少包括荧光探针和荧光检测试剂盒。
25、第四方面，本专利技术提供一种荧光探针，所述荧光探针包含如第二方面所述的akalumine盐酸盐。
26、第五方面，本专利技术提供一种荧光检测试剂盒，所述荧光检测试剂盒包含如第二方面所述的akalumine盐酸盐或第三方面所述的荧光探针。
27、第六方面，本专利技术提供如第二方面所述的akalumine盐酸盐、第四方面所述的荧光探针和/或第五方面所述的荧光检测试剂盒在环境监测、分析化学、生物分析和检测、活体成像中的应用。
28、优选的，所述生物分析和检测包括对生物个体水平、器官水平、组织水平和细胞水平的分析与检测。
29、进一步优选的，所述生物包括鱼、小鼠、大鼠、豚鼠、鸡、兔、狗、猫、猴、猩猩和人。
30、更进一步优选的，所述生物分析和检测包括利用所述akalumine盐酸盐、荧光探针和/或荧光检测试剂盒对细胞进行荧光标记、利用流式细胞仪或荧光显微镜对荧光标记细胞进行分选和利用体内荧光成像装置观察生物体内的荧光标记的细胞。
31、与现有的技术方案相比，本专利技术具有以下优点：
32、本专利技术通过对akalumine盐酸盐的制备方法进行改进，与其他现有制备方法相比，该方法简单，生产原料便宜易得，适合大规模生产。且制备得到的akalumine盐酸盐保留了d-构型不被转换，ee值测定为100％，远远高于酯酶水解法以及氢氧化锂水解法制备的产物ee值，与酶结合后具有更高的荧光信号。并且由于akalumine盐酸盐发光峰值为670～680nm且信号强、信号穿透力强，使其适用于多水平的生物分析和检测；非常适用于活体实验，如小鼠大脑的活体成像实验、移植细胞的监控等。
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1.一种Akalumine盐酸盐的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的Akalumine盐酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述酸溶液为三氟乙酸，所述反应的温度为10～30℃，反应的时间为1～3h；所述D-半胱氨酸甲酯盐酸盐、三苯基甲醇的摩尔比为1：(1.1-1.5)；
3.权利要求2所述的方法制备获得的Akalumine盐酸盐。
4.权利要求3所述的Akalumine盐酸盐在荧光产品和/或制备荧光产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述荧光产品至少包括荧光探针和荧光检测试剂盒。
6.一种荧光探针，其特征在于，所述荧光探针包含权利要求3所述的Akalumine盐酸盐。
7.一种荧光检测试剂盒，其特征在于，所述荧光检测试剂盒包含权利要求3所述的Akalumine盐酸盐或权利要求6所述的荧光探针。
8.权利要求3所述的Akalumine盐酸盐、权利要求6所述的荧光探针和/或权利要求7所述的荧光检测试剂盒在环境监测、分析化学、生物分析和检测、活体成
...【技术特征摘要】
1.一种akalumine盐酸盐的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的akalumine盐酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述酸溶液为三氟乙酸，所述反应的温度为10～30℃，反应的时间为1～3h；所述d-半胱氨酸甲酯盐酸盐、三苯基甲醇的摩尔比为1：(1.1-1.5)；
3.权利要求2所述的方法制备获得的akalumine盐酸盐。
4.权利要求3所述的akalumine盐酸盐在荧光产品和/或制备荧光产品中的应用。
5....
【专利技术属性】
技术研发人员：伍盛鋆，罗文波，包华昱，区志运，
申请(专利权)人：广州博鹭腾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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