【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，特别是涉及一种复方氨甲环酸制剂全成分含量的检测方法和应用。
技术介绍
1、复方氨甲环酸片是由氨甲环酸、维生素c、谷胱甘肽、l-半胱氨酸和泛酸钙组成的复合制剂产品，具有美白淡斑的功效。作为复方制剂，多个组分具有一定的配伍和配比关系，在有效提高药物的活性的同时也提高了给药的便捷性。
2、目前，氨甲环酸、维生素c、谷胱甘肽和l-半胱氨酸含量测试方法在各国药典中均以滴定法为主。对于一个复方制剂而言，采用滴定法测试每种成分的含量方法不具有专属性，无法准确滴定出每一成分的含量。寻找一种方便快捷、准确高效的分析方法进行复方制剂中每一成分含量测试尤为重要。
3、然而，氨甲环酸复方片中各成分的结构如下：
4、
5、
6、可以看出，这5种主要成分结构上含有共轭双键较少，多为含有氨基、羧基和羟基基团，分子极性较大保留弱，利用反相高效色谱法进行5种成分的保留和分离难度较大，是目前复方氨甲环酸片含量测试需要解决的技术问题。
技术实现思路
1、针对上述常规技术中无利用反相高效色谱法进行复方氨甲环酸片5种成分同时检测的问题，本专利技术提供一种复方氨甲环酸制剂全成分含量的检测方法，可利用常规高效液相色谱仪和反向色谱柱，检测复方氨甲环酸片中的5种成分。且该检测方法得到的各成分主峰峰型对称性、分离度、稳定性和含量准确度均良好。
2、一方面，本专利技术提供了一种复方氨甲环酸制剂全成分含量的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测
3、固定相：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
4、流动相：流动相a为含辛烷磺酸钠离子对试剂和磷酸盐的缓冲溶液，流动相b为甲醇或乙腈，流速为0.5-1ml/min；
5、检测波长：200～230nm。
6、专利技术人在研发过程中，为了提高各成分的保留，经过多方摸索和尝试，采用了磷酸盐和含辛烷磺酸钠离子对试剂的缓冲溶液作为流动相a，配合甲醇或乙腈的有机相，可提高各成分的保留。
7、可以理解的，上述甲醇或乙腈等试剂，按本领域常规理解，一般指纯度在99.9％以上的分析纯试剂。对于流动相的缓冲溶液，其溶剂通常为水，且所用水一般为去离子水等纯化水。
8、在一些方案中，所述色谱柱为agilent zorbax sb-c18，规格为3.0mm×150mm，3.5μm。采用该色谱柱配合本专利技术的流动相体系，可以实现较好的检测性能。
9、在一些方案中，所述流动相a为ph 2.4～2.9的1-辛烷磺酸钠-磷酸二氢钾缓冲溶液，所述流动相b为甲醇。
10、为了实现各组分之间较好的分离度，本专利技术还筛选了不同ph的流动相对分离体系的影响，结果发现，各成分对ph具有较强的依赖性，流动相ph为2.4～2.9较为理想。同时，专利技术人在研发过程中还发现，5种主成分在水溶液中较0.1％磷酸水溶液中更稳定，因而选用ph 2.4～2.9的1-辛烷磺酸钠-磷酸二氢钾缓冲溶液作为流动相a。
11、可以理解的，上述ph值在实际操作过程中一般会存在±0.05的误差，本专利技术中所述的ph是在配制时采用ph计测得的ph值，所述ph值测试的温度为25℃。
12、在一些方案中，所述流动相a中，1-辛烷磺酸钠的浓度为1±0.1g/l，磷酸二氢钾的浓度为50±5mm。
13、在一些方案中，所述流动相a以磷酸调ph至2.5。
14、在一些方案中，所述流动相a的配制方法如下：称取6.8g的磷酸二氢钾和1.0g的1-辛烷磺酸钠置于1000ml水中，溶解摇匀后，用磷酸调节ph为2.5，抽滤，即得。
15、在一些方案中，按照以下梯度洗脱程序进行洗脱：
16、
17、
18、所述梯度洗脱的时间从3min到15min的流动相变化为匀速变化。
19、上述流动相的比例指各流动相的体积占洗脱液总体积的百分比。可以理解的，上述梯度洗脱程序是指在0min时起始的洗脱液为流动相a的体积占比为95％，流动相b的体积占比为5％；在0～3min内按流动相b的体积占比为5％等梯度洗脱；在15min洗脱液中流动相a的体积比降低为70％，流动相b的体积比升高为30％；在15～18min内按流动相b的体积占比为30％等度洗脱。
20、其中，3～15min内，所述流动相a从95％变化到70％的转换速率是一个匀速变化的过程。相应地，所述流动相b从5％变化到30％的转换速率也是一个匀速变化的过程。
21、在一些方案中，以外标法计算各成分含量。
22、在一些方案中，所述流速为0.5-0.9ml/min，优选为0.7ml/min。
23、在一些方案中，所述检测波长为205～220nm，优选为205～215nm，更优选为210nm。
24、考虑到氨甲环酸、维生素c、谷胱甘肽、l-半胱氨酸和泛酸钙的光谱特点，检测波长均为末端吸收，因此上述高效液相色谱法中，检测波长可选为200～230nm，而综合考虑目标物的信号强度和检测基线的波动稳定性等因素，可选205-220nm，优选为205～215nm，更优选为210nm。
25、在一些方案中，上述外标法按照本领域的常规操作，采用标准品等配置不同浓度梯度试剂，建立标准曲线，用于进行定量检测。
26、在一些方案中，所述检测条件还包括柱温，所述柱温为35～45℃，例如40℃。
