【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于一种数字数字pcr检测装置，尤其涉及数字pcr微腔式检测系统和微流控芯片。
技术介绍
1、数字pcr(digital pcr，dpcr)是一种核酸分子绝对定量技术，它能够对起始样品的绝对定量。数字pcr是将含有dna模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并发生扩增反应，并根据泊松分布和阳性微滴比例来实现核酸分子的绝对定量。检测步骤一般包括：dna模板准备：首先需要准备待检测的dna模板，可以是总dna、rna或总rna，如果需要同时检测多个靶基因，可以将dna模板进行cdna合成或者使用rna模板。设计引物：根据目标基因的序列，设计特异性的上游和下游引物。引物应具有适当的长度(通常为8-16个核苷酸)，以确保特异性扩增和良好的退火温度。数字pcr反应体系构建：将数字pcr仪器与检测芯片配合检测。反应体系包括：模板dna、引物、dntps、聚合酶、稳定剂和缓冲液。在构建反应体系时，需要注意控制反应体积、温度和时间，以保证扩增效率和稳定性。上机检测：将处理好的样品加入到dpcr反应体系中，然后将反应体系放入数字pcr仪器中进行扩增。数字pcr仪器会自动分配多个独立的反应室给不同的样品孔，每个反应室内都会发生一次独立的扩增循环。扩增过程中，数字pcr仪器会根据设定的退火温度自动降温至熔解曲线的起点(70-95℃)，然后升高温度(15-60℃)以实现荧光信号的激发和检测。数据分析：扩增结束后，数字pcr仪器会输出原始数据和荧光信号强度值。通过对原始数据进行处理，可以得到每个样品孔内目标基因的拷贝数，实现对样品进行相对定量分
2、现有的数字pcr系统还存在一个较大局限，人为操作步骤较多，需要人工制作检测液体，检测样本制作完成，通过注射器具将待检测仪注射至检测芯片中，在这过程中待测液体的取入取出，都容易引入杂质，影响后续检测的准确性。另外，现有技术的检测通常需要样本液体具有足够的目标序列，目标序列较少会限制数字pcr检测的准确性，需要通过额外的调制样本获得足够的检测液体，再进行pcr检测，该方法无疑增加了检测步骤的复杂度，并且增加了引入杂质的风险。
技术实现思路
1、本专利技术解决以上问题，设计了一种数字pcr检测装置，尤其通过设置密封反应环境，设计配合密封检测环境使用的微流控芯片，用去减少检测过程中的待测液体与人和空气的接触，确保检测的准确性。
2、一种数字pcr检测装置，pcr检测装置包括：微流控芯片、密封腔、真空泵、载物台、离心驱动装置、荧光测试装置；密封腔用于固定载物台，真空泵用于将密封腔抽成真空状态，离心驱动装置固定载物台，载物台用于固定微流控芯片，当芯片注入待测液体后可通过离心驱动装置将待检测液混匀，进一步将真空腔形成真空，微流控芯片内部形成压强差，从而驱动待检测液自动离散流入微阵列反应腔。
3、尤其在微流控芯片中增加一个储液器腔，一方面可以将数字pcr产物进行预扩增，以增加数字pcr产物的数量，提高检测的灵敏度；还可以进行多重数字pcr在同一数字pcr反应体系里加上两对或两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的数字pcr反应。另外，在应过程中根据待测液体的检测要求，需要多次增加检测液体或者反应过程中增加其他辅助检测物时，使用储液腔，从而减少检测待测液体与人和周围环境的接触，提升检测的效率和准确性。
4、载物台设置加热装置及温度传感器，用于将微流控芯片待检测液体进行扩增反应。微流控芯片中待检测液体发生多次扩增反应后，荧光检测装置用于检测待测液体经过扩增反应后的荧光特性，从而获得检测结构。
5、微流控芯片包括：基底层、图形层、防蒸发层、盖板层，图形层包括三层pdms薄膜，包括储液腔、微通道、微阵列反应腔、微控阀、第一注液孔、第二注液孔、第一通气孔、第二通气孔。第一注液孔和第二注射孔连接储液腔，储液腔通过微通道连接微阵列反应腔；微阵列反应腔连接通气孔，数字pcr检测装置通过密封腔形成真空环境，数字微流控芯片内外部形成压强差，驱动检测液体自动离散进入微阵列反应腔。进一步在待检测液体从储液腔进入微阵列反应腔时，可以通过离心装置驱动芯片做旋转运动，从而辅助待检测液体进入微阵列反应腔。
6、进一步第一注液孔，第二注液孔，第一通气孔，第二通气孔在微通道联通上均可以设置微控阀。微阀孔可以通过弹性软垫设置于微通道上方，将弹性软垫按下实现微通道的闭合。
7、进一步进行待测液体检测时，待测液体通过第一注液孔和第二注液孔注入所述微流控芯片的所述储液腔。微流控芯片固定于载物台上，离心驱动装置驱动载物台旋转；进一步加热装置对储液腔中的待测液体进行预扩增反应，确保待测液体获得足够的待检测样本；进一步微流控芯片第二通气孔微控阀打开，密封腔成真空状态，从而驱动待测液体经过微流道注入微阵列反应腔。
8、进一步微流控芯片形状为中心对称形状，储液腔设置于中心对称点，微阵列反应腔对称设置于所述储液腔。
9、进一步微流控芯片结构为，图形层设置于基底层上，防蒸发层设置于图形层上，盖板层设置于防蒸发层。
10、进一步制作所述微流控芯片的步骤包括：第一步，在基底层地涂覆固化所述pdms薄膜；第二步，通过软光刻技术在所述所述pdms薄膜形成所述图形层；第三步，通过涂覆固化在图形层形成所述防蒸发层，所述防蒸发层为热塑性薄膜树脂；第四步，通过热键合工艺将，将所述盖板层压至防蒸发层。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种数字PCR检测装置，检测装置包括：微流控芯片、密封腔、真空泵、载物台、离心驱动装置、荧光测试装置；
2.根据权利要求1所述的数字PCR检测装置，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的数字PCR检测装置，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的数字PCR检测装置，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的数字PCR检测装置，其特征在于：
6.根据权利要求4所述的数字PCR检测装置，其特征在于：
7.根据权利要求1所述的数字PCR检测装置，其特征在于：
8.根据权利要求7所述的数字PCR检测装置，其特征在于：
9.根据权利要求1所述的数字PCR检测装置，其特征在于：所述微流控芯片结构为，所述图形层设置于所述基底层上，所述防蒸发层设置于所述图形层上，所述盖板层设置于所述防蒸发层。
10.根据权利要求1所述的数字PCR检测装置，其特征在于：制作所述微流控芯片的步骤包括：第一步，在基底层地涂覆固化所述PDMS薄膜；
【技术特征摘要】
1.一种数字pcr检测装置，检测装置包括：微流控芯片、密封腔、真空泵、载物台、离心驱动装置、荧光测试装置；
2.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的数字pcr检测装置，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的数字pcr检测装置，其特征在于：
6.根据权利要求4所述的数字pcr检测装置，其特征在于：
...【专利技术属性】
技术研发人员：杨俊瑶，陈哲逸，蒋黎敏，柯星，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属新华医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。