内标参与的核酸定量方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及核酸检测技术领域，具体涉及内标参与的核酸定量方法及试剂盒。本发明专利技术提出的内标参与的核酸相对定量方法，以靶标与内标的Ct比值和靶标浓度值的对数值二者之间的二项式数学关系为基础计算未知样本浓度。该定量方法可以更好的解决现有一些定量方法由于PCR抑制而造成的靶标Ct变化而引起较大的定量偏差，同时也可以解决现有一些定量方法对高浓度样本和低浓度样本定量偏差较大的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核酸检测，具体涉及内标参与的核酸定量方法及试剂盒。

技术介绍

1、核酸定量方法可分为绝对定量方法和相对定量方法。核酸绝对定量需使用数字pcr(dpcr)技术，根据泊松分布原理计算，无需借助待测靶标定标品即可实现未知样本浓度的绝对定量。但是该方法操作繁琐复杂，需要精密的仪器设备，需要训练有素的专业技术人员，且试剂耗材昂贵，难以大规模推广其在核酸定量方面的应用。相较于核酸绝对定量，常规的核酸相对定量方法一般采用rt-qpcr(检测rna靶标)或qpcr(检测dna靶标)技术借助系列定标品绘制标准曲线来实现待测样本定量。常规的核酸相对定量方法为了确保检测仪器、检测试剂、操作环境以及操作人员等不同而造成的定量结果偏差，需要在每次试验中均绘制标准曲线以确保定量结果的准确性和稳定性。由于该方法每次试验均需要消耗大量的定标品，因此导致操作时间和检测成本上升。

2、不同于常规的核酸相对定量方法，以样本ct值和浓度的对数值二者之间的线性关系为基础计算待测样本的浓度。内标参与定量的核酸相对定量方法，或者以内标与靶标的ct差值和靶标与内标的浓度比值的对本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种核酸定量方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二项式拟合定量方程式为：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述待测样本含有至少两个待测靶标。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，当对所述待测样本含有的至少两个待测靶标进行核酸定量检测时，步骤(1)获取待测样本的至少两个待测靶标的Ct值，

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，进行第一qPCR检测时，所述内标为非竞争性内标，所述内标与所述定标品或者所述待测样本不共用引物。

6.根据权利要求1-4中任一项...

【技术特征摘要】

1.一种核酸定量方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二项式拟合定量方程式为：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述待测样本含有至少两个待测靶标。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，当对所述待测样本含有的至少两个待测靶标进行核酸定量检测时，步骤(1)获取待测样本的至少两个待测靶标的ct值，

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，进行第一qpcr检测时，所述内标为非竞争性内标，所述内标与所述定标品或者所述待测样本不共用引物。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，在进行第一qpcr检测时，所述内标的扩增效率是所述定标品或所述待测样本的扩增效率的90-110％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述方法进一步包...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺育敢，杜凯，刘振华，刘远红，李婷华，
申请(专利权)人：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：