【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物细胞工程，具体涉及一种诱导凤梨试管开花的方法及其应用。
技术介绍
1、花的形成受很多因子的调控，是高等植物所特有的一种生理现象。在正常情况下，植物必须在营养生长阶段积累一定的营养，同时受到外界环境刺激才能进行花芽分化进而开花。
2、近年来，凤梨因果形独特、果色金黄、果香四溢，并且花、果及茎采摘后可以保存很久，其作为观赏植物在世界范围内的受欢迎程度不断提高。现有诱导凤梨开花的技术多为乙烯诱导开花，凤梨的组织培养技术近年来逐渐成熟，凤梨的组织培养是种质资源恢复和保存的重要工具，组织培养技术能够人为控制植物的生长和繁殖。凤梨从营养生长阶段向生殖生长阶段的转变，这个复杂的过程往往受到多方面的影响，外源因素和内源因素的也以各种复杂和不可预测的方式相互作用。试管开花是指利用植物组织培养技术，在人工控制无菌环境条件下，使植物在容器中生长、开花甚至结实，通过控制各种条件缩短植物营养生长或生殖生长周期，从而更加方便快捷的研究植物的生殖生长阶段。影响试管开花的重要因素包括培养基中植物生长调节剂的种类、光、碳源和培养基的ph值等。
3、在试管开花研发中寻找影响开花的新的因素和方法，寻找到诱导开花的物质、新型培养基，使试管开花向专业化、规模化、产业化发展。试管开花的研究不仅可以揭示植物开花诱导机制，还可以为花期调控、试管花卉生产、育种等提供理论基础和科学依据。
4、自然生长状态下凤梨对环境条件的要求比较严格，呈现生长缓慢的缺点，生长周期一年半左右，它的生长期可持续三到四年才可开花结果。传统的凤梨育种
5、在凤梨农业生产中广泛运用乙烯催花技术，能够响应乙烯诱导成花的前提是植株生长健壮，且达到一定的株龄。实际生产中也常因乙烯催花不当造成果实失去凤梨天然香气、味酸而淡、芯粗多渣和易感染黑心病等采后病害，影响了凤梨的经济效益。现有的试管开花技术大多是月季、国兰、白菜、铁皮石斛和少部分木本植物，我国研究较多的是兰花与竹子，对凤梨试管开花研究较少。目前尚未见利用凤梨的愈伤组织直接诱导试管开花方法的研究。
技术实现思路
1、基于此，为解决现有技术中存在的至少一种技术问题，本专利技术以凤梨的愈伤组织为材料进行诱导，将愈伤组织接种到不同开花诱导培养基中，筛选获得凤梨愈伤组织试管开花诱导的最适方法。
2、本专利技术的目的之一，是提供一种诱导凤梨试管开花的方法，包括如下步骤：
3、无菌外植体获取：选择凤梨合适外植体对其消毒处理，获得无菌外植体；
4、愈伤组织诱导：将无菌外植体接种在凤梨诱导培养基中诱导愈伤组织，获得健康愈伤组织；
5、花芽诱导：将健康的愈伤组织接种于凤梨试管开花诱导培养基中进行花芽诱导；所述凤梨试管开花诱导培养基中含有≥30g/l蔗糖。
6、优选地，所述凤梨试管开花诱导培养基中含有60-80g/l蔗糖。
7、进一步优选地，所述凤梨试管开花诱导培养基中含有ms培养基、2-4mg/l 6-ba、1.0-3.0mg/l naa、60-80g/l蔗糖及6.5-7.5g/l琼脂，ph值为5.6-6.0。
8、进一步优选地，所述试管开花诱导培养基中含有ms培养基、3mg/l 6-ba、2mg/lnaa、60-80g/l蔗糖及6.5-7.5g/l琼脂。
9、进一步优选地，所述外植体为健康生长凤梨当年生吸芽。
10、本领域技术人员可以采用现有的消毒手段对外植体进行消毒，获取无菌外植体。优选地，对摘取的当年生凤梨吸芽用纯水冲洗后，切取当年生凤梨吸芽中部芯，用超声波清洗仪清洗；清洗得到的外植体先用浓度为0.1％升汞浸泡6-8min，再用无菌水清洗3-5次，进行二分切；再用浓度为30％ naclo溶液浸泡5-10min，无菌水清洗3-5次后，进行4分切；然后用升汞浸泡4-6min分钟，用无菌水清洗3-5次，进行八分切；最后切成直径0.8-1.0cm的扇形，得到无菌外植体。
11、优选地，所述凤梨诱导培养基中含有ms培养基、1.5-2.5mg/l 6-ba，2.0-3.0mg/lnaa、30g/l蔗糖及6.5-7.5g/l琼脂，ph值为5.6-6.0；培养条件为：2000-2500lx的光照、16h/d光照处理、24±2℃的温度、60-75％的环境湿度。
12、优选地，还包括对凤梨诱导培养基中诱导的健康愈伤组织进行继代处理的步骤，具体地，选取凤梨诱导培养基中诱导的健康的愈伤组织，接种于愈伤组织继代培养基，所述愈伤组织继代培养基中含有ms培养基、2.0-4.0mg/l 6-ba、1.0-3.0mg/l naa、30g/l的蔗糖和6.5-7.5g/l的琼脂，ph值为5.6-6.0；愈伤组织继代培养条件为：2000-2500lx的光照、16h/d光照处理、24±2℃的温度、60-75％的环境湿度。
13、优选地，凤梨愈伤组织继代培养每3周进行一次。
14、本专利技术的目的之二，上述的诱导凤梨试管开花的方法也可以应用于凤梨栽培或育种中。
15、本专利技术的目的之三，上述的诱导凤梨试管开花的方法也可以应用于洛弗丽茅膏菜的试管开花诱导中。具体地，应用时，包括如下步骤：
16、无菌外植体获取：选择茅膏菜外植体对其消毒处理，获得无菌外植体；
17、愈伤组织诱导：将无菌外植体接种在茅膏菜不定芽诱导培养基中获取茅膏菜不定芽；
18、茅膏菜花芽诱导：将茅膏菜不定芽接种到茅膏菜生长培养基中培养，然后植入茅膏菜开花诱导培养基中进行花芽诱导；所述的茅膏菜开花诱导培养基中含有≥30g/l蔗糖。
19、与凤梨的区别仅在于，基于愈伤组织发育的不同，直接将培育得到的不定芽培养，对芽苗进行花芽诱导，开花培养基采用蔗糖含量≥30g/l的培养基。
20、优选地，所述茅膏菜不定芽诱导培养基中含有：1/4ms培养基、6.5-7.5g/l琼脂、20g/l蔗糖，ph为5.6-6.0；
