【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于人类胚胎冻存，具体涉及自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆的制备方法及其在人类胚胎冷冻保存过程中的应用。
技术介绍
1、胚胎冷冻保存技术是胚胎移植过程中的重要步骤。该技术可以使胚胎在-196 ℃的液氮环境中长期稳定保存，同时确保复苏后的胚胎保持正常的代谢能力。胚胎冷冻技术通常包括慢速冷冻技术，快速冷冻技术和玻璃化冷冻技术。目前，玻璃化冷冻技术广泛应用于生产实践。该技术通过使用高浓度的冷冻剂，使胚胎内的水分被快速置换。在降温保存过程中，冷冻保护液会形成无定形的玻璃态，有效避免了冰晶的形成，减少了冰晶对于胚胎细胞的伤害。
2、整个玻璃化冷冻和复苏的过程包括：高浓度冷却保护剂平衡、冷冻载杆承载、液氮瞬时玻璃化冷冻、解冻液处理。其中，冷冻载杆对胚胎的承载和冻存起到关键的主导作用。增强冷冻载杆对玻璃化冷冻液的承载能力将对胚胎的成功保存产生有利的效果。在实际的玻璃化冷冻复苏过程中，承载了胚胎的玻璃化冷冻载杆需要先经过组织油再浸入解冻液。然而，现有的商用玻璃化冷冻载杆均较易黏附组织油，组织油在玻璃化冷冻载杆及胚胎表面的附着通常会导致胚胎漂浮至液面表层，进而致使由于操作失误而导致的样本丢失发生的几率大幅增加。因此，设计并开发出一种具有强冷冻液承载能力，同时疏油滑油的玻璃化冷冻载杆具有重要的意义。
3、本专利技术在玻璃化冷冻载杆上先后接枝金属离子多巴胺及三乙氧基-1h,2h,3h,4h-十三氟代正辛基硅烷，利用金属离子多巴胺的亲水性和三乙氧基-1h,2h,3h,4h-十三氟代正辛基硅烷的疏油性，结合二者在纳米尺
技术实现思路
1、为了解决现有技术的不足，本专利技术目的是旨在提供一种自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆的制备方法及其应用。用该专利技术制得的玻璃化冷冻载杆具有极佳的疏组织油效果，同时展现出对玻璃化冷冻液和组织油显著的粘附性差异，其固有的力学性质及光学性质均未发生明显变化，完全符合人类胚胎在保存和转移过程中的安全性需求。本专利技术采用的技术方案包括以下步骤：
2、自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆的制备方法：
3、步骤1：常温下将三羟甲基氨基甲烷加入超纯水（milli-q）中磁力搅拌，配置缓冲溶液；
4、将二水合柠檬酸钠加入缓冲溶液中，磁力搅拌至二水合柠檬酸钠充分溶解，随后加入多巴胺和二水氯化铜，磁力搅拌后得到深绿色的混合溶液；
5、将等离子体清洗的玻璃化冷冻载杆一侧没入至混合溶液中，在室温条件下浸泡修饰，采用超纯水（milli-q）冲洗浸泡修饰后的载杆，用n2吹干，得到多巴胺簇分子刷修饰过的玻璃冷冻化载杆，干燥备用。
6、步骤2：取出干燥后的载杆，采用等离子体对其基底200~300 w轰击30~200 s，滴加三乙氧基-1h,2h,3h,4h-十三氟代正辛基硅烷于培养皿中，将其和轰击后的玻璃冷冻化载杆放入真空干燥器中抽取真空并静置18~30 h，最终得到自清洁疏油涂层即金属离子多巴胺-氟硅烷修饰的玻璃化冷冻载杆。
7、所述的步骤1中，按摩尔比，二水合柠檬酸钠:三羟甲基氨基甲烷=1:10~1:20，二水氯化铜:多巴胺=1:2~1:5；
8、所述的步骤1中，超纯水（milli-q）的体积为80~120 ml；
9、所述的步骤1中，磁力搅拌时间为5~20 min；
10、所述的步骤1中，浸泡修饰时间为5~30 h；
11、所述的步骤2中，三乙氧基-1h,2h,3h,4h-十三氟代正辛基硅烷的滴加量为40~60μl；
12、所述的步骤2中，油泵真空抽取时间为5~15 min；
13、自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆应用：
14、本专利技术的自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆用于人类胚胎冷冻保存技术，能提高玻璃化冷冻液的承载力，同时抑制组织油在表面的粘附。
15、本专利技术的有益效果：
16、1. 在修饰前，玻璃冷冻化载杆保水能力差，具有亲油性，容易被生物组织油污染，但利用金属离子多巴胺的亲水性和三乙氧基-1h,2h,3h,4h-十三氟代正辛基硅烷的疏油性，结合二者在纳米尺度上产生的构效关系，对玻璃化冷冻载杆进行修饰，有力实现了玻璃化冷冻载杆极佳的保水疏油效果。
17、2. 对玻璃化冷冻载杆进行修饰，使其外壁生长一层自清洁疏油涂层后，将其插入至覆盖组织油的解冻液中，可有效防止冷冻载杆表面组织油的附着，表现出对玻璃化冷冻液和组织油显著的粘附性差异。
18、3. 在人类辅助生殖实验室选取20个临床废弃囊胚样品，使用修饰后的玻璃化冷冻载杆解冻后，实现了100%的复苏率，说明自清洁疏油涂层即金属离子多巴胺/氟硅烷表面修饰的玻璃化冷冻载杆具有优异的囊胚承载效果，与原始载杆相比，可持久亲和冷冻液，有效降低样品在冻存过程中的丢失率。
19、4. 修饰后的玻璃化冷冻载杆经历共浸泡，化学气相沉积等修饰生长过程，依旧保持本身光学性能。
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1.一种自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2. 根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，按摩尔比，二水合柠檬酸钠:三羟甲基氨基甲烷 =1:10~1:20，二水氯化铜:多巴胺 =1:2~1:5。
3.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，浸泡修饰时间为5~30h。
4. 根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，等离子体对所述的玻璃化冷冻载杆基底在200~300 W的功率下轰击30~200s。
5.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，所述的步骤2中，油泵抽取真空。
6.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，真空干燥器中静置18~30h。
7.权利要求1-6任意一项所述的自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆的应用，其特征在于，自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆用于人类胚胎冷冻保存技术，能提高玻璃化冷冻液的承载力，同时抑制组织油在表面的粘附。
【技术特征摘要】
1.一种自清洁疏油涂层修饰的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2. 根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，按摩尔比，二水合柠檬酸钠:三羟甲基氨基甲烷 =1:10~1:20，二水氯化铜:多巴胺 =1:2~1:5。
3.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，浸泡修饰时间为5~30h。
4. 根据权利要求1所述的玻璃化冷冻载杆的制备方法，其特征在于，等离子体对所述的玻璃化冷冻载杆基底...
【专利技术属性】
技术研发人员：李祥宇，徐大可，李达，王健阳，高英卓，杨大磊，王福会，
申请(专利权)人：东北大学，
类型：发明
国别省市：
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