一种雷帕霉素诱导CD9蛋白介导的外泌体主动包装蛋白的方法和应用技术

本发明专利技术涉及外泌体主动装载与基因递送技术领域。本发明专利技术提供了一种雷帕霉素诱导CD9蛋白介导的外泌体主动包装蛋白的方法和应用。本发明专利技术利用雷帕霉素诱导FKBP/FRB蛋白二聚体形成的原理，设计了一种化学分子诱导的类病毒装载系统。将目标蛋白与FKBP进行融合，同时将FRB蛋白结构域插入外泌体表面蛋白CD9的两端，这样可以在高浓度的化学分子雷帕霉素诱导下，外泌体可以主动包装目标蛋白。在外泌体侵染靶向细胞后，FKBP/FRB二聚体会自然解离，自由释放目标蛋白POI。目标蛋白可以是GFP等荧光蛋白，也可以是基因编辑器Cas9，Cas12/Cas13等任何蛋白编码序列，在靶向细胞当中行使相应的功能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及外泌体主动装载与基因递送，尤其涉及一种雷帕霉素诱导cd9蛋白介导的外泌体主动包装蛋白的方法和应用。

技术介绍

1、细胞外囊泡(evs)，或者外泌体，是细胞在生理条件下或在生物线索下分泌的脂质双层封闭的膜性结构。ev由不同大小和细胞膜亚细胞来源的异质群体组成。由于关于ev亚型的特异性标记尚未达成共识，一般定义“外泌体”是尺寸范围为40-160nm的小ev，假定其膜来源于内吞体途径。通过外泌体，供体细胞可以将外源性物质，如蛋白质、mrna、micrornas(mirnas)和脂质，转移到受体细胞。因此，这些天然装备的纳米载体已被用于药物传递。外泌体也可以穿透组织，扩散到血液中，甚至穿过血脑屏障(bbb)。快速发展的外泌体技术为整合诊断和疾病治疗提供了强大的工具。外泌体治疗的未来包括将靶向外泌体与抗癌药物和高精度癌症诊断探针相结合，以构建用于体内跟踪、预后监测和治疗的多功能平台。

2、外泌体的基因工程是赋予外泌体主动包装能力的一种方便的方法。首先，配体与在外泌体表面表达的跨膜蛋白融合。随后，转染了编码融合蛋白的质粒的供体细胞分泌在其表面本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.雷帕霉素在诱导CD9蛋白介导的外泌体主动包装蛋白中的应用。

2.一种雷帕霉素诱导CD9蛋白介导的外泌体主动包装蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中所述的培养条件独立的为：35～39℃、4～6％CO2；培养时所用的培养基为含有8～12％胎牛血清、青霉素80～120U/ml、链霉素80～120μg/ml的DMEM完全培养基，所述培养时每2～3天更换一次培养基。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述细胞的种类为293T细胞、鼠卵巢细胞CHO或人Hela细胞等细胞系...

【技术特征摘要】

1.雷帕霉素在诱导cd9蛋白介导的外泌体主动包装蛋白中的应用。

2.一种雷帕霉素诱导cd9蛋白介导的外泌体主动包装蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中所述的培养条件独立的为：35～39℃、4～6％co2；培养时所用的培养基为含有8～12％胎牛血清、青霉素80～120u/ml、链霉素80～120μg/ml的dmem完全培养基，所述培养时每2～3天更换一次培养基。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述细胞的种类为293t细胞、鼠卵巢细胞cho或人hela细胞等细胞系，所述质粒转染时所用的含有外泌体的转染体系包括如下重量份的组分：dmem培养基730～770份、待包装质粒8～12份、外泌体包装质粒2～3份、外膜糖蛋白表达质粒2～3份、转染试剂20～28份，所述外膜糖蛋白表达质粒为pmd2.g，所述转染试剂为lipo8000，所述质粒转染时细胞和含有外泌体的转染体系的用量比为1.8～2.2×106个：780～800μl...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭熙志，王少姣，
申请(专利权)人：安可来重庆生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：