一种基于金属荧光增强效应检测线粒体内一氧化氮的比率荧光方法技术

本发明专利技术涉及一种基于金属荧光增强效应检测线粒体内一氧化氮的比率荧光方法，属于生物分析检测技术领域。本发明专利技术设计制备了NO响应探针pNO520和GNP，二者通过带有荧光基团的dsDNA连接，最后将具有靶向线粒体功能的靶向肽修饰到GNP表面形成生物传感器Mito‑GNP‑pNO520。在NO存在的有氧条件下，通过pNO520与NO的特异性反应产生荧光信号的变化，并且利用GNP与pNO520之间的MEF效应大大增强荧光信号，同时利用Cy5荧光基团作为内参以比率荧光的方式检测NO。由于靶向肽的存在，该方法可以特异性靶向线粒体检测并成像NO，同时具有高灵敏、高特异性、测定准确等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物分析检测，尤其是指一种基于金属荧光增强效应检测线粒体内一氧化氮的比率荧光方法。

技术介绍

1、一氧化氮(no)是一种重要的气体信使分子，通过内源性l-精氨酸在细胞中由一氧化氮合酶(nos)的作用下产生。no在各种生化过程中起着关键作用，如血管舒张、血压调节、神经保护和抑制炎症。机体内no水平异常与多种疾病密切相关，包括心血管系统疾病、中枢神经系统疾病和癌症。然而，由于其在生物系统中浓度低、半衰期短且容易被氧化，详细了解no的多重功能仍然是一个巨大的挑战。因此，迫切需要开发敏感准确的no检测方法，以更好地阐明其在生理和病理过程中的作用。线粒体是哺乳动物细胞中产生no的主要亚细胞器。最近的研究表明，no对线粒体功能具有精细调节作用，如调节线粒体呼吸链、调节线粒体膜电位和调节线粒体氧化应激反应。这些线粒体功能对于维持正常细胞功能和生存至关重要。因此，检测线粒体中no的水平对于揭示机体的生理和病理状态具有重要意义，为疾病的预防、诊断和治疗提供了新的方向和方法。

2、与其他一氧化氮检测方法(如比色法、电化学、化学发光和表面增强拉曼光谱)本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于金属荧光增强效应检测线粒体内一氧化氮的比率荧光方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的比率荧光方法，其特征在于，步骤(1)中，所述ssDNA的核苷酸序列为：HS-SH C6-5`-GCGGCTGTTAAGCATAATATT-3`-Azide(N3)。

3.根据权利要求1所述的比率荧光方法，其特征在于，步骤(2)中，所述cDNA的核苷酸序列为5`-AATATTATGCTTAACAGCCGC-3`。

4.根据权利要求1所述的比率荧光方法，其特征在于，步骤(2)中，所述荧光基团选自Cy5、Cy5.5、Cy7、ROX和AlexaF...

【技术特征摘要】

1.一种基于金属荧光增强效应检测线粒体内一氧化氮的比率荧光方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的比率荧光方法，其特征在于，步骤(1)中，所述ssdna的核苷酸序列为：hs-sh c6-5`-gcggctgttaagcataatatt-3`-azide(n3)。

3.根据权利要求1所述的比率荧光方法，其特征在于，步骤(2)中，所述cdna的核苷酸序列为5`-aatattatgcttaacagccgc-3`。

4.根据权利要求1所述的比率荧光方法，其特征在于，步骤(2)中，所述荧光基团选自cy5、cy5.5、cy7、rox和alexafluor 680中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的比率荧光方法，其特征在于，步骤(3)中，所述响应探针pno520通过以下方法制备得到：

6....

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓丽，周楠迪，刘浩，张雨婷，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：