本发明专利技术涉及重组人白介素１５（ｒｈＩＬ－１５）以及含有重组人白介素１５的药物组合物在制备具有治疗恶性腹水瘤药物中的应用，经体内药理实验证明，恶性腹水模型小鼠注射给予ｒｈＩＬ－１５后，可显著延长其生存期。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及重组人白介素15(rhIL-15)在制备具有缓解和治疗恶性腹水瘤药物中的应用，属于生物制药领域。
技术介绍
恶性腹水是晚期癌症患者常见的并发症，不仅影响患者的生活质量，也不利于进一步治疗，病人病情重、进展快、生存期短，其中消化道恶性腹水平均生存期仅为2-12个月，常见的治疗方法包括：全身或腔内局部化疗，使用硬化剂，穿刺抽液或置导管引流以及胸、腹腔分流等，这些方法虽然有一定的疗效，但有的易复发，有的副反应严重，不易为患者接受，近年来，临床上积极开展拥古生物效应调节剂治疗恶性胸、腹水，文献报道逐年增多，如孙燕(孙燕，张弘刚，彭民.重组人白细胞介素-2治疗实体瘤及胸腹水III期临床研究.中国新药杂志，1998，7(3)：171-174)等报道重组人白介素2的III期临床试验，共治疗90例恶性腹水患者，总有效率可达76.7％；杨晓红(杨晓红.重组人白介素-2治疗52例恶性腹水的观察.重庆医学，2003，32(1)：96用重组人白介素2治疗52例恶性腹水时，观察发现，腹腔内注射重组人白介素-2，治疗后，腹水及腹水中弘细胞均明显减少，部分病人癌细胞转阴，但部分病人有较为严重的副反应。白细胞介素15(IL-15)是Grabstein等人于1994年发现的一种约为12-14kD的细胞因子，与大多数细胞因子相似，IL-15可在机体正常的免疫应答中发挥作用，如促进T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞的发育等，IL-15还可对免疫系统外的多种组织和细胞发挥广泛而多效的作用。体外研究显示IL-15与IL-2由于共有的受体组分共有几种生物学活性，在T细胞上存在的IL-15受体包括一种特有的α链，IL-15Rα，但是与IL-2R共有β链和γ链，结果，两种受体都利用相同的Jak/STAT信号传递元件，不过，基于IL-2和IL-15及其受体的复杂调控和不同表达，已经报道了体内功能的显著差异(Kirman等，1998；Waldmann and Tagaya，1999；Waldmann等，2001)。IL-15和IL-2的抗肿瘤效应应受到重视，比较IL-15与IL-2对肺腺癌转移模型的疗效时，它诱导的NK杀伤活性比IL-2诱导的高3-4倍，此外，6倍剂量的IL-15才能引起肺血管渗漏等毒副作用的出现，在大鼠的结肠癌模型中也发现，IL-15能显著降低化疗英气的胃肠道毒性，增强药物的最大耐受剂量。朱法良等(朱法良，孙汭，田志刚，等.rhIL-15和rhIL-2诱生的LAK细胞特性比较.中国免疫学杂志[J].2002，18(4)：252-258)在研究重组人白细胞介素15和重组人白介素2诱导的粘附性自然杀伤细胞(LAK)时发现，rhIL-15诱生的LAK细胞杀伤K562细胞的能力强于rhIL-2诱生的LAK细胞，同时，rhIL-15诱生的LAK细胞的CD3-CD56+细胞、CD94+细胞百分率均要高于rhIL-2诱生的LAK细胞，证明rhIL-15在体内对NK细胞功能可能具有较强的调节作用。
技术实现思路
本专利技术研究人员发现，rhIL-15在治疗恶性腹水瘤方面，如艾氏腹水瘤、卵巢癌腹-->水、恶性肝癌腹水瘤等，具有一定的治疗和缓解作用，可明显延长腹水小鼠的生存期。本专利技术的目的在于提供重组人白细胞介素15在制备具有治疗和缓解恶性腹水瘤药物中的应用。本专利技术的再一目的在于提供一种含有重组人白细胞介素15的药物组合物在制备具有治疗和缓解恶性腹水瘤药物中的应用。本专利技术中，含有重组人白细胞介素15的药物组合物，是指，除含有重组人白细胞介素15外，还包括一些其它药物，如白细胞介素2、IFN-a、抗血管内皮生长因子(VEGF)、索拉非尼、5-FU、吉西他滨、紫杉烷、铂类(如顺铂、奥沙利铂、卡铂等)等其它抗癌药物的任意一种或多种。