21、所述茅膏菜生长培养基中含有：1/4ms培养基，1.0mg/l 6-ba，0.1mg/l naa，6.5-7.5g/l琼脂，20g/l蔗糖，ph为5.6-6.0；
22、所述茅膏菜开花诱导培养基中含有：1/4ms培养基，1.0mg/l 6-ba，0.1mg/l naa，6.5-7.5g/l琼脂，20-70g/l蔗糖，ph为5.6-6.0；
23、上述培养基的培养条件为：光照2000-2500lx，培养温度为24±2℃，光照处理16h/d，环境湿度为60-70％。
24、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
25、本专利技术提出了一种使凤梨在愈伤组织阶段成花的方法，可以更加方便快捷的研究凤梨的生殖生长阶段，在试管内成花也能实现凤梨试管内授粉，促进提前开花并结实。本专利技术解决了由于营养生长周期长所导致的凤梨生长周期长本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述凤梨试管开花诱导培养基中含有60-80g/L蔗糖。
3.根据权利要求2所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述凤梨试管开花诱导培养基中含有MS培养基、2-4mg/L 6-BA、1.0-3.0mg/L NAA、60-80g/L蔗糖及6.5-7.5g/L琼脂，pH值为5.6-6.0。
4.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述外植体为健康生长凤梨当年生吸芽。
5.根据权利要求4所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述无菌外植体是通过以下方法获取的：对摘取的当年生凤梨吸芽用纯水冲洗后，切取当年生凤梨吸芽中部芯，用超声波清洗仪清洗；清洗得到的外植体先用浓度为0.1％升汞浸泡6-8min，再用无菌水清洗3-5次，进行二分切；再用浓度为30％NaClO溶液浸泡5-10min，无菌水清洗3-5次后，进行4分切；然后用升汞浸泡4-6min分钟，用无菌水清洗3-5次，进行八分切；最后切成直径0.
6.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述凤梨愈伤诱导培养基中含有MS培养基、1.5-2.5mg/L 6-BA，2.0-3.0mg/L NAA、30g/L蔗糖及6.5-7.5g/L琼脂，pH值为5.6-6.0；培养条件为：2000-2500lx的光照、16h/d光照处理、24±2℃的温度、60-75％的环境湿度。
7.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，还包括对凤梨诱导培养基中诱导的健康愈伤组织进行继代处理的步骤，具体地，选取凤梨诱导培养基中诱导的健康的愈伤组织，接种于愈伤组织继代培养基，所述愈伤组织继代培养基中含有MS培养基、2.0-4.0mg/L 6-BA、1.0-3.0mg/L NAA、30g/L的蔗糖和6.5-7.5g/L的琼脂，pH值为5.6-6.0；愈伤组织继代培养条件为：2000-2500lx的光照、16h/d光照处理、24±2℃的温度、60-75％的环境湿度。
8.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法在凤梨栽培或育种中的应用。
9.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法在诱导洛弗丽茅膏菜的试管开花中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，
...【技术特征摘要】
1.一种诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述凤梨试管开花诱导培养基中含有60-80g/l蔗糖。
3.根据权利要求2所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述凤梨试管开花诱导培养基中含有ms培养基、2-4mg/l 6-ba、1.0-3.0mg/l naa、60-80g/l蔗糖及6.5-7.5g/l琼脂，ph值为5.6-6.0。
4.根据权利要求1所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述外植体为健康生长凤梨当年生吸芽。
5.根据权利要求4所述的诱导凤梨试管开花的方法，其特征在于，所述无菌外植体是通过以下方法获取的：对摘取的当年生凤梨吸芽用纯水冲洗后，切取当年生凤梨吸芽中部芯，用超声波清洗仪清洗；清洗得到的外植体先用浓度为0.1％升汞浸泡6-8min，再用无菌水清洗3-5次，进行二分切；再用浓度为30％naclo溶液浸泡5-10min，无菌水清洗3-5次后，进行4分切；然后用升汞浸泡4-6min分钟，用无菌水清洗3-5次，进行八分切；最后切成直径0.8-1.0cm的扇形，得到无菌外植体。
6.根据权利要求1所述的诱导凤梨...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢桃，苏瑶，付雪莉，贺龙飞，张向前，李桃，洪宇，黄鑫，宋雨昕，刘纳，李奥，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：
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