【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种通过无机铁模拟铁过载致病原菌易感性的大口黑鲈模型建立方法，属于生物。
技术介绍
1、嗜水气单胞菌广泛存在于自然界中，是一种条件性致病菌，可产生多种毒力因子及胞外产物，是引发水产动物病害的重要病原菌之一，也是重要的人畜共患病原体。嗜水气单胞菌可感染多种水产养殖鱼类，如草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲤鱼、鲫鱼、尼罗罗非鱼和斑点叉尾鮰等，引起水生动物发生败血症。
2、铁是水生动物体内各种酶和蛋白质的重要组成部分，参与多种生物过程，包括氧气运输、细胞代谢、能量产生、脱氧核糖核酸合成、先天免疫和生长。已有研究表明，饲料中添加适量铁可以提高草鱼、美国红鱼、斑点叉尾鮰、鲤鱼和罗非鱼等的摄食量和饵料利用率。铁的缺乏或过量都会导致水生动物生长缓慢和营养利用率低，但尚无研究表明膳食铁摄入与病原菌易感性之间是否存在相关性。
3、感染后存活率的高低可直接反应大口黑鲈对嗜水气单胞菌的易感性。生物体对病原菌的易感性受多种因素的影响。首先，免疫调节水平是重要的影响因素之一，细胞因子是免疫反应的关键效应器和调节剂，感染或细胞损伤可影响其产生或释放。其次，氧化应激与感染具有密切的相关性，氧化应激通常是由促氧化负荷和抗氧化防御之间的不平衡引起的。抗氧化酶包括sod、cat和gsh-px，是生物抗氧化防御系统的关键组成部分，在清除ros中起着至关重要的作用。mda是一种重要的脂质过氧化产物，是评价氧化损伤的合适标志物。此外，肠道菌群在调节鱼类的营养代谢、免疫反应和抗病方面同样发挥着重要作用。
4、现有研究中，缺乏通过膳食摄入
技术实现思路
1、针对目前缺乏通过膳食干预，得到具有病原菌易感性特征的大口黑鲈模型的问题，本专利技术提供一种通过无机铁模拟铁过载致病原菌易感性的大口黑鲈模型建立方法，该方法具有操作简单，成功率与成活率高，稳定性好，病理特征明显的优势。本方法提供的铁过载致病原菌易感性的水产动物模型的建立将有助于在动物水平阐明铁过载与病原菌易感性之间的因果关系，将为水产动物感染病原菌的发病机制研究及水产动物病原菌感染治疗药物的临床前研究提供有力支持。
2、为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：
3、一种通过无机铁模拟铁过载致病原菌易感性的大口黑鲈模型建立方法，包括以下步骤：
4、(1)将feso4·7h2o与大口黑鲈幼鱼基础饲料混合，制成铁添加饲料；
5、(2)选取健康4～5cm大口黑鲈幼鱼，在投喂铁添加饲料14～56天后进行嗜水气单胞菌攻毒存活率评价，攻毒前将实验鱼禁食24小时，并采集肠道、肝脏和鳃组织，分别贮存在-80℃和4％多聚甲醛中用于组织铁含量、氧化应激水平、免疫调节水平、铁代谢水平、肠道菌群和组织学分析。测得实验组攻毒后存活率与对照组相比显著降低(p<0.05)，组织铁含量显著性升高(p<0.05)，氧化应激显著增加(p<0.05)，免疫调节相关基因表达显著改变(p<0.05)，铁稳态调节基因表达显著变化(p<0.05)，肠道菌群组成和功能产生改变，且组织细胞产生明显损伤，则病原菌易感性的大口黑鲈模型建立成功。
6、在一种实施方式中，步骤(1)中，铁添加饲料中feso4·7h2o含量为800～3200mg/kg。
7、在一种实施方式中，步骤(1)中，大口黑鲈基础饲料为幼鱼开口专用饲料。
8、在一种实施方式中，步骤(2)中，健康4～5cm大口黑鲈幼鱼的体重为0.8～2.2g。
9、在一种实施方式中，步骤(2)中，每日饲料投喂方法为：分别于上午8:30和下午17:30各投喂一次，摄食率设定为试验鱼体重的1％。
10、在一种实施方式中，所述病原菌包括但不限于嗜水气单胞菌。
11、本专利技术还提供所述方法构建的病原菌易感模型。
12、本专利技术还提供所述方法在构建病原菌易感模型中的应用。
13、有益效果：
14、本专利技术通过投喂feso4·7h2o添加饲料14～56天可成功建立铁过载致具有病原菌易感性特征的大口黑鲈模型。且采用该方法建立的病原菌易感性大口黑鲈模型死亡率为0(排除其他环境因素影响)，建模成功率为100％，建立的铁过载致病原菌易感性大口黑鲈模型病理特征典型，模型可长期维持铁过载致病原菌易感性的典型病理特征(感染后死亡率高，组织铁含量高，氧化应激增加，炎症反应增加，铁稳态失衡，肠道菌群紊乱，组织细胞损伤)，具有极高的模型稳定性。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种建立病原菌易感性的水生动物模型的方法，其特征在于，向水生动物饲喂无机铁制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无机铁包括但不限于FeSO4·7H2O。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水生动物包括但不限于大口黑鲈。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病原菌包括但不限于嗜水气单胞菌。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将FeSO4·7H2O添加至饲料中进行饲喂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述饲料中，FeSO4·7H2O含量为800～3200mg/kg。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述饲料的饲喂量为0.3％～5％水生动物重量/d。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，饲喂14～56天。
9.由权利要求1～8任一所述方法构建的病原菌易感模型。
10.权利要求1～8任一所述方法在构建病原菌易感模型中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种建立病原菌易感性的水生动物模型的方法，其特征在于，向水生动物饲喂无机铁制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无机铁包括但不限于feso4·7h2o。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水生动物包括但不限于大口黑鲈。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病原菌包括但不限于嗜水气单胞菌。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将feso4·7h2o添加至饲料中...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛健，陈肖丽，刘双平，
申请(专利权)人：南方海洋科学与工程广东省实验室广州，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。