本发明专利技术属于动物药领域，公开了兽用卡介菌多糖核酸脂质组合物及其冻干制剂。该脂质组合物的配方含有以下重量比的原料：卡介菌多糖核酸１份，磷脂１０－５５份，胆固醇１－１０份，泊洛沙姆１８８?０－５份。本发明专利技术制备的脂质组合物安全性好，稳定性强，包封率好，疗效提高，本发明专利技术的方法适合工业化大生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物药领域，涉及兽用卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)脂质组合物及其冻干制剂，以及制备方法。技术背景卡介苗(Bacillus Calmette Guerin，BCG)是一种弱化的牛型分支杆菌，广泛应用于预防结核病，也是目前预防结核病最为有效的疫苗。BCG的主要成分包括脂类、多糖、蛋白质和核酸，而其中的多糖和核酸组分具有重要的生理功能，如BCG及其相应成分对免疫系统的非特异刺激功能常有助于治疗变态反应性疾病、肿瘤等，因而BCG也显示出临床治疗相关疾病的潜在应用价值。但由于BCG的成分复杂，其引发副作用的几率也比较高。因此，如何分离、纯化BCG，提取其中的有效成分而去除引发副作用的组份将有助于减少其副作用的发生，真正发挥其在其他相关疾病治疗中的效用。有资料报道，卡介菌多糖核酸(Polysaccharide nucleic acid fraction of BacillusCalmette Guerin，BCG-PSN)是一种去除了BCG中菌体蛋白后而得到的活性成分，主要成分为脂多糖和核酸，其副作用显著减小，但依然保留了其发挥菌苗的作用活性。BCG-PSN具有促进单核-巨噬细胞系统增生，增强巨噬细胞的吞噬与消化能力，激活T淋巴细胞，诱生白细胞介素、干扰素，发挥双向免疫调节NF-κB等作用。在临床上用于防治感冒、哮喘、慢支、抗炎和抗过敏作用等。卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)是由我国医药工作者首创的人用新型免疫调节剂，它是由卡介菌经过热酚法除去菌体蛋白后的生物活性物质，其中多糖含量≥70％，核酸含量≥5％，蛋白质≤1％。研究显示，BCG-PSN能够促进细胞免疫，刺激单核-巨噬细胞增生，增强巨噬细胞的吞噬与消化能力，激活T淋巴细胞，直接调节外周血、外周免疫器官(脾脏)和中枢免疫器官(胸腺)CD4+T、CD8+T细胞的成熟与分化，进而维持CD4+、CD8+T细胞两亚群间的平衡，诱生白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)，发挥双向免疫调节NF-κB等作用。因其具有多重免疫增强功能，目前BCG-PSN早已获准在人医临床上进行应用，用于慢性支气管炎、哮喘、肿瘤和抗炎、抗过敏等的预防和治疗。但作为一种效果获得肯定的免疫增强剂而言，BCG-PSN在畜牧养殖业中得到深入研究的报道则极为少见。以鸡为例，鸡传染性性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal diseasevirus，IBDV)引起的鸡和火鸡的急性、高度接触性传染病，是危害养鸡业的主要疫病之一。该病在国内外目前均采用免疫防御为主的防制措施，尽管受到环境、机体、病原等多种因素的影响，但IBD疫苗免疫效果的好坏是降低该病发生的重要因素之一，BCG-PSN具有效果良好的增强机体特异性和非特异性免疫的能力。由于卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)主要成分为脂多糖和核酸，所以其体内外稳定性一直是限制其使用的重要因素，目前市场上尚没有将其包封于脂质的制剂。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题在于提供一种适合动物使用的卡介菌多糖核酸脂质-->组合物及其冻干制剂。本专利技术另一个目的是提供上述的制备方法。本专利技术的目的是通过下列技术方案实现的：一种卡介菌多糖核酸脂质组合物，该脂质组合物配方含有以下重量比的原料：卡介菌多糖核酸 1份磷脂 10-55份胆固醇 1-10份泊洛沙姆188 0-5份。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物，该脂质组合物配方含有以下重量比的原料：卡介菌多糖核酸 1份磷脂 25-35份胆固醇 3-5份泊洛沙姆188 1-2份。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物，其中磷脂为天然磷脂或合成磷脂，天然磷脂为卵磷脂或大豆磷脂。一种卡介菌多糖核酸脂质组合物冻干制剂，在上述的卡介菌多糖核酸脂质组合物的原料中再加入赋形剂，通过冷冻干燥制备成冻干制剂。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物冻干制剂，赋形剂采用二种搭配使用，其中赋形剂A选自甘露醇、蔗糖、右旋糖甘、山梨醇、葡萄糖、海藻糖中的一种，赋形剂B采用聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯-15(SolutolHS 15)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(CremophorELP)中的一种，按重量比计卡介菌多糖核酸∶赋形剂A∶赋形剂B为1∶30-100∶10-50。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物的制备方法，包括以下步骤：a.