本发明专利技术属于放疗增敏药物领域，具体涉及腺病毒介导白介素－２４基因在放疗增敏领域的应用。本发明专利技术还公开了一种应用腺病毒介导白介素－２４基因表达载体Ａｄ－ＩＬ－２４增强肿瘤细胞对放疗敏感性的方法，放疗前将腺病毒介导白介素－２４基因表达载体Ａｄ－ＩＬ－２４导入肿瘤细胞，使人类ＩＬ－２４基因在肿瘤细胞中表达，然后进行放疗。本发明专利技术所述腺病毒介导的ＩＬ－２４单基因表达具有显著性抑制ＳＰＣ－Ａ１肺腺癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用；Ａｄ－ＩＬ－２４联合放疗对ＳＰＣ－Ａ１肺腺癌细胞的细胞毒作用和诱导凋亡的作用高于Ａｄ－ＩＬ－２４单纯组和单一放疗组，均呈现明显放疗增敏协同效应。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于放疗增敏药物领域，具体涉及腺病毒介导白介素-24基因在放疗增敏 领域的应用。
技术介绍
放射治疗是肿瘤治疗的常规手段之一，70% 80%的恶性肿瘤患者在治疗过程中 需接受放疗。肿瘤对辐射不敏感或对辐射产生抗拒性，是放射治疗难以根治恶性肿瘤的主 要原因之一。近年来，随着对肿瘤发病分子机制及细胞生长调控机理研究的深入，肿瘤基 因治疗已取得一些令人振奋的成果，但针对单一环节的转基因治疗常常不能达到令人满意 的治疗效果。Weichselbaum等于1994年提出肿瘤基因-放射治疗的新思路，其原理是将 辐射诱导型基因的调控序列与肿瘤杀伤基因相耦联，转染肿瘤细胞，对肿瘤实施局部照射 同时诱导基因表达，通过射线与基因的双重作用杀伤肿瘤，以达到降低照射剂量、缓解正常 组织损伤的目的。因此，将放射治疗与基因治疗相结合，事半功倍，已成为肿瘤治疗研究的 重要方向之一，目前肿瘤基因联合放射治疗的有关机制主要有如下几种(参见田玥，苏成 海.国际放射医学核医学杂志.2008 32(1))①免疫基因治疗与放射治疗的联合；②抑癌 基因与放射治疗的联合；③自杀基因治疗与放射治疗的联合；④抗血管生成基因治疗与放 射治疗的联合；⑤特异性启动子基因治疗与放射治疗的联合；⑥辐射保护性基因治疗与放 射治疗的联合。现有技术中，关于腺病毒介导白介素-24(Ad-IL_24)的报道，主要集中在其抑制 肿瘤方面的应用，近年来国外大量研究资料已证明，Ad-IL-24对肿瘤有抑制生长和促进凋 亡作用，并能调节IL-6，TNF-a，IFN-γ等细胞因子的分泌；在国内本课题组成员对此作了 大量的研究，研究结果显示Ad-IL-24具有特异的抗肿瘤作用，对正常细胞无伤害作用；在 美国Ad-IL-24已经进入肿瘤基因治疗的I期临床。另外，申请号为200910025316.5的中国专利技术专利申请公开说明书公开了人白介 素-24基因腺病毒载体在制备治疗癌痛药物中的应用，包括以下步骤(1)构建重组转移质 粒pAdTrack-CMV-IL-24 ； (2)用测序正确的pAdTrack-CMV-IL-24按照常规方法制备阳性克 隆 pAdEasy-l-pAdTraek—CMV-IL-24 重组质粒；(3)将 pAdEasy-l-pAdTraek-CMV-IL-24 基 因重组质粒进行病毒包装，经多轮扩增后，可获高滴度的重组腺病毒子(Ad-IL-24)。(4)用 Ad-IL-24感染肿瘤组织，并结合大鼠胫骨癌痛模型的镇痛测试，结果不仅证明了 Ad-IL-24 具有共识的抑癌功能，而且腺病毒介导白介素-24基因在细胞中的表达可以通过多种途径 发挥抑制癌痛的作用。然而Ad-IL-24作为放疗增敏剂的应用国内外至今未见报道。
技术实现思路
本专利技术目的是提供腺病毒介导白介素-24基因表达载体Ad-IL-24的新应用，即腺 病毒介导白介素-24基因表达载体Ad-IL-24制备放疗增敏药物的应用。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是腺病毒介导白介素-24基因表达载 体Ad-IL-24在制备放疗增敏药物中的应用。本专利技术同时要求保护一种放疗增敏药物，所述放疗增敏药物的活性成分包括腺病 毒介导白介素-24基因表达载体Ad-IL-24。本专利技术还提供了 一种应用腺病毒介导白介素-24基因表达载体Ad-IL-24增强肿 瘤细胞对放疗敏感性的方法，放疗前将腺病毒介导白介素-24基因表达载体Ad-IL-24导入 肿瘤细胞，使人类IL-24基因在肿瘤细胞中表达，然后进行放疗。