【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，尤其涉及一种从普洱茶提取的多糖及其缓解化疗副作用的应用。
技术介绍
1、和手术、放疗一起并称癌症三大治疗手段的化疗，是治疗癌症最有效的手段之一，环磷酰胺就是典型的化疗用药之一。进行化学治疗的目的包括：抑制癌细胞成长、杀死癌细胞、缓解癌症的不适症状，治疗期间也会根据情况搭配其他治疗方式。调查表明，伴随着化疗同时而发生的化疗并发症逐渐成为困扰，因化疗药物主要是抑制骨髓的造血功能，化疗过程中最常发生的并发症就是骨髓造血功能的破坏，其中粒细胞减少症也尤为明显，粒细胞减少症表现为粒细胞减少性发热，是在粒细胞持续、严重的减少时发生的发热症状。
2、随着人们生活水平的不断提高，以天然产物为主要成分的各种保健食品也悄然兴起。植物多糖是一种广泛存在于高等植物中的天然高分子复合物。研究表明，多糖不仅是构成细胞的重要物质，许多多糖还有良好的生物活性功能。茶多糖(tea polysaccharides，tps)是植物多糖中的一大类，是茶叶中一种非常重要的大分子活性物质，在自然状态下，茶多糖主要以糖缀合物的形式存在，即各种不同的单糖聚合后，又与蛋白质、核酸、糖醛酸、无机元素等相结合形成大型的复合物质，茶多糖与广义的多糖一样也均被证实具有抗氧化、增强免疫、降血糖、抗癌抗菌等生物活性，而免疫活性较强的酸性多糖，被发现大量存在于果胶当中，而果胶主要存在于植物的初生细胞壁和细胞之间，是细胞壁的基质多糖。
3、普洱茶作为茶叶中的一种，因其特殊的风味口感及对身体有益的保健功能而受到大众的追捧，因此对普洱茶细胞壁多糖功能的研
技术实现思路
1、有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是现有提取茶多糖的技术具有纯化、分离等复杂工艺，且不是细胞壁多糖，无法应用于粒细胞减少症上，现有对普洱茶多糖的提取技术中，往往集中于水醇提取，这种技术方法较为复杂，且具有分离纯化等复杂的工艺，并且使用现有技术提取到的普洱茶多糖中酸性多糖含量较少。本专利技术提供了一种从普洱茶提取的多糖及其缓解化疗副作用的应用，以乙二胺四乙酸溶液萃取到的茶多糖在影响细胞释放g-csf因子中表现出极强的促进效果，在进一步的研究中，发现该普洱茶多糖具有显著的缓解化疗用药后所致粒细胞减少症的效果，其给药浓度在50mg/kg时，患粒细胞减少症的小鼠中性粒细胞的数量有了显著的提升，缓解化疗药所致粒细胞减少症作用明显，且该茶多糖在免疫印迹实验中显示明显上调socs1蛋白的表达，该蛋白可负反馈调节在肿瘤等疾病中异常激活的jak/stat信号通路。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，包括以下步骤：
3、步骤1、将普洱茶粉碎得到普洱茶干粉；
4、步骤2、将普洱茶干粉依次与水和醇溶液混合，去除普洱茶干粉中的水溶性多糖和蛋白质，过滤并收集得到第一滤渣；
5、步骤3、将第一滤渣与淀粉酶混合，去除第一滤渣中的淀粉，过滤并收集得到第二滤渣；
6、步骤4、在ph为6-7的条件下，将第二滤渣与乙二胺四乙酸溶液混合，改变普洱茶细胞中细胞壁的交联结构，过滤收集获得第一滤液和第三滤渣；
7、步骤5、将第三滤渣与饱和碳酸钠溶液混合，震荡萃取使其充分混合，过滤收集得到第四滤渣和第二滤液；
8、步骤6、将第四滤渣与1m koh碱性溶液混合，震荡萃取使其充分混合，过滤收集得到第五滤渣和第三滤液；
9、步骤7、将第五滤渣与4m koh碱性溶液混合，震荡萃取使其充分混合，过滤收集得到第六滤渣和第四滤液；
10、步骤8、将第一、二、三和第四滤液进行透析，收集透过液并冷冻干燥后得到普洱茶细胞壁多糖。
11、进一步地，步骤2、将普洱茶干粉依次与水和醇溶液混合，去除普洱茶干粉中的水溶性多糖和蛋白质，过滤并收集得到第一滤渣，包括以下步骤：
12、步骤2.1、在36-37℃下，将普洱茶干粉与蒸馏水混合1-1.5h，过滤并收集得到水提滤渣；
13、步骤2.2、将水提滤渣与70％的乙醇溶液混合12-16h，过滤并收集醇提滤渣；
14、步骤2.3、使用无水乙醇对醇提滤渣进行洗涤、干燥，得到第一滤渣。
15、进一步地，步骤3、将第一滤渣与淀粉酶混合，去除第一滤渣中的淀粉，过滤并收集得到第二滤渣，具体包括：
16、将淀粉酶溶解在tris-马来酸缓冲液中，将步骤2得到的第一滤渣与溶解有淀粉酶的tris-马来酸缓冲液混合，在37-40℃下反应2-4h，反应结束后，过滤并收集得到第二滤渣。
17、进一步地，第二滤渣与乙二胺四乙酸溶液的质量比为1：(20-25)；第三滤渣与饱和碳酸钠溶液的质量比为1：(20-25)；第四滤渣与1m koh碱性溶液的质量比为1：(20-25)；第五滤渣与4m koh碱性溶液的质量比为1：(20-25)。
18、进一步地，第二滤渣与乙二胺四乙酸溶液的混合时间为10-14小时；第三滤渣与饱和碳酸钠溶液的混合时间为10-14小时；第四滤渣与1m koh碱性溶液的混合时间为10-14小时；第五滤渣与4m koh碱性溶液的混合时间为10-14小时。
19、进一步地，将第一、二、三和第四滤液进行透析，收集透过液并冷冻干燥后得到普洱茶细胞壁多糖，具体包括以下步骤：
