【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及烟草病害防控，尤其是涉及一种防控烟草根结线虫的生物有机肥及制备方法和应用。
技术介绍
1、烟草根结线虫是线虫中一类广泛分布于世界各地的烟草植株根系定居性内寄生物，在分类上属于线性动物门、线虫纲、根结线虫属，是世界上十大最重要的植物寄生线虫属之一。已报道的根结线虫有90多个种，其中分布普遍危害最广的主要有南方根结线虫(cm.incognita)、花生根结线虫(m.arenaria)、爪哇根结线虫(m.javanica)和北方根结线虫(m.hapla)等四大优势种群。根结线虫属寄生范围广泛，可浸染的植物超过3000种，分属114科，包括单子叶植物、双子叶植物、草本植物和木本植物灯，蔬菜、粮食、经济和果树作物、观赏植物以及杂草等都可侵染，被喻为植物的隐蔽敌害。
2、烟草根结线虫的生活周期分为卵、幼虫和成虫三个不同的阶段。受精卵经过有丝分裂发育成一龄幼虫(j1)，蜕皮后形成二龄幼虫(j2)，然后脱离卵壳进入土壤，开始侵染植物幼根；侵入根内的二龄幼虫第二次蜕皮后形成三龄幼虫(j3)，接着雌雄性生殖腺膨大伸长，植物根部出现明显“根结”；侵入植物根系的根结线虫取食于根内，阻止根部软组织原浆细胞的有丝分裂，破坏输导组织，改变寄主生理；在对寄主植物造成机械损伤的同时，分泌有毒物质，诱发其它病原物的入侵，致使植株生长迟缓，发育不良，严重时整株枯萎死亡，已被列为危害大、难防治的重要植物病原物。
3、烟草根结线虫是世界烟草生产的主要病害，以热带、亚热带、暖温带发生危害严重。烟草根结线虫在云南发生比较普遍，可与黑胫病
4、考虑到环境因素、农药残留等一系列问题，防治烟草根结线虫最理想的方法是生物防治。生物防控主要是利用杀虫微生物菌剂对地下害虫侵染或趋避，使之能够快速寄生于害虫身上或趋避使其避免植株受侵染，最后致死害虫的过程。因此，开发利用新的环境友好型措施防治烟草根结线虫已成为烟草行业迫在眉睫的任务。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种防控烟草根结线虫的生物有机肥及制备方法和应用，以解决现有技术中防控烟草根结线虫的措施存在环境不友好的问题。本专利技术提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供的一种防控烟草根结线虫的生物有机肥的制备方法，包括如下步骤：
4、制备油枯型有机肥；
5、分离纯化黑曲霉，并制备黑曲霉发酵种子液或孢子液；
6、利用查氏培养基进行一次发酵黑曲霉发酵种子液或孢子液以得到具有黑曲霉代谢产物的黑曲霉发酵液；
7、制备生物有机肥：将一次发酵后的具有黑曲霉代谢产物的黑曲霉发酵液按比例接种至所制备的油枯型有机肥混合均匀后进行二次固体发酵，得到含有黑曲霉和黑曲霉代谢产物的生物有机肥。
8、根据一种优选实施方式，所述的制备油枯型有机肥的步骤，包括：
9、将如下重量份的油菜枯饼400-500份、草炭300-400份、腐熟菌剂1-5份、石灰50-100份混合均匀，加入自来水至水分含量为45％-50％进行有机肥堆肥腐熟7-10天，得到油枯型有机肥。
10、根据一种优选实施方式，所述的分离纯化黑曲霉，并制备黑曲霉发酵种子液的步骤，包括：
11、将黑曲霉菌种在固体马铃薯葡萄糖培养基中进行分离纯化，然后再接种至液体马铃薯葡萄糖培养基中培养2-4天制备成黑曲霉发酵种子液，培养条件为：28℃恒温摇床150r/min，
12、将培养好的黑曲霉发酵种子液接入固体马铃薯葡萄糖培养基平板中，涂布均匀，在恒温培养箱中倒置培养3-5天，选择菌丝生长丰满且纯净的平板，每板用无菌水，分三次加入平板菌丝上，涂布棒轻轻刮动，用移液枪将孢子液移入灭菌三角瓶中，密封保存备用；
13、其中，所述黑曲霉菌种的分类命名为黑曲霉菌ywf-21-2114(aspergillusnigerywf-21-2114)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏登记编号为cctcc no：m20221283。
14、根据一种优选实施方式，马铃薯葡萄糖培养基的制备方法包括：
15、准确称取马铃薯200g和葡萄糖20g，水定容至1l，将马铃薯洗净切碎后煮沸30分钟，利用双层纱布过滤得到滤液，再将称取好的葡萄糖溶于滤液中，分装于三角瓶中进行灭菌后得到液体马铃薯葡萄糖培养基；
