【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体而言，涉及一种用超高效液相色谱- 质谱联用仪测定替格瑞洛中n-甲基-n-亚硝基丁酸(以下简称nmba)和 n-甲基-n-亚硝基对甲苯磺酰胺(以下简称nmnp)的方法。此方法能较好的检测原料药及制剂中痕量nmba和nmnp含量，为患者的健康安全用药提供保障。
技术介绍
1、替格瑞洛，化学名ticagrelor，为化学分类环戊基三唑嘧啶(cptp) 的一员，cptp是一种选择性二磷酸腺苷(adp)受体拮抗剂，作用于 p2y12adp受体，以抑制adp介导的血小板活化和聚集，与噻吩并吡啶类药物(如氯吡格雷)的作用机制相似。但不同的是，替格瑞洛与血小板 p2y12 adp受体之间的相互作用具有可逆性，没有构象改变和信号传递，并且在停药后血液中的血小板功能也随之快速恢复。对于药品而言，其主要成分的纯度是药品药效的决定性因素，因此制备该药物的后续检测是十分重要的。替格瑞洛，化学名为(1s，2s，3r，5s)-3-[7-{[(1r，2s)-2-(3, 4-二氟苯)环丙基]氨基}-5-(丙基硫氧嘧啶)-3h-[1,2,3]-三唑磷[4,5-d]嘧啶 -3-基]-5-(2-羟乙基)环戊烷-1,2-二醇，分子式：c23h28f2n6o4s，其结构式如下：
2、
3、替格瑞洛在制备过程中可能残留nmba和nmnp。其结构如下：
4、
5、nmba和nmnp属于亚硝胺类杂质。含亚硝胺结构的化合物被 ich(人用药物注册技术要求国际协调会)、fda(美国食品药品监督管理局) 和eme
6、近年来，随着国内外药政部门相关法规的逐步健全，亚硝胺杂质研究已经成为保证产品质量的关键之一。目前，usp、ep、jp和中国药典及相关文献、专利均未见替格瑞洛中亚硝胺杂质检测的报告。
7、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种超高效液相色谱-质谱联用仪测定替格瑞洛中潜在的亚硝胺杂质nmba和nmnp的方法，该方法包括：
2、(1)色谱条件设定：以十八烷基键合硅胶为固定相，柱温为38～42℃，洗脱液由甲酸水溶液和甲醇溶液构成，以0.05％～0.2％甲酸水溶液为流动相a，以甲醇溶液为流动相b，梯度洗脱，通过高分辨质谱进行定量测定，流速为0.36～0.44ml/min，样品盘温度为10～20℃，进样体积为5～50μl；
3、(2)样品溶液配置：称取适量的供试品至离心管中，加入适量的纯化水，压盖密封、充分振摇10min后，离心，取上清液，即得样品溶液；
4、(3)分离分析：将样品溶液注入到超高效液相色谱仪-质谱联用仪，通过超高效液相色谱仪液相分离，高分辨质谱分段检测，来测定nmba 和nmnp，质谱用esi离子源，mrm正离子采集模式；
5、nmba前体离子为147.070(nmba+[h+])，定量离子为117.0785，定性离子为87.0440，定量离子和定性离子之间的比值为0～60％，nmba 定量离子和定性离子的接口电压为0.5～4.0kv；ce电压1-60v；
6、nmnp前体离子为186.058(nmnp在离子源内裂解为 nmnp-1+[h+])，定量离子为91.0538，定性离子为65.0379，定量离子和定性离子之间的比值为0～60％，nmnp定量离子和定性离子的接口电压为 0.5～4.0kv，ce电压1-60v。
7、其中固定相十八烷基键合硅胶色谱柱的粒径为2um，长度为100mm，内径为2.1mm。
8、优选的步骤(1)色谱柱柱温为40℃。
9、优选的步骤(1)流动相a的甲酸水溶液中甲酸体积占比0.10％。
10、优选的步骤(1)流动相流速为0.40ml/min。
11、优选的步骤(1)样品盘温度为15℃。
12、优选的步骤(1)进样体积为10μl。
13、优选的步骤(1)洗脱梯度为：0-0.01分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为90％，0.01-10分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为90％逐步递减到5％，10-12分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为5％，12-12.01 分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为5％逐步递增到90％，12.01-15分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为90％。
14、 时间/min 流动相a/％ 流动相b/％ 0.01 90 10 10.00 5 95 12.00 5 95 12.01 90 10 15.00 90 10
15、所述方法分离nmba n-n键存在顺反异构体，在nmba定量分析中，需对两个峰合积分合并计算峰面积。
16、优选的步骤(3)中nmba定量离子和定性离子的接口电压均为0.5kv； ce电压定量离子为12v，定性离子为7v。
17、优选的步骤(3)nmnp定量离子和定性离子的接口电压均为4.0kv， ce电压定量离子优选23v，定性离子优选40v。
18、
19、其中步骤(3)质谱采用分段检测模式，nmba扫描时间为1.00～3.00min；mnp扫描时间为7.00～9.00min。
20、
21、本专利技术具有以下有益效果：
22、1.专利技术人通过对杂质nmba、nmnp和替格瑞洛的结构分析，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种替格瑞洛中潜在基因毒性杂质NMBA和NMNP含量的分析测定方法，其特征在于直接用超高效液相色谱-质谱联用仪测定替格瑞洛中痕量的NMBA和NMNP的含量，所述分析测定方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述十八烷基键合硅胶为固定相色谱柱的粒径为2um，长度为100mm，内径为2.1mm。
3.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)色谱柱柱温为40℃。
4.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)流动相A的甲酸水溶液中甲酸体积占比0.10％，流动相流速为0.40ml/min。
5.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)样品盘温度为15℃。
6.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)进样体积为10μl。
7.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)洗脱梯度为：0-0.01分钟流动相A占洗脱液的体积百分比为90％，0.01-10分钟流动相A占洗脱液的体积百分比为90％逐步递减到5
8.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(3)中NMBA定量离子和定性离子的接口电压均为0.5kv；CE电压定量离子为12v，定性离子为7v。
9.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(3)NMNP定量离子和定性离子的接口电压均为4.0kv，CE电压定量离子优选23v，定性离子优选40v。
10.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(3)质谱采用分段检测模式，NMBA扫描时间为1.00～3.00min；NMNP扫描时间为7.00～9.00min。
...【技术特征摘要】
1.一种替格瑞洛中潜在基因毒性杂质nmba和nmnp含量的分析测定方法，其特征在于直接用超高效液相色谱-质谱联用仪测定替格瑞洛中痕量的nmba和nmnp的含量，所述分析测定方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述十八烷基键合硅胶为固定相色谱柱的粒径为2um，长度为100mm，内径为2.1mm。
3.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)色谱柱柱温为40℃。
4.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)流动相a的甲酸水溶液中甲酸体积占比0.10％，流动相流速为0.40ml/min。
5.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)样品盘温度为15℃。
6.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步骤(1)进样体积为10μl。
7.根据权利要求1所述的分析测定方法，其特征在于，步...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄冰，程涛，吴沉，刘荣，孙光祥，王兵，
申请(专利权)人：常州制药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：
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