本发明专利技术属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种千果榄仁组培繁殖方法。为保护千果榄仁野生植物资源，本发明专利技术以千果榄仁种子为外植体，对其灭菌方式，初代、增殖、生根培养基进行了筛选，并对培养方式进行了探讨。通过对外植体灭菌方式进行筛选，成功获得无菌苗，提高了种子发芽率，为进一步的组培繁殖提供了基础材料。采用1/2MS培养基，通过节段法能同步实现增殖和生根，节约了生产成本，为进一步的千果榄仁离体资源保存和产业化繁殖提供了技术支撑，有利于千果榄仁种质资源的保护。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养，具体涉及一种千果榄仁组培繁殖方法。
技术介绍
1、千果榄仁(terminalia myriocarpa)，使君子科诃子属乔木植物，国家二级重点保护野生植物，易危种。现知在我国分布于云南、广东、广西、西藏等地，为热带常绿雨林上层常见物种之一；一般零星分布，也有成小片分布的植株，主要分布海拔600m～1500m；现知成片分布范围为加热萨至希让附近海拔600m～1500m范围内。千果榄仁是珍稀濒危物种，随着人为砍伐和国家战略工程实施，工程占地等对野生资源量构成威胁。为保护千果榄仁野生植物资源，亟待进行人工繁殖技术等相关研究为千果榄仁的保护提供技术支撑。
2、目前，关于千果榄仁的繁殖技术研究较少，仅有少量种子播种和扦插繁殖技术研究报道。组织培养法是指从植物体分离出符合需要的器官、组织或细胞等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。千果榄仁组织培养繁殖技术不受外界环境条件限制，能在短时期内获得大量繁殖后代，对千果榄仁的资源保护具有重要意义，且目前还未见关于千果榄仁组培技术研究。
3、虽然根据细胞全能性理论上来讲任何组织或者器官都有潜能发育成完整的植株，但从实际操作过程中会发现不同种类的植株以及同一种类不同取材部位的器官或组织对诱导条件的反应有很大差异。因此，通过组培繁殖方法成功获得大量千果榄仁再生植株并不容易，而成功通过组培繁殖方法获得大量千果榄仁再生植株对于千果榄仁野生植物资源的保护及品种的推广具有重要意义。
>技术实现思路1、为保护千果榄仁野生植物资源，本专利技术以去除种皮的千果榄仁种子为外植体，通过组织培养，对各环节因素筛选，建立了千果榄仁组培再生体系，填补了千果榄仁组培繁殖技术研究空白，为千果榄仁的资源保护及后期进一步的产业化应用提供了技术支撑。
2、本专利技术首先提供千果榄仁的组培繁殖方法，包括以下步骤：以去除果皮的千果榄仁种子为外植体，对外植体消毒，消毒后的外植体依次进行启动培养，增殖培养和生根培养。
3、其中，所述外植体消毒依次包括酒精和次氯酸钠灭菌消毒。
4、优选地，所述酒精为75v/v％乙醇，次氯酸钠体积浓度为30％。
5、进一步优选地，所述75％乙醇和30％次氯酸钠灭菌时间分别为5～15s。更优选地，所述酒精和次氯酸钠灭菌时间分别为10s。
6、其中，所述启动培养基为不添加激素的ms培养基。
7、其中，所述启动培养时间为30d～32d。
8、其中，所述增殖培养基为不添加激素的1/2ms培养基。
9、其中，所述增殖培养时间为40d～42d。
10、其中，所述增殖培养是选取启动培养高度5cm以上的千果榄仁无菌苗，切割成1.5～2.5cm的带芽茎段，垂直接种，接种深度为0.4～0.6cm。
11、其中，所述生根培养基为不添加激素的1/2ms培养基。
12、其中，所述生根培养时间为10～30d。
13、其中，所述生根培养是选取增殖培养的健壮苗，切割成3cm以上的茎段，接种生根。
14、其中，所述启动培养、增殖培养、生根培养条件相同，包括：环境光/暗为8～14/10～16h，光照强度2000lux；和/或，温度24℃±2℃，湿度60％±10％。
15、本专利技术还提供采用上述组培繁殖方法制备的千果榄仁再生植株。
16、有益效果：本专利技术以千果榄仁种子为外植体，对其灭菌方式，初代、增殖、生根培养基进行了筛选，并对培养方式进行了探讨。实验结果显示：将种子果皮全部剥去，外植体经75％乙醇10s+30％次氯酸钠灭菌10s，灭菌效果最佳。再生体系各阶段最适培养基为：(1)初代培养：ms；(2)增殖培养：1/2ms；(3)生根培养：1/2ms。使用节段法在1/2ms同步实现增殖和生根，生根率达100％。
17、千果榄仁是国家珍稀濒危植物，本专利技术提供的千果榄仁组培繁殖方法，其不受外界环境影响，能在组培间中短时期内获得大量繁殖后代，为千果榄仁的离体资源保存提供了技术支撑，有利于千果榄仁种质资源的保护。