卡介菌多糖核酸脂质组合物混悬液的制备：采用薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸发法、乙醚注入法和机械法等常规方法制备卡介菌多糖核酸脂质组合物混悬液；其中机械法包括使用均质机、超声仪、超临界流体仪和挤出仪器等机器设备；b.使用pH7～8的磷酸盐缓冲液调节混悬液的pH到7.4，得到卡介菌多糖核酸脂质组合物；c.为了得到更小粒径的卡介菌多糖核酸脂质组合物，更进一步，可将步骤b得到的卡介菌多糖核酸脂质组合物进行二次均质和/或挤压，得到所需脂质组合物；也可以不进行二次均质和/或挤压。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物的制备方法，包括以下步骤：a.卡介菌多糖核酸脂质组合物混悬液的制备，称取处方量的原料溶解于适量的90％乙醇溶液中，通入氮气后混合均匀，放入温度30～45℃的水浴中用旋转蒸发仪抽干乙醇(毒性小，不必担心有机溶剂残留)和水，形成均一的磷脂膜，使用pH7.4的磷酸盐缓冲液洗脱磷脂膜；将得到的脂质组合物混悬液进行均质和/或挤压，得混悬液；b.使用pH7～8的磷酸盐缓冲液调节混悬液的pH到7.4，得到卡介菌多糖核酸脂质组合物；c.为了得到更小粒径的卡介菌多糖核酸脂质组合物，更进一步，可将步骤b得到的卡介菌多糖核酸脂质组合物进行二次均质和/或挤压，得到所需脂质组合物；也可以不-->进行二次均质和/或挤压。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物的制备方法，其中均质采用APV2000均质机，在一级阀1700～180bar和二级阀250～300bar的压力下均质3～5次；挤压采用200nm的滤膜通过挤出仪挤压出来。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物冻干制剂的制备方法，包括以下步骤：称取处方量的赋形剂溶解于适量的水中，混合均匀后，将制备得到的卡介菌多糖核酸脂质组合物缓慢滴入到溶液中，边滴入边搅拌，得到的混悬液后通过0.15μm的微孔滤膜过滤灭菌后放入在零下70℃下放置一天，然后放入冻干机中进行冻干，冻干完毕后冲入氮气封口。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物，其剂型为注射剂或输液剂。所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物和冻干制剂水合后的脂质体，其包封率为80％-99％，粒径为20nm-5μm。本专利技术有益效果：一、稳定性实验：本专利技术卡介菌多糖核酸脂质组合物稳定性高，制备的卡介菌多糖核酸脂质组合物冻干粉将其避光放置在4℃冰箱内观察其1个月后的物理稳定性。放置前脂质组合物的平均粒径为120.3nm，zeta电位为-29.1mv，包封率为89.2±1.48。放置后脂质组合物的平均粒径为121.9nm，zeta电位为-28.9mv，包封率为89.1％±2.18(n＝5)。包封率、粒径和zeta电位均没有显著变化。卡介菌多糖核酸脂质组合物冻干粉在温度25℃±2℃、相对本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种卡介菌多糖核酸脂质组合物，其特征在于该脂质组合物配方含有以下重量比的原料：卡介菌多糖核酸 １份磷脂 １０－５５份胆固醇 １－１０份泊洛沙姆１８８ ０－５份。
【技术特征摘要】
1.一种卡介菌多糖核酸脂质组合物，其特征在于该脂质组合物配方含有以下重量比的原料：卡介菌多糖核酸 1份磷脂 10-55份胆固醇 1-10份泊洛沙姆188 0-5份。2.根据权利要求1中所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物，其特征在于该脂质组合物配方含有以下重量比的原料：卡介菌多糖核酸 1份磷脂 25-35份胆固醇 3-5份泊洛沙姆188 1-2份。3.根据权利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物，其特征在于磷脂为天然磷脂或合成磷脂，天然磷脂为卵磷脂或大豆磷脂。4.一种卡介菌多糖核酸脂质组合物冻干制剂，其特征在于在权利要求1或2所述的原料中再加入赋形剂，通过冷冻干燥制备成冻干制剂。5.根据权利要求4所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物冻干制剂，其特征在于赋形剂采用二种搭配使用，其中赋形剂A选自甘露醇、蔗糖、右旋糖甘、山梨醇、葡萄糖、海藻糖中的一种，赋形剂B采用聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯-15、聚氧乙烯氢化蓖麻油中的一种，按重量比计卡介菌多糖核酸∶赋形剂A∶赋形剂B为1∶30-100∶10-50。6.权利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂质组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：a.卡介菌多糖核酸脂质组合物混悬液的制备：采用薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸发法、乙醚注入法或机械法等常规方法制备卡介菌多糖核酸脂质组合物混悬液；b.使用pH7～8的磷酸盐缓冲液调节混悬...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲍恩东，王晓斌，吕英军，苏建东，
申请(专利权)人：南京农业大学，南京瑞农新兽药开发工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]
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