上述技术方案中，腺病毒介导白介素-24基因表达载体Ad-IL-24的制备方法为现 有技术，可以参见申请号为200910025316. 5的中国专利技术专利申请公开说明书。上述技术方案中，所述肿瘤细胞为肺腺癌肿瘤细胞。由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点本专利技术所述腺病毒介导的IL-24单基因表达具有显著性抑制SPC-Al肺腺癌细胞 生长和诱导细胞凋亡的作用；Ad-IL-24联合放疗对SPC-Al肺腺癌细胞的细胞毒作用和诱 导凋亡的作用高于Ad-IL-24单纯组和单一放疗组，均呈现明显放疗增敏协同效应。附图说明图1为实施例一中重组腺病毒介导的IL-24基因在SPC-Al细胞中的转录鉴定，其 中，1. PBS ；2. AdV ；3. Ad-IL-24 ；Μ. :DL2000marker ；图2为实施例一中重组腺病毒介导的IL-24基因在SPC-Al细胞中的表达鉴定，其 中，1. PBS ；2. AdV ；3. Ad-IL-24 ；图3A为实施例一中Ad-IL-24等对SPC-Al肺腺癌细胞生长的影响，Ad-IL-24组、 单纯放疗组、Ad-IL-24+放疗联合组分别与PBS，AdV组比较，* P < 0. 01 ；Ad-IL-24+放疗 联合组分别与Ad-IL-24，放疗组比较，Δ P < 0. 01 ；图3Β为实施例一中Ad-IL-24等对SPC-Al细胞生长的抑制率结果比较， Ad-IL-24+放疗联合组分别与Ad-IL-24组，放疗组比较，* Q = 1. 17 ；图4为实施例一中PI染色法检测Ad-IL-24等对SPC-Al肺腺癌细胞周期结果的比 较，Ad-IL-24组、单纯放疗组、Ad-IL-24+放疗联合组分别与PBS，AdV组比较，* P < 0. 01 ； Ad-IL-24+放疗联合组分别与Ad-IL-24，放疗组比较，Δ P < 0. 01 ；分别与PBS，Ad组比较， ☆ P < 0. 05 ；图5为流式细胞仪检测Ad-IL-24等对SPC-Al肺腺癌细胞凋亡率测定的结果比 较，Ad-IL-24组、单纯放疗组、Ad-IL-24+放疗联合组分别与PBS，AdV组比较，* P < 0. 01 ； Ad-IL-24+放疗联合组分别与Ad-IL-24，放疗组比较，Δ P < 0. 01, Q = 1. 16 ；图6为实施例二中各组瘤体体积_时间变化曲线，Ad-IL-24组、单纯放疗组、 Ad-IL-24+放疗联合组分别与PBS组、AdV组比较，* P < 0. 01 ；Ad-IL-24+放疗联合组分别 与Ad-IL-24组、单纯放疗组比较，ΔΡ < 0. 01 ；图7A为实施例二中各组瘤体实物图；图7B为实施例二中各组瘤体重量直方图，Ad-IL-24组、单纯放疗组、Ad-IL-24+放 疗联合组分别与PBS组、AdV组比较，* P < 0. 01 ；Ad-IL-24+放疗联合组分别与Ad-IL-24 组、单纯放疗组比较，ΔΡ < 0. 01 ；图8为实施例二中各组抑瘤率直方图，Ad-IL-24+放疗联合组分别与Ad-IL-24组、 单纯放疗组比较，* P < 0. 01 ;Q = 1. 25。具体实施例方式下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述1、材料和试剂人肺腺癌细胞株SPC-Al，QBI-293A细胞及携带GFP绿色荧光蛋白的腺病毒空载体 AdV、Ad-IL-24由苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室提供。培养基RPMI1640，胎 牛血清购自Gibcol Brl公司，MTT试剂购自Sigma公司，96孔细胞培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
腺病毒介导白介素－２４基因表达载体Ａｄ－ＩＬ－２４在制备放疗增敏药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨吉成，盛伟华，凌春华，黄锦宏，谢宇锋，赵大国，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。