基于单体拟抗体的嵌合抗原受体和包含其的免疫细胞制造技术

技术编号：40657218 阅读：22 留言：0更新日期：2024-03-13 21:34

本发明专利技术涉及一种基于单体拟抗体的嵌合抗原受体。所述基于单体拟抗体的嵌合抗原受体包含含有单体拟抗体的胞外配体结合域。并且，本发明专利技术涉及一种用于在细胞表面膜上表达基于单体拟抗体的嵌合抗原受体的免疫细胞。所述基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，具有以下效果：第一，通过将用于在癌细胞表面上表达的受体为靶标来表现出预防或治疗癌症的优异的效果；第二，与动物源性基于scFv的CAR免疫细胞不同地，由于将基于人FN3的单体拟抗体作为细胞外配体结合结构域，故在施用于人体时表现出低的免疫原性；第三，由于尺寸比scFv小，故具有较高的组织穿透力；第四，可使传统用于治疗癌症的抗体治疗的副作用(例如，非特异性结合导致的自身免疫性疾病的发生)；第五，可以利用针对各种癌细胞抗原构建的单体拟抗体库来制造多种基于单体拟抗体的CAR‑免疫细胞，故可用于预防或治疗具有多种抗原的难治性实体癌。

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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及一种基于单体拟抗体的嵌合抗原受体。所述基于单体拟抗体的嵌合抗原受体包含含有单体拟抗体的胞外配体结合域。并且，本专利技术涉及一种用于在细胞表面膜上表达基于单体拟抗体的嵌合抗原受体的免疫细胞。

技术介绍

1、在治疗实体癌时，仅通过外科切除很难完全清除癌症干细胞、残留癌细胞或转移性癌细胞，故正在使用外科切除术以及放射疗法(radiation therapy)、化学疗法(chemotherapy)、靶向治疗(target therapy)和免疫治疗(immunotherapy)等并行的复合治疗方法。尤其，对于免疫治疗方法而言，由于利用免疫系统，故几乎没有放射治疗或化学疗法中所见的副作用。

2、t细胞作为介导适应性免疫反应(adaptive immunity)的免疫细胞，占淋巴细胞总数的75％。t细胞在大部分血液中以非活性状态存在，但当受到抗原刺激时，转变成活性形态，从而可以消除具有特定抗原的细胞。t细胞的作用在于，可以通过可识别抗原的受体(tcell receptor，tcr)、共同刺激因子(co-stimulatory molecules)和细胞因子(cytokine)等来活化。

3、然而，t细胞的受体(tcr)结合至与肿瘤相关抗原结合的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，mhc)分子，而癌细胞则抑制这种mhc的表达，或者通过改变在t细胞表面上表达的诸如ctla-4、pd-1等的免疫检查点(immune checkpoint)的功能来抑制t细胞的

4、现有已开发的嵌合抗原受体的结构分为可识别抗原的单链可变片段(singlechain variable fragment，scfv)部分、跨膜域(transmembrane domain)和向细胞内转导信号的信号转导域(signaling domain)。作为血液癌治疗方法，诺华(novatis)、吉利德(gilead)、新基(celgene)、爱博泰克(abclonal)等的制药公司以及临床医生已开发出利用与血液癌细胞的cd19抗原特异性结合的scfv的car-t(国际公开号wo201616473、wo2015157252、wo2018023025、wo2017211900、wo2017211900、wo2016028896)。

5、融合多种基因工程化技术的基于car的免疫细胞治疗对于实体癌也是绝对需要的，但对于实体癌而言，由于如不同患者表达不同抗原的异质性(heterogeneity)、低氧环境(hypoxia)等的肿瘤微环境(tumor microenvironment)的复杂的特性、t细胞的迁移和活性的制约等而没有任何进展。

6、肝配蛋白受体(ephrin receptor)作为一种大小为108kda的膜受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，rtk)，分为三部分，在细胞膜的外侧有配体结合域(ligand-binding domain)、半胱氨酸部位(cystein-rich region)和两个纤连蛋白(fibronectin)iii重复结构，中间有跨膜部分，并且在细胞质侧具有细胞激酶活性结构域(labradoretal.,1997；pasquale,1997)。肝配蛋白受体是通过与配体肝配蛋白结合，将细胞外部信号通过磷酸化过程转导至细胞内的蛋白质，其参与细胞增殖、细胞迁移、分化和神经细胞的突触转导、组织重塑、骨细胞分化和血管形成(pasquale eb.cell.133:38-52,2008；barquilla a et al.,annu.rev.pharmacol.toxicol.55:465-487,2015)。根据肝配蛋白受体的结构和配体-受体间的结合特异性(ligand-receptor specificity)，分为9个种类的a组(epha1-8和epha10)和5个种类的b组(ephb1-4和ephb6)(ieguchi k.内分泌代谢免疫紊乱药物靶点(endocr metab immune disord drug target)s.15:119-128,2015；eph命名委员会(eph nomenclature committee).cell.90:403-404,1997；lindberg ra etal.,mol cell biol.10(12):6316-6324,1990；davis s et al.,science.266(5186):816-819,1994)。其中，肝配蛋白受体a2(ephrin receptor a2，epha2)在正常细胞中的表达量极少，但在肝癌、前列腺癌、胰腺癌、头颈癌、胃癌、结肠癌、肺癌、宫颈癌和卵巢癌等大部分的癌细胞中则非特异性过度表达，并且促进癌症进展(carcinogenesis)、转移(metastasis)、血管形成(angiogenesis)、癌症的耐性(resistance of tumors)等。对于epha2而言，其与epha1具有约65％的蛋白质同源性，并且在小鼠肺部几乎相同的位置处被发现，并且与epha1和配体ephrin-a1一起在包括非细胞肺癌在内的许多恶行肿瘤中过度表达，并通过epha2/a1-ephrin-a1之间的相互作用，参与致癌和恶性化进程(naj ac et al.,natgenet.43:436-441,2011；finney ac et al.,circulation.136:566-582,2017)。

7、

8、[现有技术文献]

9、[专利文献]

10、专利文献1kr10-2020-0105840a

11、专利文献2kr10-2018-0121904a

12、专利文献3kr10-2018-0127344a

13、专利文献4kr10-2007-0107721a

14、专利文献5kr10-1528939b1

15、专利文献6kr10-1521668b1

16、专利文献7kr10-1636882b1

17、专利文献8kr10-2018-0134347a

18、专利文献9kr10-2157197b1

19、

20、[非专利文献]

21、非专利文献1park sh,park s,kim dy,pyo a,kimura rh,sathirachinda a,choyhe,min jj,gambhir ss,hong y.具有特异结合epha2的纤维连接蛋白域iii支架的单体拟抗体的分离和表征(isolation and characterization of本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

2.根据权利要求1所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

3.根据权利要求2所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

4.根据权利要求3所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

5.根据权利要求1所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

6.根据权利要求5所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

7.根据权利要求5所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

8.根据权利要求5所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

9.根据权利要求5所述的基于单体拟抗体的嵌合抗原受体，其特征在于，

10.一种多聚核苷酸，其特征在于，

11.一种表达载体，其特征在于，

12.一种免疫细胞，其特征在于，

13.根据权利要求12所述的免疫细胞，其特征在于，

14.一种用于预防或治疗癌症的药学组合物，其特征在于，

15.根据权利要求

16.根据权利要求15所述的用于预防或治疗癌症的药学组合物，其特征在于，

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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】