18、千果榄仁也是我国热带雨林和季雨林的代表种和指示种，千果榄仁组培繁殖技术体系的建立能进一步产业化形成大量优质种苗，为热带季雨林的生态修复及进一步的工程应用提供植物材料支撑，为珍稀濒危植物千果榄仁的资源保存提供了技术支撑。
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【技术保护点】
1.千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：以去除果皮的千果榄仁种子为外植体，对外植体消毒，消毒后的外植体依次进行启动培养，增殖培养和生根培养。
2.根据权利要求1所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述外植体消毒依次包括酒精5～15s和次氯酸钠5～15s灭菌消毒；优选地，所述酒精为75v/v％乙醇，次氯酸钠体积浓度为30％；更优选地，所述酒精和次氯酸钠灭菌时间分别为10s。
3.根据权利要求1或2所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述启动培养基为不添加激素的MS培养基。
4.根据权利要求1～3任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述增殖培养基为不添加激素的1/2MS培养基。
5.根据权利要求1～4任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述增殖培养是选取启动培养后高度5cm以上的千果榄仁无菌苗，切割成1.5～2.5cm的带芽茎段，垂直接种，接种深度为0.4～0.6cm。
6.根据权利要求1～5任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述生根培养基为不添加激素的1/2MS培养基。
7.根据权利要求1～6任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述生根培养是选取增殖培养的健壮苗，切割成3cm以上的茎段，接种生根。
8.根据权利要求1～7任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述启动培养、增殖培养、生根培养条件相同，包括：环境光/暗为8～14/10～16h，光照强度2000Lux；和/或，温度24℃±2℃，湿度60％±10％。
9.根据权利要求1～8任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述启动培养时间为30d～32d，所述增殖培养时间为40d～42d，和/或，所述生根培养时间为10～30d。
10.权利要求1～9任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法制备的千果榄仁再生植株。
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【技术特征摘要】
1.千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：以去除果皮的千果榄仁种子为外植体，对外植体消毒，消毒后的外植体依次进行启动培养，增殖培养和生根培养。
2.根据权利要求1所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述外植体消毒依次包括酒精5～15s和次氯酸钠5～15s灭菌消毒；优选地，所述酒精为75v/v％乙醇，次氯酸钠体积浓度为30％；更优选地，所述酒精和次氯酸钠灭菌时间分别为10s。
3.根据权利要求1或2所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述启动培养基为不添加激素的ms培养基。
4.根据权利要求1～3任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述增殖培养基为不添加激素的1/2ms培养基。
5.根据权利要求1～4任一项所述的千果榄仁的组培繁殖方法，其特征在于：所述增殖培养是选取启动培养后高度5cm以上的千果榄仁无菌苗，切割成1.5～2.5cm的带芽茎段，垂直接...
【专利技术属性】
技术研发人员：李霖，马建华，刘猛，栾丽，姜跃良，何涛，刘峰，何巧玲，周宣，
申请(专利权)人：雅江清能生态环保成都有限公司，
类型：发明
国别省市：
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