【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学药物检测领域，具体涉及一种荧光素钠有关物质的检测方法。
技术介绍
1、荧光素钠(fluorescein sodium)即9-(邻羧基苯基)-6-羟基-3h-吨-3-酮二钠盐，分子结构式如下：
2、
3、荧光素钠被广泛应用于眼底造影的注射制剂中，作为一种诊断药物，对正常角膜等上皮不能染色，但能对损伤的角膜上皮染成绿色，从而可显示出角膜损伤、溃疡等病变。
4、有关物质是在药物合成生产过程中带入的起始物料、中间体、副反应产物和降解杂质等，其影响着药物的产品质量，甚至还会造成严重的不良反应。有关物质的检测方法的开发是药品质量研究中的重要部分，能够提高药物安全性、有效性与质量可控性。荧光素钠质量标准收载在《中国药典》2020年版、美国药典usp40-nf35版以及欧洲药典ep9.0版标准中，有关物质项均采用hplc法进行控制，各国药典标准收载杂质略有差异，其中usp40-nf35版及ep9.0版标准收载了杂质间苯二酚(杂质a)、邻苯二甲酸(杂质b)、2-(2,4二羟基苯甲酰基)苯甲酸(杂质c)，《中国药典》2020年版标准收载了杂质间苯二酚(杂质ⅰ)、邻苯二甲酸(杂质ⅱ)，usp40-nf35版及ep9.0版标准分别采用外标法和加校正因子的主成分自身对照法对杂质c进行定量。根据破坏试验可知，杂质c属于氧化破坏降解杂质，是荧光素钠稳定性考察中有明显升高的降解杂质，应进行控制。杂质a与杂质b为原料药引入的工艺杂质，二乙酰荧光素为工艺合成过程中间体，可能残留在终产品中，都应进行控制。《中国药
5、因此，研发一种检测时间较短，灵敏度高，专属性高、准确度好的检测荧光素钠中有关物质的分析方法，对于提高荧光素钠相关产品的质量以及提高患者用药安全性具有十分重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种荧光素钠有关物质的检测方法，采用该方法二乙酰荧光素在稀释液中可顺利溶解，杂质c及其相邻杂质分离度良好，二乙酰荧光素出峰时间适宜，强降解条件下各个成分之间均分离良好。此方法专属性强、准确度高、耐用性好、操作简便，能够解决现有技术检测杂质数量少、分离度不佳、无法全面反应荧光素钠有关物质的问题。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
3、本专利技术提供荧光素钠有关物质的检测方法，包括量取样品溶液注入高效液相色谱仪，采用高效液相色谱法进行检测，并记录色谱图的步骤；
4、其中，所述高效液相色谱法的色谱条件为：用辛基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；以磷酸盐溶液(取磷酸二氢钾1.22g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节ph值至1.8～2.2，优选的，ph值为2.0)为流动相a,乙腈为流动相b，进行梯度洗脱；检测波长为220nm；柱温为25～35℃，优选的，柱温为30℃；进样体积20μl。
5、其中，所述有关物质选自杂质a、杂质b、杂质c和二乙酰荧光素中的一种或多种，所述杂质a为间苯二酚，杂质b为邻苯二甲酸，杂质c为2-(2,4二羟基苯甲酰基)苯甲酸。
6、优选的，在本专利技术所述的检测方法中，所述梯度洗脱程序为：
7、
8、更优选的，所述梯度洗脱程序为：
9、
10、在本专利技术的一些实施方案中，样品溶液包括供试品溶液、对照溶液和对照品溶液，其中供试品溶液的浓度为0.5mg/ml。
11、在本专利技术的一些实施方案中，供试品溶液配制过程为：荧光素钠适量，精密称定，加稀释液溶解并定量稀释成约每1ml中含0.5mg的溶液；所述对照溶液配制过程为：精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀即得；所述对照品溶液配制过程为：分别取间苯二酚(杂质a)对照品、邻苯二甲酸(杂质b)对照品、2-(2,4二羟基苯甲酰基)苯甲酸(杂质c)对照品、二乙酰荧光素对照品各适量，精密称定，加稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中约含杂质a、杂质b、杂质c各2.5μg和二乙酰荧光素0.75μg的混合溶液；其中，所述稀释液为60％乙腈。
12、在本专利技术的一些实施方案中，流动相流速为0.9～1.1ml/min，优选的，流速为1.0ml/min。
13、在本专利技术的一些实施方案中，本专利技术所述的检测方法包括以下步骤，：
14、(1)溶液配制
15、供试品溶液：取荧光素钠适量，精密称定，加60％乙腈溶解并定量稀释成约每1ml中含0.5mg的溶液。
16、对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用60％乙腈稀释至刻度，摇匀即得。
