【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请提供了作为胃肠道病症，特别是炎症性肠病的治疗方式的wnt信号调制剂。
技术介绍
1、wnt蛋白形成了一个高度保守的分泌信号传导分子家族，其在胚胎发生期间调节细胞间的相互作用。wnt基因和wnt信号传导也与癌症有关。对wnt作用机制的深入了解来自数个系统：果蝇(drosophila)和秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans)的遗传学；细胞培养中的生物化学和爪蟾(xenopus)胚胎中异位基因的表达。小鼠中的许多wnt基因发生了突变，导致了非常特定的发育缺陷。据目前所理解，wnt蛋白与细胞表面上的卷曲蛋白(frizzled)家族受体结合。通过数种细胞质中继组分，信号被转导到β-连环蛋白，然后其进入细胞核并与tcf形成复合物，以激活wnt靶基因的转录。wnt蛋白的表达各不相同，但通常与发育过程有关，例如在胚胎和胎组织中。
2、功能冗余和条件失活策略的必要性阻碍了对成年生物体中wnt蛋白生理功能的探索。dickkopf-1(dkk1)最近被鉴定为一个有效拮抗wnt信号传导的分泌蛋白家族的创始成员(参见glinka et al.(1998)nature 391:357-62；fedi et al.(1999)j biol chem 274:19465-72；以及bafico et al.(2001)nat cell biol 3:683-6)。dkk1与wnt共受体lrp5和lrp6，以及跨膜蛋白kreman结合，由此产生的三元复合物通过缺乏功能性卷曲蛋白/lrp6wnt受体复合物而产生lrp6的快速
3、敲除tcf基因座的转基因小鼠在胚胎发生后期表现出小肠中增殖性干细胞区室的丧失。然而，这种敲除是致命的，并因此还没有在成年中进行研究。在允许分析成年的嵌合转基因小鼠中，组成型活性nh2截短的β-连环蛋白的表达刺激小肠隐窝的增殖，尽管nh2截短的β-连环蛋白或lef-1/β-连环蛋白融合也诱导增加的隐窝细胞凋亡。由于多种因素调节β-连环蛋白/lef/tcf依赖性转录，包括非卷曲蛋白gpcrs和pten/pi-3-激酶，肠干细胞缺陷的原因尚不清楚。
4、成年肠上皮的特征是在5-7天的隐窝-绒毛转运时间期间发生的通过细胞分裂、分化、迁移和脱落的立体型循环连续替换上皮细胞。成年肠道干细胞生态位中调节增殖的假定生长因子尚未完全确定，尽管研究涉及增殖性隐窝区室中β-连环蛋白/lef/tcf信号传导的细胞内在作用。
5、许多病理状况会影响肠道细胞。炎症性肠病(ibd)可累及小肠和大肠之一或两者。克罗恩病和溃疡性结肠炎是最著名的ibd形式，并且两者都落入“特发性”炎症性肠病类别内，因为它们的病因尚不清楚。“活动性”ibd的特点是急性炎症。“慢性”ibd的特征是隐窝变形和瘢痕形成的结构变化。隐窝脓肿可发生在许多形式的ibd中。
6、克罗恩病可累及gi道的任何部分，但最常累及远端小肠和结肠。炎症通常是透壁性的，并且可以产生从淋巴滤泡上的小溃疡(阿弗他样溃疡)到深裂隙样溃疡，再到透壁瘢痕和慢性炎症的任何状况。三分之一的病例有肉芽肿，并且诸如淋巴结、肝脏和关节等结肠外部位也可能有肉芽肿。透壁炎症导致在肠环和其他结构之间发展出瘘管。炎症通常是节段性的，未受累的肠道与受累的肠道区域分离。病因尚不清楚，尽管已经提出了感染和免疫机制。
7、溃疡性结肠炎(uc)涉及结肠，其是一种以远端为主的弥漫性粘膜疾病。事实上总是涉及直肠，并且另外的结肠部分可能涉及以连续模式从直肠向近端延伸。uc的病因尚不清楚。患有长期uc的患者发展结肠癌的风险增加。uc患者也有发展肝脏疾病的风险，包括硬化性胆管炎和胆管癌。目前，临床上的所有治疗方法和大多数正在开发的uc治疗方法都专注于减少炎症，而不是直接诱导上皮愈合，这强调了对促进上皮修复的治疗剂的需求尚未得到满足。
8、对于临床目的，开发用于调节肠上皮生长的药物学试剂引起极大的兴趣。然而，wnt激动剂作为药理学试剂的探索部分受到了它们不是天然可溶、可扩散的分子这一事实的阻碍。本公开提供了使用改造的可溶性wnt激动剂，通过特定fzd受体来特异性调节wnt信号传导的方法和组合物。例如，这种改造的wnt激动剂可以实现上皮特异性的瞬时wnt信号传导激活，其驱动强大的上皮再生和屏障恢复，最终导致炎症减少和结肠炎的改善。
技术实现思路
1、在不同的方面，本公开提供了改造的wnt激动剂和相关的药物组合物及使用方法。
