【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胶原蛋白生产，尤其涉及一种胶原蛋白纯化方法。
技术介绍
1、重组人源化胶原蛋白是基于人体皮肤ⅲ型胶原蛋白的原始基因序列，优化选择其中水溶性强、生物活性高的部分进行密码子优化和拼接重组，得到了全新的重组人源化ⅲ型胶原蛋白序列，利用生物发酵技术实现可规模化生产，通过实验证实此胶原蛋白表达量大，水溶性好，生物活性高，其性能优于人天然胶原蛋白，在生物医用材料、美容化妆品、食品保健等领域有着广大的应用前景。
2、现有技术中公开了利用毕赤酵母重组菌 gs115/ppic9k-a4-prx发酵生成重组人源化胶原蛋白的技术方案，该重组菌发酵生成的重组蛋白可将残留在农产品和饲料中的玉米赤霉烯酮毒素降解，从而提高农产品和饲料的品质，消除玉米赤霉烯酮毒素对养殖业及饲料工业的危害，具有很好的应用前景。
3、内毒素是革兰氏阴性菌的菌体中存在的毒性物质的总称。是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分，由菌体裂解后释出的毒素，又称之为“热原”。单位eu/ml。会引起人体的炎症反应，使人出现发热、炎症和免疫反应等症状。
4、在利用毕赤酵母重组菌 gs115/ppic9k-a4-prx发酵生成重组人源化胶原蛋白的生产过程中，很容易引入外源性内毒素进而影响蛋白原料的生物活性，尤其对于胶原蛋白这种安全性要求较高的原料来说，内毒素的控制显得尤为重要。在生产上控制内毒素难度较大，成本较高，行业标准为0.5eu/ml，因此开发出低内毒素、纯度和收率较高的稳定的纯化工艺对于重组人源三型胶原蛋白具有重要的经济和社会意义。
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技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种胶原蛋白纯化方法，能够得到纯度较高的胶原蛋白，有效控制生产中的内毒素。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种胶原蛋白纯化方法，包括以下步骤：
4、将含胶原蛋白的发酵液进行超滤浓缩换液，得到浓缩液；
5、将浓缩液进行第一次阳离子交换层析，得到洗脱产物；
6、将洗脱产物稀释后进行第二次阳离子交换层析，得到纯化后的胶原蛋白。
7、优选的，所述超滤浓缩换液采用柠檬酸水溶液、柠檬酸钠水溶液、醋酸水溶液、醋酸钠水溶液、磷酸二氢钠水溶液或甘氨酸水溶液中的一种或几种作为换液缓冲液。
8、优选的，所述缓冲液的换液流速在50ml/min以上。
9、优选的，所述第一次阳离子交换层析采用的填料为spff, starpack sp starose6 fast flow。
10、优选的，所述第一次阳离子交换层析采用线性洗脱法进行洗脱。
11、优选的，所述第一次阳离子交换层析采用的洗脱剂包括柠檬酸水溶液和氯化钠水溶液。
12、优选的，采用磷酸氢二钠水溶液对洗脱产物进行稀释；
13、所述磷酸氢二钠水溶液的体积为洗脱产物的2~6倍。
14、优选的，所述第二次阳离子交换层析采用的洗脱剂包括磷酸氢二钠水溶液和氯化钠水溶液。
15、优选的，所述第二次阳离子交换层析采用等度一步洗脱法进行洗脱。
16、优选的，所述氯化钠水溶液的浓度为0.5~1.5m；
17、所述柠檬酸水溶液的浓度为5~50mm；
18、所述磷酸氢二钠水溶液的浓度为5~20mm。
19、本专利技术的有益效果：
20、本专利技术采用超滤浓缩换液结合二次阳离子交换层析的纯化方案，能够成功获得高纯度的重组人源三型胶原蛋白，且收率较佳，内毒素含量样品远远低于行业标准，工艺成本较低，周期较短，更适于产业应用。
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1.一种胶原蛋白纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述超滤浓缩换液采用柠檬酸水溶液、柠檬酸钠水溶液、醋酸水溶液、醋酸钠水溶液、磷酸二氢钠水溶液或甘氨酸水溶液中的一种或几种作为换液缓冲液。
3.根据权利要求2所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述缓冲液的换液流速在50mL/min以上。
4.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述第一次阳离子交换层析采用的填料为SPFF, StarPack SP Starose 6 Fast Flow。
5.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述第一次阳离子交换层析采用线性洗脱法进行洗脱。
6.根据权利要求5所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述第一次阳离子交换层析采用的洗脱剂包括柠檬酸水溶液和氯化钠水溶液。
7.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，采用磷酸氢二钠水溶液对洗脱产物进行稀释；
8.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述第二次阳离子交
9.根据权利要求8所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述第二次阳离子交换层析采用等度一步洗脱法进行洗脱。
10.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述氯化钠水溶液的浓度为0.5~1.5M；
...【技术特征摘要】
1.一种胶原蛋白纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述超滤浓缩换液采用柠檬酸水溶液、柠檬酸钠水溶液、醋酸水溶液、醋酸钠水溶液、磷酸二氢钠水溶液或甘氨酸水溶液中的一种或几种作为换液缓冲液。
3.根据权利要求2所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述缓冲液的换液流速在50ml/min以上。
4.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述第一次阳离子交换层析采用的填料为spff, starpack sp starose 6 fast flow。
5.根据权利要求1所述的胶原蛋白纯化方法，其特征在于，所述第一次阳离子交换层析...
【专利技术属性】
技术研发人员：李羽帆，赵亚冉，
申请(专利权)人：苏州拾光医药生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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