17、对照品溶液：分别取间苯二酚(杂质a)对照品、邻苯二甲酸(杂质b)对照品、2-(2,4二羟基苯甲酰基)苯甲酸(杂质c)对照品、二乙酰荧光素对照品各适量，精密称定，加60％乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中约含杂质a、杂质b、杂质c各2.5μg和二乙酰荧光素0.75μg的混合溶液。
18、(2)色谱条件
19、用辛基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)；以磷酸盐溶液(取磷酸二氢钾1.22g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节ph值至2.0)为流动相a,乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为220nm；柱温为30℃；进样体积20μl。
20、
21、(3)测定方法
22、精密量取供试品溶液、对照溶液、对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
23、本专利技术的另一目的在于提供一种荧光素钠有关物质的检测方法，该方法用于需要进行有关物质检测的荧光素钠原料药及荧光素钠相关制剂的检测。
24、本专利技术荧光素钠有关物质的检测方法相比现有技术具有以下优点：
25、该方法二乙酰荧光素在稀释液中可顺利溶解，杂质c及其相邻杂质分离度良好，二乙酰荧光素出峰时间适宜，强降解条件下各个成分之间均分离良好，已知杂质与未知杂质的分离度>1.5，未知杂质分离度>1.2，主峰峰纯度>990。
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1.一种荧光素钠有关物质的检测方法，其特征在于，包括量取样品溶液注入高效液相色谱仪，采用高效液相色谱法进行检测，并记录色谱图的步骤；
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述样品溶液包括供试品溶液、对照溶液和对照品溶液，其中所述供试品溶液的浓度为0.5mg/ml。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液配制过程为：荧光素钠适量，精密称定，加稀释液溶解并定量稀释成约每1ml中含0.5mg的溶液；所述对照溶液配制过程为：精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀即得；所述对照品溶液配制过程为：分别取间苯二酚(杂质A)对照品、邻苯二甲酸(杂质B)对照品、2-(2,4二羟基苯甲酰基)苯甲酸(杂质C)对照品、二乙酰荧光素对照品各适量，精密称定，加稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中约含杂质A、杂质B、杂质C各2.5μg和二乙酰荧光素0.75μ
6.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐溶液的pH为2.0。
7.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述柱温为30℃.
8.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述流动相流速为0.9～1.1ml/min。
9.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求1-9中任一项所述的荧光素钠有关物质的检测方法，其特征在于，该方法用于需要进行有关物质检测的荧光素钠原料药及荧光素钠相关制剂的检测。
...【技术特征摘要】
1.一种荧光素钠有关物质的检测方法，其特征在于，包括量取样品溶液注入高效液相色谱仪，采用高效液相色谱法进行检测，并记录色谱图的步骤；
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述样品溶液包括供试品溶液、对照溶液和对照品溶液，其中所述供试品溶液的浓度为0.5mg/ml。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液配制过程为：荧光素钠适量，精密称定，加稀释液溶解并定量稀释成约每1ml中含0.5mg的溶液；所述对照溶液配制过程为：精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀即得；所述对照品溶液配制过程为：分别取间苯二酚(杂质a)对照品、邻苯二甲酸(杂...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈永宁，韦思遥，吴水华，梁云飞，冯晓琳，王海燕，李鑫，何毅，郑志远，黄源春，
申请(专利权)人：广西梧州制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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