20、步骤8.1、将第一、二、三和第四滤液进行透析44-48小时，透析膜的分子量为8000kda，收集透过液；
21、步骤8.2、在-70℃--80℃下，将透过液冻结6-12h，随后将冷冻后的透过液放入真空冷冻干燥仓中，冷阱温度为-40℃±2℃，真空度为-30kpa--60kpa，得到普洱茶细胞壁多糖。
22、本专利技术又提供了一种细胞壁多糖在缓解化疗药所致粒细胞减少症方面的应用，其特征在于，对于化疗用药后所致的粒细胞减少症以及相应的发热、感染等炎症具有缓解效果。
23、进一步地，化疗药为环磷酰。
24、进一步地，包括以下步骤：步骤1、使用上述提取所得普洱茶细胞壁多糖为样品，刺激raw264.7细胞，检测免疫活性因子的释放量；
25、步骤2、使用上述提取所得普洱茶细胞壁多糖为样品，刺激raw264.7细胞后提取细胞总蛋白，利用蛋白免疫印迹法检测socs1蛋白的表达量；
26、步骤3、使用上述提取所得普洱茶细胞壁多糖为样品，治疗粒细胞减少模型小鼠balb/c，评估模型小鼠恢复情况。
27、进一步地，普洱茶细胞壁多糖的浓度为50mg/kg。
28、技术效果
29、本专利技术的一种从普洱茶提取的多糖及其缓解化疗副作用的应用，首先除去普洱茶中水溶性多糖和蛋白质等大分子物质；其次，以一定量的淀粉酶对非水溶性残渣进行进一步处理，以去除淀粉；接着，采用不同溶液梯度萃取以提取酸性多糖，在对提取到的不同普洱茶多糖测试免疫调节活性时，其中以乙二胺四乙酸溶液萃取到的茶多糖在影响细胞释放本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，步骤2、将所述普洱茶干粉依次与水和醇溶液混合，去除所述普洱茶干粉中的水溶性多糖和蛋白质，过滤并收集得到第一滤渣，包括以下步骤：
3.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，步骤3、将所述第一滤渣与淀粉酶混合，去除所述第一滤渣中的淀粉，过滤并收集得到第二滤渣，具体包括：
4.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，所述第二滤渣与乙二胺四乙酸溶液的质量比为1：(20-25)；所述第三滤渣与所述饱和碳酸钠溶液的质量比为1：(20-25)；所述第四滤渣与所述1M KOH碱性溶液的质量比为1：(20-25)；所述第五滤渣与所述4M KOH碱性溶液的质量比为1：(20-25)。
5.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，所述第二滤渣与乙二胺四乙酸溶液的混合时间为10-14小时；所述第三滤渣与所述饱和碳酸钠溶液的混合时间为10-14
6.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，将所述第一、二、三和第四滤液进行透析，收集透过液并冷冻干燥后得到所述普洱茶细胞壁多糖，具体包括以下步骤：
7.一种如权利要求1-6任一所述的细胞壁多糖在缓解化疗药所致粒细胞减少症方面的应用，其特征在于，对于化疗用药后所致的粒细胞减少症以及相应的发热、感染等炎症具有缓解效果。
8.如权利要求7所述的一种细胞壁多糖在缓解化疗药所致粒细胞减少症方面的应用，其特征在于，所述化疗药为环磷酰。
9.如权利要求7所述的一种细胞壁多糖在缓解化疗药所致粒细胞减少症方面的应用，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、使用上述提取所得普洱茶细胞壁多糖为样品，刺激RAW264.7细胞，检测免疫活性因子的释放量；
10.如权利要求7所述的一种细胞壁多糖在缓解化疗药所致粒细胞减少症方面的应用，其特征在于，所述普洱茶细胞壁多糖的浓度为50mg/kg。
...【技术特征摘要】
1.一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，步骤2、将所述普洱茶干粉依次与水和醇溶液混合，去除所述普洱茶干粉中的水溶性多糖和蛋白质，过滤并收集得到第一滤渣，包括以下步骤：
3.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，步骤3、将所述第一滤渣与淀粉酶混合，去除所述第一滤渣中的淀粉，过滤并收集得到第二滤渣，具体包括：
4.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，所述第二滤渣与乙二胺四乙酸溶液的质量比为1：(20-25)；所述第三滤渣与所述饱和碳酸钠溶液的质量比为1：(20-25)；所述第四滤渣与所述1m koh碱性溶液的质量比为1：(20-25)；所述第五滤渣与所述4m koh碱性溶液的质量比为1：(20-25)。
5.如权利要求1所述的一种从普洱茶中提取细胞壁多糖的方法，其特征在于，所述第二滤渣与乙二胺四乙酸溶液的混合时间为10-14小时；所述第三滤渣与所述饱和碳酸钠溶液的混合时间为10-14...
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