16、在上述液体马铃薯葡萄糖培养基中加入24g/l琼脂得到固体马铃薯葡萄糖培养基。
17、根据一种优选实施方式，所述的利用查氏培养基进行一次发酵黑曲霉发酵种子液以得到具有黑曲霉代谢产物的黑曲霉发酵液的步骤，包括：
18、将所制备的黑曲霉发酵种子液按比例接种至查氏培养基中培养6-8天，在温度为27℃-28℃，转速为150rpm条件下发酵培养，得到含有黑曲霉代谢产物的黑曲霉发酵液。
19、根据一种优选实施方式，所述查氏培养基的制备方法包括：
20、按照硝酸钠2.5g/l、磷酸二氢钾2g/l、氯化钾0.5g/l、七水硫酸镁0.5g/l、硫酸亚铁0.05g/l和葡萄糖35g/l的重量比进行配制，配制完成后将酸碱度调整至ph 7.2，再将其进行121℃灭菌30分钟后冷却备用。
21、根据一种优选实施方式，所述的制备生物有机肥的步骤，还包括：
22、将所得的具有黑曲霉代谢产物的黑曲霉发酵液按20％-30％的比例与所制备的发酵7-10天的油菜枯饼型有机肥混匀，放置于发酵槽中进行二次固定发酵15-30天，得到含有黑曲霉或黑曲霉代谢产物的生物有机肥。
23、第二方面，本申请还提供了一种防控烟草根结线虫的生物有机肥，所述生物有机肥是按照前述的制备方法制备而成。
24、根据一种优选实施方式，所述生物有机肥包括如下重量份的原料：油菜枯饼400-500份、草炭300-400份、腐熟菌剂1-5份、石灰50-100份和黑曲霉发酵液20-30份。
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【技术保护点】
1.一种防控烟草根结线虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备油枯型有机肥的步骤，包括：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的分离纯化黑曲霉，并制备黑曲霉发酵种子液或孢子液的步骤，包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，马铃薯葡萄糖培养基的制备方法包括：
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的利用查氏培养基进行一次发酵黑曲霉发酵种子液或孢子液以得到具有黑曲霉代谢产物的黑曲霉发酵液的步骤，包括：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述查氏培养基的制备方法包括：
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备生物有机肥的步骤，还包括：
8.一种防控烟草根结线虫的生物有机肥，其特征在于，所述生物有机肥是按照前述权利要求1至7任一项所述的制备方法制备而成。
9.根据权利要求8所述的防控烟草根结线虫的生物有机肥，其特征在于，所述生物有机肥包括如下重量份的原料：油
10.如权利要求8或9所述的生物有机肥在防控烟草根结线虫的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种防控烟草根结线虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备油枯型有机肥的步骤，包括：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的分离纯化黑曲霉，并制备黑曲霉发酵种子液或孢子液的步骤，包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，马铃薯葡萄糖培养基的制备方法包括：
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的利用查氏培养基进行一次发酵黑曲霉发酵种子液或孢子液以得到具有黑曲霉代谢产物的黑曲霉发酵液的步骤，包括：
6.根据权利要求5所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈毅，王皓，关琦，毛明林，李诚，虞沁，闫鼎，杨润霞，叶敏，赵崇钧，彭嘉诚，耿朝荣，
申请(专利权)人：上海烟草集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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