27、在一些方案中，所述复方氨甲环酸供试品溶液为水溶液，进样量为5～10μl，例如10μl；其中，所述复方氨甲环酸供试品溶液中，氨甲环酸的浓度为1.0±0.2mg/ml、维生素c的浓度为0.54±0.108mg/ml、谷胱甘肽的浓度为0.068±0.0136mg/ml、l-半胱氨酸的浓度为0.1±0.02mg/ml、泛酸钙的浓度为0.04±0.008mg/ml。
28、另一方面，本专利技术还提供了上述的检测方法在复方氨甲环酸制剂质量控制中的应用。
29、在一些方案中，所述复方氨甲环酸制剂为片剂。
30、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
31、本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
32、本专利技术的积极进步效果在于：
33、本专利技术的一种复方氨甲环酸制剂全成分含量的检测方法，解决了滴定法专属性差，无法准确测定氨甲环酸复方制剂各组分含量的难题，可利用反向高效液相色谱法对复方氨甲环酸片中全成分进行含量检测，解决了极性大的小分子化合物在反向色谱中保留弱的难题，且对设备要求不高，使用普通液相色谱仪配合高性价比的色谱柱即可完成检测。
34、同时，该检测方法得到的各成分主峰峰本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种复方氨甲环酸制剂全成分含量的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：将复方氨甲环酸供试品溶液进样至高效液相色谱仪，记录色谱图，计算各成分含量，所述全成分包括氨甲环酸、维生素C、谷胱甘肽、L-半胱氨酸和泛酸钙，所述高效液相色谱法的检测条件如下：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，规格为3.0mm×150mm，3.5μm。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A为pH2.4～2.9的1-辛烷磺酸钠-磷酸二氢钾缓冲溶液，所述流动相B为甲醇。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中，1-辛烷磺酸钠的浓度为1±0.1g/L，磷酸二氢钾的浓度为50±5mM。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A以磷酸调pH至2.5。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，按照以下梯度洗脱程序进行洗脱：
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测条件符合以下
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测条件还包括柱温，所述柱温为35～45℃，例如40℃。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述复方氨甲环酸供试品溶液为水溶液，进样量为5～10μL，例如10μL；其中，所述复方氨甲环酸供试品溶液中，氨甲环酸的浓度为1.0±0.2mg/mL、维生素C的浓度为0.54±0.108mg/mL、谷胱甘肽的浓度为0.068±0.0136mg/mL、L-半胱氨酸的浓度为0.1±0.02mg/mL、泛酸钙的浓度为0.04±0.008mg/mL。
10.权利要求1-9任一项所述的检测方法在复方氨甲环酸制剂质量控制中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种复方氨甲环酸制剂全成分含量的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：将复方氨甲环酸供试品溶液进样至高效液相色谱仪，记录色谱图，计算各成分含量，所述全成分包括氨甲环酸、维生素c、谷胱甘肽、l-半胱氨酸和泛酸钙，所述高效液相色谱法的检测条件如下：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为agilent zorbax sb-c18，规格为3.0mm×150mm，3.5μm。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a为ph2.4～2.9的1-辛烷磺酸钠-磷酸二氢钾缓冲溶液，所述流动相b为甲醇。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a中，1-辛烷磺酸钠的浓度为1±0.1g/l，磷酸二氢钾的浓度为50±5mm。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a以磷酸调p...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓冬，赵红丽，樊天宇，刘学军，
申请(专利权)人：上海药坦药物研究开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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