本专利技术的一个优选实施例中，提供了一种制备rhIL-15的方法，本专利技术制备方法通过一系列基因克隆的构建策略，合成目的基因IL-15，并将目的基因IL-15克隆到表达载体上，再将含有目的基因的表达载体转化至大肠杆菌，构建工程菌发酵制备rhIL-15。本专利技术的一个优选实施例中，提供了rhIL-15对Ehrlich腹水瘤小鼠的治疗作用，艾氏腹水小鼠给予有效量的rhIL-15，可显著抑制肿瘤细胞的有丝分裂指数，而胸腺淋巴细胞有丝分裂指数显著增长生长。本专利技术的还一优选实施例中，提供了rhIL-15对卵巢癌U15腹水瘤小鼠的治疗作用，小鼠腹水增长显著受到抑制，死亡率也明显降低。在本专利技术的又一实施例中，提供了rhIL-15对恶性肝癌H22腹水瘤小鼠的治疗作用，荷肝癌H22小鼠在40天内均死亡，但给予重组人白介素15治疗后，其生存期得到明显延长。附图说明图1左为rhIL-15的诱导表达情况电泳图，右为rhIL-15的样品和标准品WesternBlot杂交图，从图中可以看出在大约13kDa的位置出现明显的目的蛋白条带，Western Blot试验表明该目的条带出现明显的印迹反应，说明白介素15获得了正确高效表达。图2为rhIL-15样品纯化前、后的电泳情况图，纯化后的重组rhIL-15经Tricine-SDS-PAGE电泳检测，结果在大约13kDa的位置出现一条带。图3为纯化后的rhIL-15样品的高效液相色谱图，纯化后的rhIL-15显示仍为单一峰。具体实施例本专利技术通过下述实施例进一步阐明，但任何实施例或其组合不应当理解为对本专利技术的范围或实施方式的限制。本专利技术的范围由所附权利要求书限定，结合本说明书和本领域一般常识，本领域普通技术人员可以清楚地明白权利要求书所限定的范围。在不偏离本专利技术的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以对本专利技术的技术方案进行任何修改或改变，这种修改和改变也包含在本专利技术的范围内。实施例1制备rhIL-15试验材料：DNA限制性内切酶、T4DNA连接酶、TaqDNA聚合酶、M-MLV逆转录酶均为-->GIBCO公司产品；大肠杆菌宿主菌DH5a，BL21(DE3)菌株(购自Invotrogen公司)；pVB220载体(购自Novagen公司)1引物的设计与合成：根据报道的hIL1-15的基因序列设计一对引物，上游引物P1：5’-CctcgagTTCATGAACTGGGTGAATGTAATAAG-3’，包括起始密码子ATG，外设Xho I酶切位点；下游引物P2：5’-CGGATCCttaTTAAGAAGTGTTGATGAAGATTTG-3’，将终止密码子变成原核系统高频使用的强终止子TAA，外设BamH I酶切位点，引物由北京雷默生物技术有限公司合成和纯化。2富含IL-15mRNA单个核细胞的制备及总RNA提取，采用常规密度梯度离心方法分离正常人外周血白细胞，培养与含10％小牛血清、青霉素和链霉素的RPMI 1640培养液中，加入细菌脂多糖5μg/ml和干扰素-γ500u/ml，培养4h，弃去悬浮细胞，收获帖壁的单个核细胞，经异硫氰酸胍法提取细胞总RNA，采用甲醛变形琼脂糖凝胶水平电泳鉴定RNA。3RT-PCR反应：逆转录反应：取细胞总RNA 5-10μg作为模板，加入DTT10mmol、M-MLV200u、4xdNTP(每种)0.5mmol、下游引物P250pmol，总反应体积20μl、37℃作用1h，95℃本文档来自技高网...
【技术保护点】
重组人白细胞介素１５在具有治疗和缓解恶性腹水瘤药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.重组人白细胞介素15在具有治疗和缓解恶性腹水瘤药物中的应用。2.含有...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯建华，周德胜，张春丽，熊国裕，
申请(专利权)人：北京凯因科技股份有限公司，北京凯因生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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