2、在一方面，本公开包括改造的wnt激动剂，其包含：(a)结合一种或多种fzd的一个或多个结合域；以及(b)结合lrp5、lrp6或lrp5和lrp6的一个或多个结合域，其中所述改造的wnt激动剂包含与seq id nos:1-18中的任一项具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的多肽序列，或者seq id no:s 1-25、图2、图6、表1或表3中任一项中公开的多肽序列，或者以上的功能片段或变体，例如，以上的结合片段，例如，vhh结构域、重链的可变结构域或轻链的可变结构域。在某些实施方案中，结合一种或多种fzd的一个或多个结合域结合：i)fzd5；ii)fzd 8；iii)fzd 1；iv)fzd 2；v)fzd 7；vi)fzd 5和fzd 8；vii)fzd1、fzd 2和fzd 7；viii)fzd 1、fzd 2、fzd 7、fzd 5和fzd 8；ix)fzd4；x)fzd9；或者xi)fzd10。在某些实施方案中，改造的wnt激动剂包含与seq id nos:1-18或19-25中任一项具有至少90％、至少95％,％、至少98％或至少99％序列同一性的一个或多个(例如，两个)多肽序列，或者表3中公开的序列。在某些实施方案中，改造的wnt激动剂包含：(a)与seq idno:1具有至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列和与seq id no:2具有至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列；(b)与seq id no:3具有至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列和与seq id no:4具有至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列；(c)与seq id no:5具有至少80％、至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列和与seq idno:6具有至少80％、至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列；(d)与seq id no:7具有至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列和与seq id no:8具有至少90％或至少95％同源性的一个或多个(例如，两个)多肽序列；(e)与本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.改造的WNT激动剂，其包含：
2.如权利要求1所述的改造的WNT激动剂，其包含：
3.如权利要求2所述的改造的WNT激动剂，其包含：
4.如权利要求1-3中任一项所述的改造的WNT激动剂，其中所述结合LRP5、LRP6或LRP5和LRP6两者的一个或多个结合域被人源化。
5.如权利要求1-4中任一项所述的改造的WNT激动剂，其包含修饰的Fc结构域，其中所述修饰的Fc结构域包含LALAPG或N297G修饰。
6.药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的改造的WNT激动剂以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
7.治疗对象中易于通过增加的WNT通路信号传导进行治疗的疾病或病症的方法，包括向所述对象给予权利要求1-5中任一项所述的改造的WNT激动剂或权利要求6所述的药物组合物。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述疾病或病症是胃肠道病症。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述胃肠道病症是炎症性肠病。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述炎症性肠病选自：克罗恩病(CD
11.如权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述改造的WNT激动剂经口或肠胃外给药。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述改造的WNT激动剂经静脉内、腹膜内或皮下给药。
13.增加细胞中的WNT信号传导的方法，其包括使所述细胞与权利要求1-5中任一项所述的改造的WNT激动剂接触。
14.调节患有胃肠道病症的对象中的一个或多个组织或细胞中的WNT通路分子表达的方法，包括向所述对象给予权利要求1-5中任一项所述的改造的WNT激动剂或权利要求6所述的药物组合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述WNT通路分子是表4、5、6、7、8和11中任一项中列出的基因或蛋白质。
