【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属于生物催化，具体涉及一种转氨酶的固定化方法。
技术介绍
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技术介绍
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1、纯手性胺对映体是合成各种生物活性化合物不可缺少的组成部分，广泛应用于医药、农化和材料工业。通过转氨酶酶法制备手性胺是一种常用的技术手段，一般使用的转氨酶是转氨酶提纯液或转氨酶粗酶液，其稳定性差、分离困难、无法重复使用、不经济。因此，制备可以套用的、稳定性好的固定化转氨酶至关重要。
2、酶固定化的技术大致可分为载体结合法、交联法和包埋法三种，其中包埋法是将转氨酶包裹于凝胶网格或聚合物的半透膜微中，使酶固定化，是一种反应条件温和，很少改变酶蛋白结构的固定化方法。但是包埋法固定化酶的凝胶网格和微囊中存在有分子扩散效应，常常需要加大凝胶网格，以增强分子扩散和传质，但这样会使凝胶的机械强度降低，容易造成酶的泄漏。另外，包埋法固定化酶可压缩性比较大，刚性不够，不适合做连续流管式反应。
3、因此，能够制备出机械强度高、刚性强、可做连续流管式反应的固定化转氨酶是目前亟需解决的技术问题。
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简单易于产业化的固定化转氨酶的制备方法。
2、本专利技术采用的技术方案如下：先将转氨酶清液制备成转氨酶纳米晶混合溶液，再进行包埋制得固定化转氨酶。
3、进一步，将转氨酶清液与磷酸缓冲液混合搅拌，制备成转氨酶溶液。
4、更进一步，所述转氨酶清液浓度为0.01
5、进一步，将转氨酶溶液加入到金属离子溶液中，搅拌混合均匀后停止搅拌。
6、更进一步，将金属离子盐和磷酸吡多醛及纯水，搅拌溶解得到金属离子溶液，所述金属离子选自mn2+、ca2+、ni2+、mg2+、co2+、fe2+、cu2+，优选co2+，所述金属离子溶液浓度选自1～50mm，优选10～20mm。
7、更进一步，搅拌时间选自1～60min，优选5～15min，搅拌混合温度选自5～50℃，优选25～35℃。
8、进一步，将搅拌后得到的混合溶液在一定温度下，静置孵育一段时间，形成转氨酶纳米晶混合溶液。
9、更进一步，所述静置孵育温度选自5～50℃，优选25～35℃。
10、更进一步，所述静置孵育时间选自1～72h，优选24～48h。
11、进一步，将聚合物溶液加入到转氨酶纳米晶混合溶液中，强力机械搅拌，加入絮凝剂，形成均匀的固定化酶颗粒。
12、更进一步，所述聚合物溶液是由一定量的聚合物，加入适量的水，配置而成，所述聚合物选自海藻酸盐、壳聚糖、聚丙烯酰胺和n,n-二甲基双丙烯酰胺复合材料，优选聚丙烯酰胺和n,n-二甲基双丙烯酰胺复合材料。
13、更进一步，所述聚合物溶液浓度选自1％～50％，优选20％～30％。
14、更进一步，所述絮凝剂选自n,n,n,n-四甲基乙二胺和过硫酸铵，所述絮凝剂浓度选自0.1％～5％，优选0.6％～1.8％。
15、进一步，将固定化酶颗粒搅拌一定时间后，用纯水冲洗，即得固定化转氨酶。
16、更进一步，将固定化酶颗粒搅拌30～45min。
17、本专利技术中使用的术语定义分别如下：
18、固定化转氨酶的酶活定义为：(产物的微摩尔数/投入的固定化转氨酶克数)u/g。
19、游离转氨酶冻干粉的酶活定义为：(产物的微摩尔数/投入的游离酶冻干粉克数)u/g。
20、酶活回收率定义为：(固定化酶酶活/固定化前对应游离酶酶活)*100％。
21、转化率计算公式＝产物峰面积/(响应因子*底物峰面积+产物峰面积)*100％。
22、本专利技术的有益效果在于，本专利技术制备的固定化转氨酶，具有泄漏少、机械强度高、刚性好和使用寿命长等优点，适合做连续流管式反应，可以大大提升生产效率。另外，与现有的其他转氨酶固定化技术相比，所用材料成本极低，具有明显的经济性。
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1.一种转氨酶的固定化方法，其特征在于，先将转氨酶清液制备成转氨酶纳米晶混合溶液，再进行包埋制得固定化转氨酶，具体步骤如下：
2.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(1)中所述转氨酶清液浓度为0.01～5mg/mL，所述磷酸缓冲液浓度为1～200mM，所述磷酸缓冲液pH值为5～12。
3.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(2)中所述的金属离子溶液是将金属离子盐和磷酸吡多醛及、纯水搅拌溶解得到的，所述金属离子选自Mn2+、Ca2+、Ni2+、Mg2+、Co2+、Fe2+、Cu2+。
4.如权利要求3所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，所述金属离子选自Co2+，所述金属离子溶液浓度选自1～50mM。
5.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(3)中所述的静置孵育温度选自5～50℃，所述静置孵育时间选自1～72h。
6.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(4)中所述的聚合物溶液是将一定量的聚合物，加入适量的水配置而成，所述聚合物选自海藻酸盐、壳聚
7.如权利要求6所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，所述聚合物选自聚丙烯酰胺和N,N-二甲基双丙烯酰胺复合材料，所述聚合物溶液浓度选自1％～50％，优选20％～30％。
8.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(4)中所述的絮凝剂选自N,N,N,N-四甲基乙二胺和过硫酸铵，所述絮凝剂浓度选自0.1％～5％。
9.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(5)中所述的固定化酶颗粒搅拌30～45min。
...【技术特征摘要】
1.一种转氨酶的固定化方法，其特征在于，先将转氨酶清液制备成转氨酶纳米晶混合溶液，再进行包埋制得固定化转氨酶，具体步骤如下：
2.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(1)中所述转氨酶清液浓度为0.01～5mg/ml，所述磷酸缓冲液浓度为1～200mm，所述磷酸缓冲液ph值为5～12。
3.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(2)中所述的金属离子溶液是将金属离子盐和磷酸吡多醛及、纯水搅拌溶解得到的，所述金属离子选自mn2+、ca2+、ni2+、mg2+、co2+、fe2+、cu2+。
4.如权利要求3所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，所述金属离子选自co2+，所述金属离子溶液浓度选自1～50mm。
5.如权利要求1所述的转氨酶的固定化方法，其特征在于，步骤(3)...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：尚科生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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