16.如权利要求14所述的方法，其中所述WNT通路分子选自：谷胱甘肽过氧化物酶2(Gpx2)、干扰素调节因子8(Irf8)、Rel、RelA、RelB、RNA酶4、血管生成素、Gsta3、Rnf43、Axin2、Ki67、闭合蛋白，或者表7中列出的任何基因或蛋白质。
17.如权利要求14-16中任一项所述的方法，其中在给药后，所述对象的一个或多个组织和/或细胞中所述WNT通路分子的表达增加至少20％、至少50％、至少80％、至少两倍、至少五倍、至少10倍或至少20倍，或者减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
18.如权利要求14-17中任一项所述的方法，其中所述组织是上皮组织和/或所述细胞是胃肠上皮细胞，任选地是：干细胞、TA1、TA2、杯状细胞祖细胞、损伤诱导的替代祖细胞(Alt祖细胞)、损伤诱导的替代肠细胞(Alt肠细胞)、肠细胞前体(EnteroPrecur)、杯状细胞祖细胞(杯状_PC)、杯状细胞1、杯状细胞2或肠内分泌细胞。
19.刺激患有胃肠道病症的对象中的组织修复的方法，其包括向所述对象给予权利要求1-5中任一项所述的改造的WNT激动剂或权利要求6所述的药物组合物。
20.如权利要求19所述的方法，其中通过调节选自以下的至少一种WNT通路分子来刺激所述组织修复：与细胞周期相关的基因、与干细胞和祖细胞更新和分化相关的基因、与上皮细胞修复和屏障恢复相关的基因和/或表4、5、6、7、8和11中任一项中列出的任何基因。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述与细胞周期相关的基因选自表4中提供的那些基因，或者Aurka、Aurkb、Ccna2、Ccnb1、Ccnb2、Ccnd2、Ccne1、Cdc45、Cdk1、Cdkn3、Cenpm、Cenpp、Cenpq、Cenpu、Hells、Mcm4、Mcm5、Mcm6、Mcm7、Myc、Pbk、Plk1、Rrm1和Rrm2。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述与干细胞和祖细胞更新和分化相关的基因选自表8中提供的那些基因，以及Axin2、Id1、Hmga2、Nhp2、Foxq1、Hes6和Adh1。
23.如权利要求20所述的方法，其中所述与上皮细胞修复和屏障恢复相关的基因选自表6中提供的那些基因，或者Apex1、Agr2、B3gnt7、Fcgbp、Muc2、Muc3、Tff3、Zg16和Sprr2a3。
24.如权利要求20-23中任一项所述的方法，其中在给予所述改造的Wnt激动剂后，所述对象的一个或多个组织和/或细胞中所述WNT通路分子的表达增加至少20％、至少...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.改造的wnt激动剂，其包含：
2.如权利要求1所述的改造的wnt激动剂，其包含：
3.如权利要求2所述的改造的wnt激动剂，其包含：
4.如权利要求1-3中任一项所述的改造的wnt激动剂，其中所述结合lrp5、lrp6或lrp5和lrp6两者的一个或多个结合域被人源化。
5.如权利要求1-4中任一项所述的改造的wnt激动剂，其包含修饰的fc结构域，其中所述修饰的fc结构域包含lalapg或n297g修饰。
6.药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的改造的wnt激动剂以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
7.治疗对象中易于通过增加的wnt通路信号传导进行治疗的疾病或病症的方法，包括向所述对象给予权利要求1-5中任一项所述的改造的wnt激动剂或权利要求6所述的药物组合物。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述疾病或病症是胃肠道病症。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述胃肠道病症是炎症性肠病。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述炎症性肠病选自：克罗恩病(cd)、伴有瘘管形成的cd和溃疡性结肠炎(uc)。
11.如权利要求7-10中任一项所述的方法，其中所述改造的wnt激动剂经口或肠胃外给药。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述改造的wnt激动剂经静脉内、腹膜内或皮下给药。
13.增加细胞中的wnt信号传导的方法，其包括使所述细胞与权利要求1-5中任一项所述的改造的wnt激动剂接触。
14.调节患有胃肠道病症的对象中的一个或多个组织或细胞中的wnt通路分子表达的方法，包括向所述对象给予权利要求1-5中任一项所述的改造的wnt激动剂或权利要求6所述的药物组合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述wnt通路分子是表4、5、6、7、8和11中任一项中列出的基因或蛋白质。
16.如权利要求14所述的方法，其中所述wnt通路分子选自：谷胱甘肽过氧化物酶2(gpx2)、干扰素调节因子8(irf8)、rel、rela、relb、rna酶4、血管生成素、gsta3、rnf43、axin2、ki67、闭合蛋白，或者表7中列出的任何基因或蛋白质。
17.如权利要求14-16中任一项所述的方法，其中在给药后，所述对象的一个或多个组织和/或细胞中所述wnt通路分子的表达增加至少20％、至少50％、至少80％、至少两倍、至少五倍、至少10倍或至少20倍，或者减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
18.如权利要求14-17中任一项所述的方法，其中所述组织是上皮组织和/或所述细胞是胃肠上皮细胞，任选地是：干细胞、ta1、ta2、杯状细胞祖细胞、损伤诱导的替代祖细胞(alt祖细胞)、损伤诱导的替代肠细胞(alt肠细胞)、肠细胞前体(enteroprecur)、杯状细胞祖细胞(杯状_pc)、杯状细胞1、杯状细胞2或肠内分泌细胞。
19.刺激患有胃肠道病症的对象中的组织修复的方法，其包括向所述对象给予权利要求1-5中任一项所述的改造的wnt激动剂或权利要求6所述的药物组合物。
20.如权利要求19所述的方法，其中通过调节选自以下的至少一种wnt通路分子来刺激所述组织修复：与细胞周期相关的基因、与干细胞和祖细胞更新和分化相关的基因、与上皮细胞修复和屏障恢复相关的基因和/或表4、5、6、7、8和11中任一项中列出的任何基因。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述与细胞周期相关的基因选自表4中提供的那些基因，或者aurka、aurkb、ccna2、ccnb1、ccnb2、ccnd2、ccne1、cdc45、cdk1、cdkn3、cenpm、cenpp、cenpq、cenpu、hells、mcm4、mcm5、mcm6、mcm7、myc、pbk、plk1、rrm1和rrm2。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述与干细胞和祖细胞更新和分化相关的基因选自表8中提供的那些基因，以及axin2、id1、hmga2、nhp2、foxq1、hes6和adh1。
23.如权利要求20所述的方法，其中所述与上皮细胞修复和屏障恢复相关的基因选自表6中提供的那些基因，或者apex1、agr2、b3gnt7、fcgbp、muc2、muc3、tff3、zg16和sprr2a3。
24.如权利要求20-23中任一项所述的方法，其中在给予所述改造的wnt激动剂后，所述对象的一个或多个组织和/或细胞中所述wnt通路分子的表达增加至少20％、至少50％、至少80％、至少两倍、至少五倍、至少10倍或至少20倍，或者减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
25.减少患有胃肠道病症的对象中的炎症的方法，包括向所述对象给予权利要求1-5中任一项所述的改造的wnt激动剂或权利要求6所述的药物组合物。
26.如权利要求19所述的方法，其中通过调节选自以下的至少一种分子来减少所述炎症：表5中提供的基因，或者adamdec1、atf3、gpx2、gsta3、gstm1、gstm3、gdf15、ihh、il18、lyz2、nox1、reg4、sycn、selenbp1、tgfbr2和timp3。
27.如权利要求25或权利要求26所述的方法，其中胃肠组织，任选地上皮组织中的所述炎症减少。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述胃肠组织包括胃肠上皮细胞，任选地包括：干细胞、ta1、ta2、杯状细胞祖细胞、损伤诱导的替代祖细胞(alt祖细胞)、损伤诱导的替代肠细胞(alt肠细胞)、肠细胞前体(enteroprecur)、杯状细胞祖细胞(杯状...
【专利技术属性】
技术研发人员：拉塞尔·弗莱彻，李圣真，李阳，鲁成钢，帕塔萨拉蒂·桑帕库玛，格特鲁伊·范霍夫，叶文琛，谢力勤，伦纳德·普雷斯塔，
申请(专利权)人：瑟罗泽恩奥普瑞汀公司，
类型：发明
国别省市：
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